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表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

细胞与分子免疫学杂志 2021年第1期37卷 73-78页

作者：张煜彬吴忠秀何彬杨畅李勇军刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓... 详细信息

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。

关键词：表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ) PD0721 间接ELISA 单链抗体

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基于UHPLC-Orbitrap Exploris 240的云实皮化学成分分析

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贵州医科大学学报 2023年第12期48卷 1459-1467页

作者：陈伟杨帅肖金超郑林黄勇迟明艳贵州益佰制药股份有限公司贵州贵阳550008 国家苗药工程技术研究中心贵州贵阳550008 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室&贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Orbitrap Exploris 240)系统分析云实皮的化学成分。方法将云实皮药材进行提取并处理后,经UHPLC-Orbitrap Exploris 240分析,运用Compound Discoverer及Xcalibur软件处理... 详细信息

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Orbitrap Exploris 240)系统分析云实皮的化学成分。方法将云实皮药材进行提取并处理后,经UHPLC-Orbitrap Exploris 240分析,运用Compound Discoverer及Xcalibur软件处理质谱数据,并与数据库中相应化合物的标准图谱和碎片信息进行比对,结合相关文献及对照品,对云实皮中的化学成分进行分析。结果从云实皮中共分析出59个化学成分,主要包括黄酮类、酚类、有机酸类及其他类化学成分。结论建立的方法可全面、快速地分析云实皮的化学成分,可为云实皮后续的药效物质基础及质量控制研究提供一定依据。

关键词：云实皮超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱化学成分黄酮类酚类有机酸类定性分析

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丹参-川芎嗪配伍前后对急性心肌缺血大鼠体内排泄及Ⅱ相代谢酶的影响

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贵州医科大学学报 2023年第11期48卷 1315-1322页

作者：孙佳李容勾健潘文琪陆苑刘春花黄勇刘亭贵州医科大学、贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学临床医学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

目的研究丹参-川芎嗪配伍前后对急性心肌缺血(AMI)大鼠体内排泄及Ⅱ相代谢酶的影响。方法通过大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素复制AMI模型,尾静脉注射参芎葡萄糖注射液(SGI组)、丹参注射液(DGI组)以及川芎嗪注射液(LGI组)后,收集不同时间... 详细信息

目的研究丹参-川芎嗪配伍前后对急性心肌缺血(AMI)大鼠体内排泄及Ⅱ相代谢酶的影响。方法通过大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素复制AMI模型,尾静脉注射参芎葡萄糖注射液(SGI组)、丹参注射液(DGI组)以及川芎嗪注射液(LGI组)后,收集不同时间段的尿液、粪便,UPLC-MS/MS法测定丹参素、川芎嗪的含量;Western blot检测各组大鼠肝脏中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6(UGT1A6)酶的表达情况。结果丹参素主要经尿液排泄,在尿液中的累积排泄率为31.35%~33.27%,在粪便中的累计排泄率为4.52%~6.08%;川芎嗪在尿液、粪便中的累积排泄率较低,均不足1%;与DGI组相比,SGI组中UGT1A1和UGT1A6的表达增加(P<0.05,P<0.01);与LGI组相比,SGI组中UGT1A6的表达显著增加(P<0.001)。结论配伍后介导川芎嗪Ⅱ相代谢的UGT1A1和UGT1A6酶表达升高,使川芎嗪的原型排泄量降低。

关键词：参芎葡萄糖注射液配伍急性心肌缺血排泄差异 Ⅱ相代谢酶

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金骨莲胶囊对炎症模型大鼠的抗炎作用及机制研究

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中国药房 2021年第9期32卷 1077-1082页

作者：付志丽蒲健李龚路谭丹郑林李勇军黄勇贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州护理职业技术学院药剂系贵阳551300 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州益佰制药股份有限公司贵阳550004

目的:研究金骨莲胶囊对炎症模型大鼠的抗炎作用及机制。方法:将48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、金骨莲胶囊低、中、高剂量组(0.66、1.32、2.64 g/kg)和地塞米松组(阳性对照,0.945 mg/kg),每组8只。空白对照组和模型组大鼠灌胃等... 详细信息

目的:研究金骨莲胶囊对炎症模型大鼠的抗炎作用及机制。方法:将48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、金骨莲胶囊低、中、高剂量组(0.66、1.32、2.64 g/kg)和地塞米松组(阳性对照,0.945 mg/kg),每组8只。空白对照组和模型组大鼠灌胃等体积水,其余各组大鼠灌胃相应药物,每天给药2次,连续3天。末次给药后30 min,模型组和给药组大鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)以复制炎症模型。腹腔注射6 h后,于大鼠尾静脉取血,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、前列腺素E(2 PGE2)的含量;测定大鼠肺组织湿质量/干质量(W/D)比值;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠肺组织的病理学形态变化;采用逆转录-聚合酶链式反应法检测大鼠肺组织中TNF-α、IL-6、PGE2、IL-1βmRNA的表达水平;采用Western blot法检测大鼠肺组织中核因子κB(NF-κB)p65蛋白的磷酸化水平和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2的含量,肺组织W/D比值,肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 mRNA的表达水平和NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著升高,IκBα蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);大鼠肺组织中大量肺泡萎缩塌陷、壁增厚,可见肺实质化及大量炎症细胞浸润。与模型组比较,金骨莲胶囊各剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-1β(低剂量组除外)、IL-6、PGE2的含量,以及肺组织中TNF-α(低剂量组除外)、IL-1β、IL-6(低、高剂量组除外)、PGE2 mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);金骨莲胶囊高剂量组大鼠肺组织W/D比值显著降低(P<0.05或P<0.01);金骨莲胶囊中剂量组大鼠肺组织中NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),IκBα蛋白表达水平显著升高(P<0.05);大鼠肺泡结构较为清晰、壁轻度增厚,并见少量炎症细胞浸润。结论:金骨莲胶囊对炎症模型大鼠具有良好的抗炎作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

关键词：金骨莲胶囊抗炎作用炎症因子核因子κB信号通路

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碱促进下空气氧化制备α-芳甲酰基硫代酰胺的便捷方法

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有机化学 2021年第1期41卷 370-375页

作者：王聪姚瑶瑶谢珺王建塔王飞清张吉泉汤磊贵州医科大学药学院贵阳550025 贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550014 贵州中医药大学第一附属医院贵阳550001 贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心贵阳550004

报道了一种实用的空气氧化制备α-芳甲酰基硫代酰胺的方法.在空气氛围下,以K_(2)CO_(3)为碱,二甲基亚砜(DMSO)为溶剂,120℃条件下α-苄基硫代酰胺经氧化以42%~85%的产率得到α-芳甲酰基硫代酰胺.该反应无需金属参与,具有良好的底物适用... 详细信息

报道了一种实用的空气氧化制备α-芳甲酰基硫代酰胺的方法.在空气氛围下,以K_(2)CO_(3)为碱,二甲基亚砜(DMSO)为溶剂,120℃条件下α-苄基硫代酰胺经氧化以42%~85%的产率得到α-芳甲酰基硫代酰胺.该反应无需金属参与,具有良好的底物适用性和原子经济性,为α-芳甲酰基硫代酰胺的合成提供了一种高效、经济、绿色、简便的方法.

关键词：空气二甲基亚砜(DMSO) K_(2)CO_(3) 绿色氧化 α-芳甲酰基硫代酰胺

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定

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食品与生物技术学报 2021年第7期40卷 42-49页

作者：张煜彬叶路芬吴忠秀薛维娜何彬杨畅李勇军王永林刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 详细信息

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。

关键词：大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化亲和层析蛋白质印迹法

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杨梅素糖苷衍生物的合成及其抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2022年第8期47卷 798-807页

作者：吴光旭吴红林李吉顺李天磊吴松潘卫东贵州医科大学药学院/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550025 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵阳550014 中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所天然产物活性物质与功能国家重点实验室北京100050

目的设计合成杨梅素类糖苷衍生物,并进行抗菌活性研究。方法以天然产物杨梅苷为起始原料,经过保护基策略、糖苷化反应、酯化反应制备得到一系列新型半乳糖苷衍生物,对杨梅素类衍生物进行了抑菌活性研究。结果以杨梅苷为原料,设计合成了1... 详细信息

目的设计合成杨梅素类糖苷衍生物,并进行抗菌活性研究。方法以天然产物杨梅苷为起始原料,经过保护基策略、糖苷化反应、酯化反应制备得到一系列新型半乳糖苷衍生物,对杨梅素类衍生物进行了抑菌活性研究。结果以杨梅苷为原料,设计合成了14个杨梅素类衍生物,其中包含有8个未见文献报道的新型糖苷化合物,其结构经核磁、ESI-MS进行了确证。体外抗菌活性结果显示,8个杨梅素衍生物具有较杨梅素和杨梅苷更强的抗菌活性,其中,化合物9a-1~9a-4对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抗菌活性MIC值为1~8μg/mL。结论本研究首次以杨梅苷作为原料,设计了新的合成路线,并对合成中的关键反应条件进行了优化,构建了一条高效快捷的杨梅素衍生物的制备方法。化合物的初步活性结果显示,黄酮醇3位羟基半乳糖修饰可以显著提高杨梅素的抗菌活性,为杨梅素的进一步抗菌化合物的寻找提供了新的线索。

关键词：黄酮杨梅素糖苷衍生物合成与设计抗菌活性

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云实属植物化学成分、药理作用及质量控制研究进展

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药物评价研究 2021年第2期44卷 424-431页

作者：袁丽刘慧黄勇王爱民巩仔鹏李月婷陈思颖郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

云实属Caesalpinia L.植物资源丰富,主要分布在热带和亚热带地区,具有很高的药用价值。目前,已经从云实属植物中分离出的化学成分主要包括黄酮类和萜类两大类,药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗疟等药理作用。近年来,关于云实属植物... 详细信息

云实属Caesalpinia L.植物资源丰富,主要分布在热带和亚热带地区,具有很高的药用价值。目前,已经从云实属植物中分离出的化学成分主要包括黄酮类和萜类两大类,药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗疟等药理作用。近年来,关于云实属植物的质量控制研究比较单薄,不能全面反映药材质量标准。因此,系统综述了该属植物化学成分、药理作用和质量控制研究进展,以期为云实属植物药用活性成分及其作用机制的研究、资源的充分利用、新药开发提供依据。

关键词：云实属化学成分药理作用质量控制

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五倍子单宁酸中没食子酸的去除及其含量测定

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广西大学学报（自然科学版） 2022年第1期47卷 229-234页

作者：李志遥李珂张妮任海宋俊蓉王绍江陈超潘卫东贵州大学药学院贵州贵阳550002 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550014 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州省天然药物工程研究中心贵州贵阳550014 贵阳单宁科技有限公司贵州贵阳550001

单宁酸是五倍子提取物中的主要成分,被广泛应用于医药、食品、日化等方面。但由常规方法制备的单宁酸中常含有没食子酸杂质,影响产品的品质和应用。为了提高五倍子单宁酸提取物的纯度,以单宁酸为原料、没食子酸含量为考察指标,采用简单... 详细信息

单宁酸是五倍子提取物中的主要成分,被广泛应用于医药、食品、日化等方面。但由常规方法制备的单宁酸中常含有没食子酸杂质,影响产品的品质和应用。为了提高五倍子单宁酸提取物的纯度,以单宁酸为原料、没食子酸含量为考察指标,采用简单易得的无机碱(碳酸氢钠)选择性去除没食子酸,对单宁酸的提纯工艺进行优化。对优化后的工艺进行放大实验,并考察该方法的适用性。结果表明:纯化前单宁酸中没食子酸质量分数为2.47%,纯化后没食子酸质量分数为0.15%,且该工艺放大至160 kg的规模下仍能够实现重复。本纯化工艺操作简便、经济性好,能够实现高纯度单宁酸的高效制备,具有显著的应用前景和实用价值。

关键词：单宁酸没食子酸精制高效液相色谱方法纯化工艺

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酢浆草的化学成分研究

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中国药学杂志 2021年第17期56卷 1378-1383页

作者：雷艳张宝马雪郑林巩仔鹏王永林李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵阳市妇幼保健院贵阳市儿童医院药学部贵阳550003

目的研究酢浆草(Oxalis corniculata L.)的化学成分。方法酢浆草药材采用体积分数75%乙醇提取,用D101大孔树脂柱色谱、反复硅胶柱色谱、Toyopearl HW-40F、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱技术进行分离,运用MS、NMR技术进行结构鉴定。... 详细信息

目的研究酢浆草(Oxalis corniculata L.)的化学成分。方法酢浆草药材采用体积分数75%乙醇提取,用D101大孔树脂柱色谱、反复硅胶柱色谱、Toyopearl HW-40F、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱技术进行分离,运用MS、NMR技术进行结构鉴定。结果从酢浆草中分离得到23个化合物,分别鉴定为正二十八烷醇(1)、正三十烷醇(2)、trans-4-hydroxy-2-nonenoic acid(3)、棕榈酸(4)、胸腺嘧啶(5)、(2S,3S,4R)-2-[(2R)-2-hydroxy-tetracosanoylamino]-1,3,4-octadecanetriol(6)、6,7,10-3羟基-8-十八烯酸(7)、没食子酸乙酯(8)、香草酸(9)、丁香酸(10)、methyl-3-hydroxy-5-(p-hydroxyphenyl)pentanoate(11)、原儿茶酸(12)、cucumegastigmaneⅠ(13)、槲皮素(14)、leptolepisol D(15)、牡荆素(16)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(17)、斯皮诺素(18)、2″-O-xylosylswertisin(19)、staphylionoside D(20)、L-鼠李糖(21)、arabitol(22)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(23)。结论化合物2、3、5~7、10~13、15、17~22为首次从酢浆草属植物中分离得到,化合物9、16为首次从该植物中分离得到。

关键词：酢浆草斯皮诺素分离结构鉴定核磁共振光谱

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