检索结果-内蒙古大学图书馆

贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 18-23页

作者：张乙进杨雁竹罗红莫大双舒莉萍江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室&细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室&贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收... 详细信息

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收集不同发育时相的野生斑马鱼胚胎进行全胚胎原位杂交,观察斑马鱼早期胚胎中snx8a的空间表达情况、使用RT-qPCR检测斑马鱼早期发育不同时期snx8a基因的表达情况。结果氨基酸序列比对结果显示斑马鱼Snx8a较Snx8b与人的SNX8同源性更高;对构建的原位杂交探针质粒双酶切鉴定及测序结果显示,构建的探针质粒序列正确、质粒可用;全胚胎原位杂交结果显示,斑马鱼snx8a基因在胚胎一细胞期就开始表达,之后特异表达于斑马鱼头部及尾部造血区;RT-qPCR结果显示,snx8a基因表达逐渐升高,在胚胎12 hpf时达到峰值(P<0.05)。结论斑马鱼snx8a基因为母源性基因,其可能与斑马鱼神经发育和造血发育相关。

关键词：斑马鱼 snx8a基因生物信息学分析全胚胎原位杂交胚胎发育

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4株患者原代细胞源的乳腺癌细胞系建立及初步研究

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基础医学与临床 2025年第2期45卷 183-188页

作者：罗钰蓓黄建军杨文秀张军红李静赵春华豆晓伟贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院乳腺外科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代... 详细信息

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代细胞的特异遗传标记。集落形成实验和球形成实验分析乳腺癌原代细胞系致瘤性。Real-time PCR和Western blot实验分析乳腺癌原代细胞上皮间充质转换分子。转移实验和侵袭实验分析乳腺癌原代细胞的转移能力。结果培养了4种乳腺癌原代细胞系BC25#,BC51#,BC56#和BC57#。这些乳腺癌细胞系培养基是DMEM培养基,可以传代,具有清楚的临床背景。STR基因分型确定了4种乳腺癌原代细胞系特异的遗传标记。集落形成实验和成球实验发现4种乳腺癌原代细胞系比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的形成肿瘤能力。Real-time PCR和Western blot实验发现,与传统的乳腺癌细胞T-47D相比,4种乳腺癌原代细胞系E-cadherin表达降低,vimentin表达升高。迁移实验和侵袭实验发现原代细胞系BC25#比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的转移能力。结论培养了4种可以传代的乳腺癌原代细胞系BC25#、BC51#、BC56#和BC57#,为乳腺癌基础研究提供了新的肿瘤细胞模型。

关键词：乳腺癌原代细胞系基础研究新肿瘤细胞模型

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Wnt/β-catenin信号通路参与化疗药物诱导的转基因斑马鱼abcb4基因的表达和耐药

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第2期35卷 134-139页

作者：陈露向文碧莫晶孙琮杰周艳华吴西军何志旭贵州医科大学免疫学教研室贵州医科大学组织工程与干细胞中心贵州医科大学儿科学教研室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春... 详细信息

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春碱联合吉非替尼处理组。每组100枚胚胎分别进行药物处理至第5天,每组取第5天斑马鱼幼鱼50枚进行实验。采用罗丹明123实验检测野生型斑马鱼耐药程度,酶标仪检测转基因的斑马鱼荧光强度,活细胞工作站检测荧光分布位置。Western blot法检测转基因的斑马鱼β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的蛋白水平。结果罗丹明123实验证实经阿霉素和长春碱药物暴露后的斑马鱼体内产生耐药, EGFP荧光强度检测结果表明经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼荧光强度高,经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼体内β-catenin的累积升高伴随着EGFP和ABCB4蛋白的增加。结论斑马鱼体内Wnt/β-catenin信号通路参与斑马鱼abcb4基因的激活与耐药。

关键词：斑马鱼 Wnt/β-catenin信号通路 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4) 耐药

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环孢素A对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肠道自发绿色荧光的影响

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贵州医科大学学报 2025年第3期50卷 370-377页

作者：孔鹏莫大双赵砚驰张乙进杨雁竹路政舒莉萍何志旭贵州医科大学临床医学院儿科学教研室贵州贵阳550004 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心贵州医院儿童急诊部贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨斑马鱼肠道自发绿色荧光的原因及环孢素A(cyclosporine A,CsA)对自发荧光的影响,优化利用转基因(transgenic,Tg)斑马鱼Tg(abcb4:eGFP)筛选肿瘤多重耐药药物的方法。方法选取受精后5天(five day post fertilization,5 dpf)的野生... 详细信息

目的探讨斑马鱼肠道自发绿色荧光的原因及环孢素A(cyclosporine A,CsA)对自发荧光的影响,优化利用转基因(transgenic,Tg)斑马鱼Tg(abcb4:eGFP)筛选肿瘤多重耐药药物的方法。方法选取受精后5天(five day post fertilization,5 dpf)的野生型(wild type,WT)和Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼幼鱼,观察其肠道自发荧光;将鲢鱼胆汁注射到WT斑马鱼胚胎后观察荧光情况;检测不同处理浓度和不同处理时间的CsA对WT斑马鱼肠道自发荧光的影响;10μmol/L CsA处理2 h对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光检测的影响;Western blot检测CsA对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼b4型ATP结合盒(ATP-binding cassette b4,Abcb4)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)表达的影响。结果斑马鱼肠道存在自发荧光,可影响Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼的荧光检测准确度;鲢鱼胆汁在斑马鱼胚胎中可激发出绿色荧光;CsA可抑制斑马鱼肠道自发荧光,其中10μmol/L CsA处理2 h可达到最佳抑制效应,且不影响斑马鱼Abcb4和eGFP蛋白表达。结论斑马鱼肠道自发荧光可能为胆红素所致,10μmol/L CsA处理2 h可有效抑制斑马鱼肠道自发荧光,提高Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼药物筛选时荧光检测的准确度。

关键词：环孢素A 转基因斑马鱼斑马鱼b4型ATP结合盒自发荧光

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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究

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生物技术通报 2022年第10期38卷 90-96页

作者：陈黎卢茜杨红兰张鹏何志旭贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科遵义563000

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 详细信息

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变检测

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LRG1抑制小鼠肝巨噬细胞活化从而改善代谢相关脂肪性肝病:基于增强TGF-β1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1164-1171页

作者：徐龙飞韩晶杨喆杨燕平陈金慧吴西军王琪洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学金阳医院检验科贵州贵阳550025 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学干细胞与组织工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织... 详细信息

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织和肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达。将原代肝巨噬细胞分为5组,对照组、脂肪变性肝细胞来源的上清(CM)刺激组、CM+LRG1组、CM+转化生长因子-β1(TGF-β1)组、CM+TGF-β1+LRG1组,各组培养24 h后,Western bot法检测一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平的表达,RT-PCR法检测iNOS、趋化因子1(CXCL-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平的表达。MAFLD小鼠分为4组,1组作为对照(6只),其余3组经尾静脉分别注射LRG1(6只)、TGF-β1(6只)或者TGF-β1+LRG1(6只),收集肝组织,经HE染色观察肝脏病理学变化,免疫组化法观察肝组织中F4/80+细胞的分布,RT-PCR法检测肝组织iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达。结果HFD小鼠肝组织和脂肪变性的肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达显著降低(P<0.05)。脂肪变性肝细胞来源的CM刺激明显促进肝巨噬细胞中iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达,而TGF-β1和LRG1联合刺激时明显抑制这些分子mRNA水平的表达(P<0.05)。小鼠HFD16周后,单独注射LRG1或TGF-β1均可减少肝内脂质沉积以及肝内巨噬细胞的浸润,二者联合上述改变更加明显。同时,TGF-β1和LRG1联合刺激时也明显抑制iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达(P<0.05)。结论LRG1通过增强TGF-β1信号通路抑制肝巨噬细胞浸润,从而缓解非酒精性脂肪肝的炎性反应。

关键词：富亮氨酸α2-糖蛋1 肝巨噬细胞代谢相关脂肪性肝病转化生长因子-β1 脂肪变性

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体外扩增的NK细胞运载溶瘤呼肠孤病毒对结直肠癌细胞的杀伤效应

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第5期26卷 492-499页

作者：陈晓庆王念雪龙世棋廖春香刘金河杨薇赵星贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学肿瘤学教研室贵州贵阳550004

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞... 详细信息

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞后,CCK-8法检测在中和抗体的存在下病毒发挥的溶瘤作用;qPCR法检测肿瘤细胞内病毒RNA的相对表达量。CCK-8法检测Reo-NK对结直肠癌KRAS基因突变型(DLD-1)和野生型(CaCo-2、HT29)细胞株的杀伤效应,ELISA双抗体夹心法检测NK细胞释放的穿孔素水平。结果:呼肠孤病毒主要结合于NK细胞膜上,在人AB型血清的存在下体外扩增的NK细胞可将呼肠孤病毒传递到肿瘤细胞,且传递后的呼肠孤病毒仍具有显著溶瘤活性(P<0.01);同时检测到肿瘤细胞内病毒RNA的表达量显著增高(P<0.01)。与NK组相比,Reo-NK组对KRAS基因突变型和野生型结直肠癌细胞株的细胞毒作用均显著增强(P<0.05),穿孔素的释放均明显增加(P<0.05)。结论:体外扩增的人NK细胞适合作为呼肠孤病毒的运载细胞,且呼肠孤病毒能够增强NK细胞的细胞毒作用,两者联合后对结直肠癌细胞可发挥更强的杀伤作用,因而具有重要的临床转化应用价值。

关键词：呼肠孤病毒自然杀伤细胞运载细胞结直肠癌细胞

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肿瘤干细胞在食管鳞状细胞癌中的研究进展

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中华肿瘤防治杂志 2022年第4期29卷 240-247页

作者：邓颖妮何志旭遵义医科大学附属医院(贵州省细胞工程重点实验室) 遵义医科大学附属医院(儿科) 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室

肿瘤干细胞是肿瘤细胞中具有自我更新能力及多向分化潜能的细胞亚群，具有极强的迁移和侵袭能力，与肿瘤的发生、转移、放疗敏感性及化疗耐药密切相关。食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，且>90%为鳞状细胞癌，目前仍缺乏早期... 详细信息

肿瘤干细胞是肿瘤细胞中具有自我更新能力及多向分化潜能的细胞亚群，具有极强的迁移和侵袭能力，与肿瘤的发生、转移、放疗敏感性及化疗耐药密切相关。食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，且>90%为鳞状细胞癌，目前仍缺乏早期诊断的有效靶标。本研究针对肿瘤干细胞对食管鳞状细胞癌(ESCC)的重要作用及相关研究成果进行综述，分析指出肿瘤干细胞与ESCC的恶性进展密切相关。高特异性的食管癌干细胞标志物有助于ESCC的早期诊断及治疗，而包含长链非编码RNA(LncRNA)、微小RNA及环状RNA在内的非编码RNA能够通过调控下游信号通路或靶基因影响食管癌干细胞从而影响病情进展。因此，改善食管癌干细胞的分选及鉴定方法，发掘具有较强特异性的标志物，开发从多种途径针对食管癌干细胞的新型靶向治疗方式，促进相关研究成果的临床转化，将有效增强ESCC放化疗敏感性并延缓其恶性进展，同时提高ESCC患者的生存率，有望推动ESCC治疗的精准化进程。

关键词：食管癌肿瘤干细胞标志物非编码RNA 放疗化疗分子靶向治疗

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Wnt7a/β-连环蛋白/自身免疫调节因子信号通路参与1型糖尿病的发生

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解剖学报 2022年第4期53卷 453-460页

作者：李远迪马静怡余佳珊何可可文廷浩高杰李红苏敏胡蓉贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵阳550025

目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组... 详细信息

目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组及16周发病组,每组20只;非空腹血糖值连续2次≥11.1 mmol/L视为发生T1D。胰腺HE染色观察胰岛炎发生情况,抗Ins、CD45免疫组织化学染色显示胰岛β细胞或浸润炎性细胞;Western blotting和Real-time PCR检测胸腺Wnt7a、β-catenin、AIRE、Ins、GAD67蛋白水平和mRNA表达;流式细胞术分析胸腺T细胞比例。结果1.随着T1D发生,胰岛组织结构破坏,大量淋巴细胞浸润,残存胰岛细胞减少;Ins^(+)胰岛β细胞周围见大量CD45^(+)细胞聚集。2.随年龄的增加,胸腺Wnt7a、β-连环蛋白(catenin)、AIRE、Ins和GAD67蛋白水平和mRNA表达降低;同周龄发病组小鼠与未发病组小鼠相比,胸腺Ins表达下降。3.与3周组相比,16周未发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例降低;16周发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例升高,CD4、CD8双阳性T细胞比例降低。结论Wnt7a/β-catenin信号通路可能通过调控AIRE表达,下调T1D相关TSAs表达,参与T1D发生发展。

关键词： 1型糖尿病自身免疫调节因子 Wnt信号通路免疫印迹法实时定量聚合酶链反应 NOD/Ltj小鼠

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高效液相色谱同时测定细胞基因组中5-甲基脱氧胞嘧啶及其衍生产物含量

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分析试验室 2024年

作者：杨喜善莫俊罗庆元周艳华张鹏曾柱黄文竹贵州医科大学生物与工程学院中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种... 详细信息

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种核苷在120 min内实现完全分离，且线性关系良好(R2> 0.995)，检出限为0.1068 ～ 0.5278 μmol/L，定量限为 0.3236 ～ 1.5995 μmol/L。HEK293T（TET1CD）细胞经DNA Dot Blot法检测，诱导后细胞基因组中5-羟甲基脱氧胞嘧啶（5hmdC）含量显著升高（P < 0.0001）；HPLC检测显示，诱导细胞基因组中5hmdC和5-羟甲基脱氧尿嘧啶（5hmdU）含量升高（P < 0.05），5-甲基脱氧胞嘧啶（5mdC）含量下降（P < 0.05），5-甲酰基脱氧胞嘧啶（5fdC）和5-羧基脱氧胞嘧啶（5cadC）未检出。检出样本回收率在100.2% ～ 113.5%之间，相对标准偏差在0.72% ～ 3.0%之间。本研究建立的HPLC方法，能够同时精确的检测基因组中5种修饰核苷的含量，能够替代传统的DNA Dot Blot法，为研究去甲基化中的碱基代谢产物提供了灵敏、可靠的检测途径。

关键词：高效液相色谱 5-甲基脱氧胞嘧啶(5mdC) 5-羟甲基脱氧胞嘧啶(5hmdC) 5-羟甲基脱氧尿嘧啶(5hmdU) 同时测定

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