目的利用高分辨质谱鉴定银丹心脑通软胶囊的化学成分,与网络药理学研究结合,探讨银丹心脑通软胶囊“心脑同治”的活性成分及其潜在分子作用机制。方法基于UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS鉴定出的银丹心脑通软胶囊化学成分;通过TC...
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目的利用高分辨质谱鉴定银丹心脑通软胶囊的化学成分,与网络药理学研究结合,探讨银丹心脑通软胶囊“心脑同治”的活性成分及其潜在分子作用机制。方法基于UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS鉴定出的银丹心脑通软胶囊化学成分;通过TCMSP和SwissADME数据库,以口服利用度≥30%、类药性≥0.18和胃肠道吸收得分为“High”、类药性至少通过3个“Yes”来筛选活性成分,再检索活性成分的潜在作用靶点;通过OMIM、DisGeNET、GeneCards、TTD和PharmGKB数据库获取与心脑血管疾病相关靶基因。使用Venny软件获得两者的交集靶点,采用Cytoscape3.9.1分析软件结合STRING数据库对交集靶点进行蛋白互作网络分析和“药物-活性成分-靶点-疾病”网络构建,确定核心成分与靶点。利用DAVID数据库对银丹心脑通软胶囊治疗心脑血管疾病的潜在靶基因进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书富集分析(KEGG)预测其作用机制。最后将度值排名前5的靶点与主要活性成分进行分子对接模拟以验证网络药理学结果。结果通过UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS技术鉴定出银丹心脑通软胶囊中82个化学成分,主要包括黄酮类、有机酸类、菲醌类和二萜内酯类化合物;经TCMSP、SwissADME数据库筛选得到活性成分34个,如槲皮素、异樱花亭、二氢丹参酮I等,相对应的靶点389个,进一步筛选出治疗心脑血管疾病相关的潜在靶基因249个。GO和KEGG富集分析显示,银丹心脑通软胶囊的活性成分可能主要通过脂质与动脉粥样硬化通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、AGE-RAGE、IL-17、PI3K-Akt、HIF-1、TNF等通路来发挥治疗心脑血管疾病的作用。分子对接证实STAT3、HSP90AA1等与二氢丹参酮I、山柰酚、木犀草素等具有较高的亲和力。结论本研究初步预测了银丹心脑通软胶囊“心脑同治”其作用机制与动脉粥样硬化、炎症因子、细胞凋亡和氧化应激等方面有关,为后续作用机制的深度分析及临床应用提供科学依据。
探讨七叶亭(esculetin,Esc)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。采用TNBC细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468为实验模型,通过MTT法、细胞形态学观察、平板克隆形成法评估Esc对TNB...
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探讨七叶亭(esculetin,Esc)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。采用TNBC细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468为实验模型,通过MTT法、细胞形态学观察、平板克隆形成法评估Esc对TNBC细胞增殖的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测Esc对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测七叶亭对细胞凋亡的影响;Western blot法检测Janus激酶-2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路蛋白(JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3)以及凋亡相关蛋白包括天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,Caspase-9)、Caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribosepolymerase,PARP)、Cleaved Caspase-9 、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP的表达。结果表明,与对照组(control,Con)相比,Esc能显著抑制TNBC细胞的增殖和转移(P<0.001);Western blot结果显示,与Con相比,Esc能使JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达显著下调,上调了Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP的蛋白表达(P<0.05);Hoechst染色和流式细胞术结果显示,与Con相比,Esc能显著诱导TNBC细胞发生凋亡,JAK2/STAT3抑制剂(WP1066)与Esc协同作用后,进一步增加了TNBC细胞凋亡(P<0.01)。综上,Esc可能通过抑制JAK2/STAT3通路,进而激活Caspase级联反应诱导TNBC细胞凋亡。
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