检索结果-内蒙古大学图书馆

参芎葡萄糖注射液通过激活PI3K/AKT通路拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡

中国中药杂志 2019年第17期44卷 3773-3779页

作者：陆定艳李靖孙佳薛维娜何彬李勇军王永林林昌虎刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,An... 详细信息

探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin/PI法检测细胞凋亡率,基因芯片技术检测细胞表达谱的变化,荧光定量PCR技术(qRTPCR)检测PIK3CA,Bcl-2,Bax,caspase-3,GAPDH mRNA的表达,Western blot法检测PIK3CA,AKT,P-AKT,Bcl-2,Bax,caspase-3蛋白的表达水平,用试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和丙二醛(MDA)含量。结果显示,不同浓度的参芎葡萄糖注射液可显著提高H2O2诱导的H9c2细胞存活率(P<0. 01),明显逆转H2O2诱导的细胞凋亡情况(P<0. 01)。芯片实验发现,参芎葡萄糖注射液处理后,H9c2细胞有138个基因表达发生改变,其中与PI3K/AKT通路相关的PIK3CA差异表达倍数较高,为3. 59倍。qRT-PCR和Western blot结果表明,参芎葡萄糖注射液可下调H2O2处理后H9c2细胞中caspase-3的mRNA和蛋白表达水平(P<0. 01),上调PIK3CA和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平(P<0. 01),并上调AKT蛋白的磷酸化水平(P<0. 01)。在PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用下,参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2细胞损伤作用显著降低。结果表明,参芎葡萄糖注射液可能是通过调控PI3K/AKT信号通路来抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。

关键词：参芎葡萄糖注射液 H9c2细胞细胞凋亡基因芯片 PI3K/AKT通路

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GC-MS分析三种不同方法提取大果木姜子鲜果、干果挥发油成分

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中药材 2022年第1期45卷 123-129页

作者：晏婷周祖英骆弟元迟明艳王爱民黄勇郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州益佰制药股份有限公司贵州贵阳550008

目的:采用GC-MS探讨不同方法提取大果木姜子鲜果、干果中挥发油化学成分的差异。方法:采用水蒸气蒸馏法、索氏提取法、同时蒸馏萃取法三种不同方法提取大果木姜子鲜果、干果中挥发油,通过GC-MS分别对其挥发油化学成分进行分析与鉴定,通... 详细信息

目的:采用GC-MS探讨不同方法提取大果木姜子鲜果、干果中挥发油化学成分的差异。方法:采用水蒸气蒸馏法、索氏提取法、同时蒸馏萃取法三种不同方法提取大果木姜子鲜果、干果中挥发油,通过GC-MS分别对其挥发油化学成分进行分析与鉴定,通过峰面积归一化法计算各成分的相对含量。结果:采用三种提取方法所得大果木姜子鲜果、干果中挥发油的化学成分存在一定差异,从水蒸气蒸馏提取大果木姜子鲜果、干果挥发油中分别鉴定出44、37个成分,索氏提取法中鉴定出15、13个成分,同时蒸馏萃取法分别鉴定出41、36个成分。结论:三种不同提取方法对大果木姜子鲜果、干果挥发油的提取效果影响显著,研究其具体差异可为大果木姜子药材进一步研究提供参考。

关键词：大果木姜子挥发油提取方法 GC-MS

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银杏黄酮苷元联合阿霉素协同抗肝癌的细胞代谢组学研究

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中国中药杂志 2022年第18期47卷 5040-5051页

作者：陆苑王艳丽宋忠军朱晓青刘春花陈际宇李勇军何艳贵州医科大学附属医院临床试验研究中心贵州贵阳550001 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)联合阿霉素(doxorubicin,DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指... 详细信息

该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)联合阿霉素(doxorubicin,DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指数(combination index,CI)对两者的联合用药进行评价。将实验分为对照组(CON)、DOX组、GA组、联合用药组(GDOX),通过代谢组学策略探寻联合用药较单独用药后显著改变的代谢标志物,分析可能的代谢通路和作用机制。结果显示,以30μg·mL^(-1)GA与0.5μmol·LDOX作为联合给药浓度,CI为0.808,表明两者联合发挥协同抗肿瘤作用。代谢组学分析鉴定出L-精氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸等23种代谢标志物,以氨基酸类物质为主。与CON组相比,DOX治疗后22种代谢标志物被显著下调,GA治疗后17种代谢标志物被显著下调。相较于DOX和GA组,GDOX联合用药进一步下调了这些代谢标志物在肝癌中的水平,这可能是两者联合起到增效作用的原因。通路富集分析中找到5条关键代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,苯丙氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,β-丙氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解。这表明GA联合DOX的协同抗肿瘤作用,可能是通过干预多种氨基酸的代谢,进而影响肿瘤细胞的能量供应实现。

关键词：银杏黄酮苷元阿霉素 H22细胞肝细胞癌细胞代谢组学协同作用

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定

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食品与生物技术学报 2021年第7期40卷 42-49页

作者：张煜彬叶路芬吴忠秀薛维娜何彬杨畅李勇军王永林刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 详细信息

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。

关键词：大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化亲和层析蛋白质印迹法

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正常和动脉粥样硬化大鼠体内银杏黄酮苷元药代动力学差异及相关机制研究

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中国中药杂志 2024年第18期49卷 5025-5031页

作者：李琴陈星懿陆苑陈际宇陈丽华宋忠军李勇军何艳贵州医科大学附属医院药物临床试验机构办公室贵州贵阳550001 遵义医科大学基础药理教育部重点实验室贵州遵义563006 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

比较正常和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠口服银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)的药代动力学,以及探究产生差异的相关机制研究。采用高脂饲料制备大鼠AS模型,正常和AS模型大鼠口服给予200 mg·kg^(-1)GA,于不同时... 详细信息

比较正常和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠口服银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)的药代动力学,以及探究产生差异的相关机制研究。采用高脂饲料制备大鼠AS模型,正常和AS模型大鼠口服给予200 mg·kg^(-1)GA,于不同时间点取血,分离血浆,蛋白沉淀法处理样品后,采用UPLC-MS/MS测定正常组和模型组大鼠血浆中槲皮素、山柰酚、异鼠李素药物浓度,使用WinNonlin 8.2软件计算相关药代动力学参数。采用Western blot分析检测肝脏组织中CYP1A2、CYP3A4、CYP2C19、CYP2C9的表达,采用RT-PCR检测小肠绒毛中多药耐药基因1(multiple drug resistance 1,MDR1)在mRNA水平的表达。结果显示,模型组槲皮素、山柰酚和异鼠李素的T_(max)分别为正常组的2.00、2.50(P<0.05)、2.53倍,C_(max)分别为正常组的46.98%、77.09%、57.19%(均P<0.01),t_(1/2)分别为正常组的1.76(P<0.05)、1.10、2.81(P<0.01)倍。与正常组相比,AS大鼠肝脏中CYP1A2与CYP2C19表达分别降低38%、35%(P<0.05),CYP3A4表达升高1.36倍(P<0.05),而CYP2C9表达无显著差异;AS大鼠小肠绒毛中MDR1 mRNA表达升高1.7倍(P<0.05)。综上所述,槲皮素、山柰酚和异鼠李素在AS大鼠中的口服吸收程度减少,吸收速度和体内代谢速度减慢,这可能与其小肠P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的高表达以及肝脏组织中CYP1A2、CYP3A4、CYP2C19表达改变有关。

关键词：银杏黄酮苷元动脉粥样硬化药代动力学 CYP450s P-gp

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贵州产红孩儿药材的质量标准提升研究

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中国药房 2020年第12期31卷 1458-1462页

作者：刘利琴彭潇马雪李勇军刘春花潘洁王永林王爱民贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:为提升贵州产红孩儿药材的质量标准提供参考。方法:收集5批贵州产红孩儿药材,观察药材粉末的显微特征,参照2015年版《中国药典》(四部)通则相关方法,采用薄层色谱法(TLC)对红孩儿药材进行定性鉴别并测定其水分、总灰分及水溶性浸... 详细信息

目的:为提升贵州产红孩儿药材的质量标准提供参考。方法:收集5批贵州产红孩儿药材,观察药材粉末的显微特征,参照2015年版《中国药典》(四部)通则相关方法,采用薄层色谱法(TLC)对红孩儿药材进行定性鉴别并测定其水分、总灰分及水溶性浸出物的含量;采用高效液相色谱法测定红孩儿药材中芦丁的含量。结果:红孩儿药材粉末呈棕褐色,石细胞类方形、类多角形或不规则形;淀粉粒众多,复粒稀少;可见导管、草酸钙方晶/簇晶;在与红孩儿对照药材TLC图谱相同位置处显相同荧光斑点。5批红孩儿药材中水分含量为10.15%~11.41%,总灰分含量为8.70%~12.59%,水溶性浸出物含量为16.91%~19.58%。芦丁检测质量浓度的线性范围为18.47~147.8μg/mL(r=0.9998),重复性、中间精密度、稳定性试验(8 h)的RSD均小于3.0%,平均加样回收率为99.39%~100.29%(RSD为0.23%~2.59%,n=3);5批红孩儿药材中芦丁的含量为0.102%~0.198%。结论:药材水分、总灰分含量分别不得超过13.0%、14.0%,水溶性浸出物、芦丁含量分别不得低于15.0%、0.080%。本研究所建质量标准可用于红孩儿药材的质量控制。

关键词：红孩儿质量标准显微观察水分总灰分水溶性浸出物芦丁含量测定

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PCR法快速鉴别川贝母真伪

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药物分析杂志 2019年第10期39卷 1844-1851页

作者：刘香香李靖张煜彬彭高发兰燕宇李勇军王永林杨畅刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:建立聚合酶链式反应法(PCR法)快速鉴别川贝母真伪。方法:分析川贝母内转录间隔区1(ITS1)序列的特点,比较川贝母及其常见伪品的序列差异,设计了1对川贝母特异性扩增引物(CBM-SP引物),并用该引物对川贝母真品、伪品以及市场上购买的... 详细信息

目的:建立聚合酶链式反应法(PCR法)快速鉴别川贝母真伪。方法:分析川贝母内转录间隔区1(ITS1)序列的特点,比较川贝母及其常见伪品的序列差异,设计了1对川贝母特异性扩增引物(CBM-SP引物),并用该引物对川贝母真品、伪品以及市场上购买的川贝母样品进行了鉴别。同时用《中华人民共和国药典》2015年版收录的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)进行了验证。结果:用CBM-SP引物进行PCR鉴别,正品川贝母扩增出1条200 bp左右的条带,伪品未出现扩增条带。将该法应用于9批贝母商品药材的鉴定,可将川贝母及其伪品区别开来。本法实验结果与药典收录的PCRRFLP法实验结果一致。结论:本文建立的川贝母PCR快速鉴别法适用于川贝母及其常见伪品的真伪鉴别。

关键词：聚合酶链式反应(PCR) DNA分子鉴别内转录间隔区(ITS) 川贝母鉴定特异性引物

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酢浆草的HPLC指纹图谱建立及2种有效成分的含量测定

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中国药房 2020年第6期31卷 656-660页

作者：李小双李银刘文静王广成郑林陈思颖李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵阳550004

目的:建立酢浆草的高效液相(HPLC)指纹图谱,并同时测定其中异牡荆素、当药黄素的含量。方法:采用HPLC法。色谱柱为ACE Excel-5-C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1 mL/min,柱温为35℃,检测波长为280 nm,进样量为10μL... 详细信息

目的:建立酢浆草的高效液相(HPLC)指纹图谱,并同时测定其中异牡荆素、当药黄素的含量。方法:采用HPLC法。色谱柱为ACE Excel-5-C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1 mL/min,柱温为35℃,检测波长为280 nm,进样量为10μL。以异牡荆素峰为参照,绘制12批酢浆草药材样品的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价,确定共有峰。按上述色谱条件同法测定异牡荆素、当药黄素的含量。结果:12批酢浆草药材样品共有19个共有峰,相似度均大于0.89,同时指认异牡荆素、当药黄素2个共有峰。异牡荆素、当药黄素检测质量浓度的线性范围分别为3.91~117.36μg/mL(r=0.9994)、9.88~118.56μg/mL(r=0.9992);定量限分别为0.675、3.587μg/mL;检测限分别为0.205、1.087μg/mL;精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于2%;加样回收率分别为95.46%~99.10%(RSD=1.23%,n=6)、95.34%~101.23%(RSD=2.74%,n=6);平均含量分别为0.227~1.654、0.641~2.052 mg/g。结论:所建指纹图谱可用于酢浆草药材的质量控制;含量测定方法简便、准确,可用于同时测定其中2种成分的含量。

关键词：酢浆草高效液相色谱法指纹图谱异牡荆素当药黄素含量测定

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毛大丁草抗卵清蛋白诱导的小鼠支气管哮喘作用的活性部位筛选

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中国现代应用药学 2022年第9期39卷 1142-1148页

作者：刘春花游景瑞周坤孙佳陆苑潘洁李勇军王永林刘亭贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室/民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵阳550004

目的通过卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的支气管哮喘小鼠模型,筛选毛大丁草抗哮喘的活性部位。方法采用D101大孔吸附树脂法对毛大丁草50%乙醇提取物进行分段富集,依次洗脱得到水、60%乙醇、95%乙醇3个洗脱部位。小鼠通过腹腔注射OVA致... 详细信息

目的通过卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的支气管哮喘小鼠模型,筛选毛大丁草抗哮喘的活性部位。方法采用D101大孔吸附树脂法对毛大丁草50%乙醇提取物进行分段富集,依次洗脱得到水、60%乙醇、95%乙醇3个洗脱部位。小鼠通过腹腔注射OVA致敏、雾化吸入OVA激发来复制哮喘动物模型,在激发阶段连续6 d进行灌胃给药治疗。采用行为学评分考察不同部位对哮喘行为学的影响,利用酶联免疫吸附法测定血清、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-5的浓度和血清免疫球蛋白IgE的浓度,采用HE染色对肺组织进行组织病理学评价。结果模型组小鼠哮喘症状评分升高,血清中IgE和IL-5的水平显著升高,BALF中IL-5的水平显著升高;与模型组比较,60%乙醇段高剂量组小鼠哮喘症状明显改善,血清中IL-5的水平显著降低,BALF中IL-5的水平也显著降低。结合病理学切片观察,60%乙醇段治疗的小鼠较之模型组小鼠肺泡间隔增厚程度降低,血管周围和支气管周围炎症细胞浸润显著减少。结论毛大丁草50%乙醇提取物的60%乙醇洗脱部位为其抗哮喘的活性部位,其化学成分主要是酚酸类、黄酮类和香豆素类。

关键词：毛大丁草支气管哮喘卵清蛋白肺泡灌洗液活性部位

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HPLC法同时测定珠芽景天药材中8种黄酮苷类成分的含量

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中国药房 2020年第12期31卷 1436-1439页

作者：吴莹莹雷艳姚成芬马雪黄勇李勇军林昌虎贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵阳550004

目的:建立同时测定珠芽景天药材中8种黄酮苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法测定珠芽景天药材中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-α-L-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(KGGR)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡... 详细信息

目的:建立同时测定珠芽景天药材中8种黄酮苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法测定珠芽景天药材中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-α-L-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(KGGR)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(KGR)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(QRR)、BulbiferumosideⅡ、山柰酚-3-O-(6-香豆酰基)-β-D-葡萄糖-(1→2)-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(KcGGR)、山柰酚-3-O-(2-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(KGRR)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷-7-O-α-L-鼠李糖苷(KRR)、山柰酚-3-O-(6″-乙酰基-β-D-葡萄糖)-7-O-α-L-鼠李糖苷(KaGR)的含量。色谱柱为Waters CORTECS C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为35℃,进样量为5μL。结果:上述8种成分均达到基线分离,检测进样量的线性范围分别为0.013~0.052、0.005~0.018、0.008~0.031、0.010~0.042、0.009~0.038、0.008~0.030、0.009~0.037、0.032~0.130μg(r均不低于0.9990);检测限分别为0.08、0.14、0.11、0.21、0.42、0.35、0.23、0.28μg/mL,定量限分别为0.25、0.47、0.38、0.69、1.40、1.17、0.77、0.93μg/mL;精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于3%(n为6或7);平均加样回收率为99.67%~104.20%(RSD为0.17%~1.59%,n=6)。13批样品中,上述8种成分的平均含量分别为0.8938、0.3126、0.4908、0.9649、0.7512、0.5022、0.6062、1.9157 mg/g(n=3)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定珠芽景天药材中8种黄酮苷类成分的含量。

关键词：珠芽景天高效液相色谱法黄酮苷类成分含量测定

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