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生物技术通讯 2015年第6期26卷 776-779页

作者：熊志红孙卫国杨栗坤杨秉芬张灵霞解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的:在原核系统内表达SUMO融合重组人神经生长因子β亚基(h NGF-β),并对其纯化。方法:将5'端引入了羟胺切割位点的h NGF-β基因克隆到表达载体p ET-SUMO中,IPTG诱导表达后,对表达的融合蛋白SUMO-h NGF-β包涵体进行亲和纯化,然后... 详细信息

目的:在原核系统内表达SUMO融合重组人神经生长因子β亚基(h NGF-β),并对其纯化。方法:将5'端引入了羟胺切割位点的h NGF-β基因克隆到表达载体p ET-SUMO中,IPTG诱导表达后,对表达的融合蛋白SUMO-h NGF-β包涵体进行亲和纯化,然后在变性条件下加入羟胺进行裂解,利用SUMO分子伴侣的功能与h NGF-β进行共复性,最后利用阳离子交换层析纯化获得重组h NGF-β。结果:融合蛋白SUMO-h NGF-β相对分子质量为39×103,表达量占细菌总蛋白的35%;在变性条件下经羟胺切割、共复性和阳离子纯化后,相对分子质量为14×103的重组h NGF-β复性率和纯度分别为30%和80%以上,Western印迹显示其具有良好的抗原特性。结论:h NGF-β与SUMO融合可以在原核表达系统中实现优势表达。

关键词：入神经生长因子β亚基 SUMO蛋白融合表达共复性

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结核分枝杆菌抗原对人单核细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白12表达的影响

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中国防痨杂志 2015年第4期37卷 339-343页

作者：刘艳华王若程小星解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）抗原对人单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白12（NLRP12）表达的影响，为深入研究NLRP12在结核病中的作用奠定实验基础。方法采集15例活动性肺结核患者和15名健康... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）抗原对人单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白12（NLRP12）表达的影响，为深入研究NLRP12在结核病中的作用奠定实验基础。方法采集15例活动性肺结核患者和15名健康人的抗凝血，分离外周血中单核细胞，用Mtb抗原H37Rv全菌裂解液、早期分泌靶抗原6（EAST-6）和培养分泌蛋白10（CFP-10）的抗原多肽刺激，提取单核细胞的总RNA，采用荧光定量PCR方法检测NLRP12 mRNA的表达，采用配对t检验分析刺激前后单核细胞NLRP12的表达差异。以P〈0.05为差异有统计学意义。结果全菌裂解液、EAST-6和CFP-10抗原多肽刺激后的活动性肺结核患者单核细胞与未刺激前的单核细胞相比，其NLRP12 mRNA的表达显著下调，由未刺激前的（1.8±1.26）×10^-2分别下降到（1.09±0.78）×10^-2（t=3.826，P〈0.01）和（1.14±0.87）×10^-2（t=3.695，P〈0.01）。全菌裂解液、EAST-6和CFP-10抗原多肽刺激后，健康人单核细胞中NLRP12 mRNA的表达与未刺激前相比也降低，由未刺激前的（1.65±0.99）×10^-2分别降至（1.2±0.87）×10^-2（t=1.909，P〉0.05）和（1.38±1.02）×10^-2（t=1.151，P〉0.05），差异无统计学意义。结论 Mtb抗原体外刺激能够抑制活动性肺结核患者单核细胞NLRP12的表达。

关键词：结核肺结核分枝杆菌细胞内信号肽和蛋白质类单核细胞重组融合蛋白质类

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NAP3在结核病诊断中的价值

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国际呼吸杂志 2015年第4期35卷 257-260页

作者：曹志红曹彦程小星解放军第三.九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究肺结核患者外周血单个核细胞（PBMCs）经结核特异性抗原刺激后中性粒细胞激活蛋白3（NAP3）的表达情况并与结核潜伏感染（latent tuberculosis infection，LTBI）者及非结核感染健康对照者进行比较。方法提取6例活动期肺结核患... 详细信息

目的研究肺结核患者外周血单个核细胞（PBMCs）经结核特异性抗原刺激后中性粒细胞激活蛋白3（NAP3）的表达情况并与结核潜伏感染（latent tuberculosis infection，LTBI）者及非结核感染健康对照者进行比较。方法提取6例活动期肺结核患者和6例LTB1个体PBMCs，用结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后收集细胞，采用基因芯片分析方法比较两组NAP3表达情况。然后提取60例活动期肺结核患者和60名PPD阳性健康个体（根据γ干扰素表达情况将其分成LTBI组和非结核感染健康对照组）的PBMCs，用结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测刺激前、后细胞培养液上清中NAP3的浓度。结果基因芯片分析发现活动期肺结核患者NAP3表达明显高于LTBI组（U=1．000，P=0．0043）。ELISA分析结果发现特异性抗原刺激前细胞培养液上清中3组的NAP3浓度差异无统计学意义（F=0．7341，P=0．4821），而刺激后只有活动期肺结核组和非结核感染健康对照组之间的NAP3浓度相比差异有统计学意义（P=0．002）。结论高表达的NAP3可作为诊断结核的指标之一，但是无法区分潜伏感染和活动期感染病例。

关键词：结核趋化因子中性粒细胞激活蛋白3 结核潜伏感染

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结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用

结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：梁艳王小美宋晶滢张俊仙阳幼荣许飞虹史迎昌王兰吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室 100091

目的：研究结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用,为建立结核病的免疫治疗新策略和新方案提供依据.方法：分为9组,每组10只小鼠,用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射6.4×105 CFU,感染后第3d开始,分别用生理盐水、pVAX1载体、微卡菌... 详细信息

目的：研究结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用,为建立结核病的免疫治疗新策略和新方案提供依据.方法：分为9组,每组10只小鼠,用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射6.4×105 CFU,感染后第3d开始,分别用生理盐水、pVAX1载体、微卡菌苗、Ag85A DNA疫苗、Rv1291c DNA疫苗、Rv1419 DNA疫苗、Rv2903c DNA疫苗、Rv2190c DNA疫苗和Rv2223c DNA疫苗治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次,在免疫结束后2周杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数.

关键词：结核分枝杆菌 DNA疫苗治疗

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结核分枝杆菌潜伏感染的研究

结核分枝杆菌潜伏感染的研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：吴雪琼白雪娟梁艳阳幼荣张俊仙王兰解放军第三○九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室 100091

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一，但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明，存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究：(1)应用PPD和E... 详细信息

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一，但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明，存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究：(1)应用PPD和ELISPOT技术在907例入伍新兵中开展LTBI的流行病学研究;(2)结核分枝杆菌潜伏机制的研究;(3) LTBI检测新方法的研究;(4) LTBI发病率的研究;(5)结核分枝杆菌潜伏感染抗原DNA疫苗免疫原性的研究。本文也试图阐述目前存在的问题及其展望。

关键词：结核分枝杆菌潜伏感染诊断

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结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用

结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用

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第十届全国免疫学学术大会

作者：梁艳王小美宋晶滢张俊仙阳幼荣许飞虹史迎昌王兰吴雪琼解放军第三O九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的 :研究结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用,为建立结核病的免疫治疗新策略和新方案提供依据。方法 :分为9组,每组10只小鼠,用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射6.4×105 CFU,感染后第3d开始,分别用生理盐水、p VAX1载体、微卡... 详细信息

目的 :研究结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫治疗作用,为建立结核病的免疫治疗新策略和新方案提供依据。方法 :分为9组,每组10只小鼠,用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射6.4×105 CFU,感染后第3d开始,分别用生理盐水、p VAX1载体、微卡菌苗、Ag85A DNA疫苗、Rv1291c DNA疫苗、Rv1419 DNA疫苗、Rv2903c DNA疫苗、Rv2190c DNA疫苗和Rv2223c DNA疫苗治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次,在免疫结束后2周杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果:与生理盐水组比较,微卡菌苗组、Ag85A DNA组、Rv1291c DNA组、Rv1419 DNA组、Rv2903c DNA组、Rv2190c DNA组和Rv2223c DNA组肺病变有不同程度减轻,病变局限,部分区域肺泡结构完整、清晰,细胞分布均匀。与生理盐水组相比,Ag85A DNA组、Rv1291c DNA组、Rv1419 DNA组和Rv2190c DNA组每克肺菌落计数依次减少0.50 log10(p<0.05)、0.46 log10(p<0.05)、0.35 log10、0.24 log10;每克肝菌落计数依次减少0.40log10(p<0.05)、0.36 log10、0.43 log10(p<0.05)、0.35 log10。结论 :Ag85A DNA疫苗、Rv1291c DNA疫苗和Rv1419 DNA疫苗对小鼠结核病均具有较好的治疗效果。

关键词：结核分枝杆菌 DNA疫苗治疗

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结核分枝杆菌潜伏感染的研究

结核分枝杆菌潜伏感染的研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：吴雪琼白雪娟梁艳阳幼荣张俊仙王兰解放军第三O九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一,但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明,存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究:(1)应用PPD和ELIS... 详细信息

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一,但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明,存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究:(1)应用PPD和ELISPOT技术在907例入伍新兵中开展LTBI的流行病学研究;(2)结核分枝杆菌潜伏机制的研究;(3)LTBI检测新方法的研究;(4)LTBI发病率的研究;(5)结核分枝杆菌潜伏感染抗原DNA疫苗免疫原性的研究。本文也试图阐述目前存在的问题及其展望。

关键词：结核分枝杆菌潜伏感染诊断

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结核分枝杆菌Rv3287c的克隆、表达、纯化

结核分枝杆菌Rv3287c的克隆、表达、纯化

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全国结核病诊疗与防控暨第二届抗结核药物不良反应防治新进展研讨会

作者：李江英白雪娟梁艳阳幼荣张俊仙吴雪琼 100091 北京解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的制备Rv3287c重组蛋白,以期发现一种新型的针对潜伏感染的诊断标记物或候选疫苗.方法基因合成结核分枝杆菌Rv3287c,复苏穿刺菌,提取质粒puc57-rv3287c,双酶切凝胶回收rv3287c基因片段,连接到pET30a载体上,构建pET30a-rv3287c重组质...

目的制备Rv3287c重组蛋白,以期发现一种新型的针对潜伏感染的诊断标记物或候选疫苗.方法基因合成结核分枝杆菌Rv3287c,复苏穿刺菌,提取质粒puc57-rv3287c,双酶切凝胶回收rv3287c基因片段,连接到pET30a载体上,构建pET30a-rv3287c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定,经IPTG诱导表达后,应用Ni+-NTA亲和柱纯化重组蛋白.结果成功构建pET30a-rv3287c重组质粒,得到重组蛋白Rv3287c,其在*** BL21 (DE3)中主要以包涵体形式表达,分子量(15kDa)与预期相符.结论成功制备结核分枝杆菌Rv3287c重组蛋白为结核潜伏感染的预防和控制奠定实验基础.

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结核分枝杆菌Rv0574c的克隆、表达、纯化

结核分枝杆菌Rv0574c的克隆、表达、纯化

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全国结核病诊疗与防控暨第二届抗结核药物不良反应防治新进展研讨会

作者：白雪娟李江英梁艳阳幼荣张俊仙吴雪琼 100091 北京解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的构建结核分枝杆菌Rv0574c蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-30a载体,构建pET30a-rv0574c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳...

目的构建结核分枝杆菌Rv0574c蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-30a载体,构建pET30a-rv0574c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定,经IPTG诱导表达后,应用Ni+-NTA亲和柱纯化重组蛋白.结果成功构建pET30a-rv0574c重组质粒,得到重组蛋白Rv0574c,其在*** BL21 (DE3)中主要以包涵体形式表达,分子量(41kDa)与预期相符.结论高纯度结核分枝杆菌Rv0574c重组蛋白的获得为研究结核潜伏感染在结核病血清诊断中的价值.

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γ干扰素释放试验临床应用的价值、问题与展望

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中国防痨杂志 2015年第7期37卷 722-727页

作者：吴雪琼梁艳王国治解放军第三O九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 中国食品药品检定研究院菌苗一室

我国的结核病疫情和结核分枝杆菌（Mtb）感染情况都相当严重。潜伏结核感染（latenttubercu-losisinfection，LTBI）是宿主感染Mtb后、没有结核病临床表现和影像学改变的一种带菌状态。

关键词：临床应用释放试验 γ干扰素结核病疫情价值结核分枝杆菌潜伏结核感染影像学改变

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