检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2022年第3期38卷 356-364页

作者：龙培艳张文萍郑菊付燕林高霄王正薇肖雁地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

本研究通过高通量测序技术,分析正常培养和氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)培养星形胶质细胞来源外泌体的差异微小RNA(microRNA,miRNA)。采用超速离心法提取正常组和OGD/R组星形胶质细胞培养基上... 详细信息

本研究通过高通量测序技术,分析正常培养和氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)培养星形胶质细胞来源外泌体的差异微小RNA(microRNA,miRNA)。采用超速离心法提取正常组和OGD/R组星形胶质细胞培养基上清的外泌体,透射电镜观察到提取的外泌体呈典型囊泡状,包膜完整,含有低电子密度的物质;纳米颗粒追踪技术(NTA)检测到星形胶质细胞外泌体大小为100.5±31.1 nm,占比为96.8%;免疫印迹检测显示,提取物中有外泌体标志性蛋白肿瘤易感蛋白(tumour-susceptibility protein,TSG101)、热休克蛋白60(heat shock proteins 60,Hsp60)、ALG-2相互作用蛋白X(ALG-2-interacting protein X,ALIX)的表达。与正常组相比,OGD/R组共有41个miRNA发生显著改变,其中20个miRNA显著升高,21个miRNA显著降低(P<0.05)。基因本体功能(GO)分析显示,差异靶基因主要参与蛋白质糖基化、脂质代谢过程、磷酸化作用、高尔基体、内质网、内吞体、细胞质囊泡和细胞突起等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与丁酸代谢、β-丙氨酸代谢、脂肪酸降解、线粒体自噬和P53信号通路等代谢途径和信号通路有关。通过对正常组和OGD/R组的星形胶质细胞来源的外泌体miRNA测序并进一步施行靶基因功能富集分析,为后续研究星形胶质细胞外泌体对氧糖剥夺再灌注神经元发挥的保护作用的具体机制提供了一定的研究基础。

关键词：氧糖剥夺再灌注星形胶质细胞外泌体高通量测序技术微小RNA

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东亚与西方幽门螺杆菌菌株感染原代胃癌细胞的转录组学分析

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基因组学与应用生物学 2023年第2期42卷 121-132页

作者：廖永慧龙妮娅李雷蕾彭国玲陈源佳谢渊赵艳周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵阳550004

本研究旨在比较、分析和验证东亚与西方幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)菌株感染原代胃癌细胞后的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),探讨东亚与西方菌株的致病差异。用幽门螺杆菌东亚菌株GZ7、西方菌株26695以感染复... 详细信息

本研究旨在比较、分析和验证东亚与西方幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)菌株感染原代胃癌细胞后的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),探讨东亚与西方菌株的致病差异。用幽门螺杆菌东亚菌株GZ7、西方菌株26695以感染复数(multiplicity of infection,MOI)50∶1感染原代胃癌细胞6 h,收取细胞进行转录组学测序,以|log_(2)FC|>1,FDR≤0.05为标准,筛选DEGs,利用OmicsBean-Cancer在线工具对DEGs进行生物信息学分析。选择4个重要基因进行TCGA数据库分析及Western blot验证。结果表明,GZ7感染胃癌细胞组与未感染胃癌细胞组比较有31个DEGs;26695感染胃癌细胞组与未感染胃癌细胞组比较有109个DEGs;26695感染组与GZ7感染组之间共有的DEGs为22个;GZ7感染组特有的DEGs为9个,26695感染组特有的DEGs为87个。DEGs主要与炎症(TNF信号通路、NF-κB信号通路)、细胞表面受体(Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路)等通路相关。TCGA数据库分析发现IL6和DKK1在胃癌组织中的表达显著高于正常组织的(P<0.001),且IL6和DKK1高表达与胃癌患者10年生存率呈负相关(P<0.01)。Western blot结果证实幽门螺杆菌感染上调胃癌细胞中JUN和FOSL1(两个转录因子),IL6,以及DKK1(东亚菌株特有的DEGs)蛋白的表达;下调细胞中的JUN基因可以抑制IL6和DKK1蛋白的表达,GZ7再感染能够恢复细胞中JUN、IL6和DKK1蛋白的表达水平。总之,东亚、西方幽门螺杆菌菌株感染胃癌细胞产生的DEGs有明显差异,这可能是东亚、西方国家胃癌发病率差异的原因之一。

关键词：幽门螺杆菌胃癌转录组测序差异表达基因

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抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

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中国老年学杂志 2023年第13期43卷 3187-3192页

作者：杨洁邓于新彭亚倩陈竹懿齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室、贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免... 详细信息

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。

关键词：原代星形胶质细胞 LY294002 冈田酸磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β p21 p53

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过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白表达的影响

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中华地方病学杂志 2022年第9期41卷 722-728页

作者：傅晓丽周箫薄莉李彬何冬玲官志忠刘艳洁贵州医科大学附属医院病理科贵阳550004 贵州省分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探讨过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法(1)体内实验:选择24只SPF级SD大鼠,雌雄各半,按性别、体重采用随机数字表法分为对照组和染氟组,每组12只,分别饮用自来水配制的<1 mg/L和50 mg/L... 详细信息

目的探讨过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法(1)体内实验:选择24只SPF级SD大鼠,雌雄各半,按性别、体重采用随机数字表法分为对照组和染氟组,每组12只,分别饮用自来水配制的<1 mg/L和50 mg/L氟化钠溶液,饲养6个月。实验结束后采用免疫荧光法、免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平。(2)体外实验:分离成年(6月龄)大鼠大脑皮质星形胶质细胞进行原代培养(4 mmol/L氟化钠溶液培养24 h),采用免疫荧光法鉴定星形胶质细胞,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测GFAP mRNA及蛋白表达水平,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡情况及钙离子含量。结果(1)体内实验:免疫荧光法、免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法检测结果均显示,染氟组大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平高于对照组(0.440±0.200比0.250±0.120,t=-5.93,P=0.027;0.270±0.020比0.240±0.050,t=-4.87,P=0.040;1.017±0.001比0.486±0.006,t=-52.48,P=0.001)。(2)体外实验:免疫荧光法鉴定结果显示,GFAP阳性,原代培养细胞鉴定为星形胶质细胞;实时荧光定量PCR法检测结果显示,染氟组GFAP mRNA表达水平高于对照组(2.780±0.120比0.134±0.005,t=-37.84,P=0.001);蛋白质免疫印迹法检测结果显示,染氟组GFAP蛋白表达水平高于对照组(2.76±0.10比1.38±0.05,t=-20.44,P=0.002);流式细胞术检测结果显示,染氟组细胞凋亡率高于对照组(%:55.0±1.0比3.5±0.6,t=-10.28,P=0.009),钙离子含量低于对照组(%:54±9比72±13,t=4.64,P=0.043)。结论过量氟暴露可造成体内外星形胶质细胞GFAP表达增加,细胞凋亡增多,并影响钙信号转导通路。

关键词：氟化物中毒胶质纤维酸性蛋白星形胶质细胞原代细胞培养

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氟中毒对神经细胞损伤及自噬的影响

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贵州医科大学学报 2024年第5期49卷 625-635页

作者：王正薇高霄蔡娜何雯雯唐智齐晓岚官志忠肖雁贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨氟中毒对小鼠小胶质细胞株BV2和小鼠来源神经母细胞瘤细胞株N2a及小鼠大脑皮质神经细胞损伤及自噬的影响。方法8周龄清洁级雄性C57BL/6J野生型小鼠,随机分为对照组(饮水含氟量<0.5 mg/L)、低氟组(饮水含氟量10.0 mg/L)和高氟... 详细信息

目的探讨氟中毒对小鼠小胶质细胞株BV2和小鼠来源神经母细胞瘤细胞株N2a及小鼠大脑皮质神经细胞损伤及自噬的影响。方法8周龄清洁级雄性C57BL/6J野生型小鼠,随机分为对照组(饮水含氟量<0.5 mg/L)、低氟组(饮水含氟量10.0 mg/L)和高氟组(饮水含氟量50.0 mg/L),每组10只喂养12周;BV2及N2a正常培养后分对照组、低氟组(培养基含氟量1.0 mmol/L)和高氟组(培养基含氟量1.5 mmol/L);采用CCK8检测不同浓度氟处理下BV2和N2a细胞增殖活力变化,氟离子选择电极法检测造模小鼠尿、血、骨氟含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BV2、小鼠大脑皮质中小胶质细胞活化标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的表达变化及N2a细胞、BV2细胞和小鼠大脑皮质中自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬受体蛋白P62蛋白(SQSTM1/P62)的表达水平;线粒体动力学及自噬融合分裂相关蛋白线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(Pink1)及E3泛素连接酶(Parkin)的表达水平。结果CCK8结果显示,1.5 mmol/LNaF处理的BV2、N2a细胞增殖活力明显下降(P<0.001,);低氟组小鼠氟斑牙发生率为60%,高氟组小鼠氟斑牙发生率为80%;与对照组比较,染氟组小鼠尿、血、骨氟含量明显上升(P<0.001);蛋白免疫印迹结果显示,与对照组比较,高氟组的小鼠大脑皮质和BV2的小胶质细胞活化标志物Iba-1表达水平显著升高(P<0.001,P<0.01),高氟组的小鼠大脑皮质和BV2及N2a细胞自噬相关蛋白LC3、Parkin、Pink1表达量显著增加(P<0.05)、P62水平显著下降(P<0.01);线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2水平显著增加(P<0.001),分裂蛋白Drp1无明显变化。结论氟中毒可导致线粒体损伤、破坏线粒体融合分裂平衡并引起细胞自噬,为阐明氟中毒神经系统损伤与细胞自噬之间相互关系提供新思路。

关键词：氟中毒细胞自噬线粒体分裂融合线粒体自噬小胶质细胞小鼠

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CDH1受幽门螺杆菌感染调控及其在胃癌组织中表达分析

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安徽医科大学学报 2022年第3期57卷 412-417页

作者：陈定宇何小凤程薇全欣莹张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;H... 详细信息

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;Hp感染胃上皮细胞AGS,24 h后收集样本,Western blot检测各组CDH1的表达。通过TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库比较胃癌组织和癌旁组织中CDH1的表达差异及CDH1与胃癌的预后分析;通过R语言对CDH1基因进行KEGG富集分析;另收集胃癌组织和癌旁组织标本各10例,免疫组化染色检测CDH1的表达。结果Hp灌胃蒙古沙鼠胃组织免疫组化染色结果显示,Hp感染3、12、24个月胃组织CDH1阳性率分别为13.70%、13.20%、22.90%,对照组阳性率分别为0.04%、4.50%、4.77%,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Hp感染AGS细胞组CDH1蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);TCGA胃癌数据库中共收集449例具有临床病理参数的病例及其对应的CDH1 mRNA表达量,癌旁组织中CDH1 mRNA表达水平(76.36±0.48)显著低于胃癌组织中CDH1 mRNA的表达水平(147.59±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明胃癌CDH1高表达时,生存率降低(P<0.05);KEGG富集显示CDH1表达与胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、黑色素瘤等肿瘤相关,功能显著富集到细菌侵袭上皮细胞和黏附连接,通路显著富集到Apelin信号通路、Hippo信号通路和Rap1信号通路等;CDH1阳性率在人胃癌组织为76.27%,高于癌旁组织45.68%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染引起CDH1表达水平升高,可能是Hp引起胃癌的原因之一。

关键词： E-钙黏蛋白幽门螺杆菌 TCGA Kaplan-Meier Plotter KEGG 胃癌

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幽门螺杆菌CagA的序列差异对细胞形态的影响

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中国病原生物学杂志 2022年第5期17卷 537-541页

作者：曾晓燕全欣莹李雷蕾贾岑岑廖永慧谢渊赵艳周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA... 详细信息

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA基因敲除株和1株CagA C端缺失株的Hp以感染复数30∶1分别感染AGS细胞6 h和7 d,观察不同时间点的细胞形态变化。以未感染及煮沸10 min的Hp感染AGS细胞为空白对照及阴性对照。从GenBank数据库收集150条cagA基因序列,用MEGA7.0软件进行聚类分析。结果cagA基因敲除株和cagA基因C端缺失株Hp感染AGS细胞6 h均未出现明显的细胞形态改变,其它7株(cagA基因完整)感染细胞后均出现明显的蜂鸟样表型的形态改变。将9株Hp煮沸10 min灭活后感染的细胞也未出现明显的形态改变。Hp持续感染7 d后,只有3株西方株和1株东亚株感染的细胞呈现蜂鸟样表型,另3株带CagA的EPIYA基序变异的东亚株未发生细胞形变。聚类分析显示,多株起源于东亚国家日本、中国和韩国的Hp聚类于西方株,且西方株CagA中EPIYA基序更容易发生变异。结论Hp西方株在中国和其它东亚国家普遍流行,其CagA比东亚株的CagA有更强的致细胞形变能力和更多的EPIYA基序变异,完整的CagA序列是诱导细胞形变的主要因素。这些数据对深入研究Hp不同基因型的致病能力有重要意义。

关键词：幽门螺杆菌 CagA 聚类分析细胞形态学

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PIN1基因多态性与贵州地区民族间原发性高血压的研究

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临床心血管病杂志 2023年第5期39卷 375-382页

作者：李瑞超宋居会赵安宿刁晓艳张婷王婵娟齐晓岚官志忠何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室、贵州省医学分子生物学重点实验室、省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550004 贵州医科大学附属医院心血管内科

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州苗族、布依族、汉族人群原发性高血压的关联性。方法:通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族的原发性高血压和健康对照人群,采用Sequenom Ma... 详细信息

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州苗族、布依族、汉族人群原发性高血压的关联性。方法:通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族的原发性高血压和健康对照人群,采用Sequenom MassARRAY基因分型技术对以上人群PIN1基因多态性位点rs2233678、rs2233679进行基因分型,分析SNP与贵州人群原发性高血压的遗传关系。结果:在贵州苗族、布依族、汉族人群中,高血压组和对照组性别和BMI间的差异均无统计学意义;高血压组的平均年龄均大于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。rs2233678、rs2233679在不同人群的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。在苗族、布依族及汉族高血压组和对照组人群中,rs2233678、rs2233679等位基因及基因型差异均无统计学意义;rs2233678和rs2233679存在强连锁不平衡,以rs2233678-rs2233679构建的单倍型GC和单倍型GT与原发性高血压不存在显著关联性;多因子降维分析显示,rs2233678、rs2233679与BMI对于贵州总人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=9.328,P=0.002);rs2233679和BMI对于贵州苗族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.624,P=0.018);rs2233678和rs2233679对于贵州布依族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.323,P=0.021)。结论:PIN1基因rs2233678、rs2233679可能共同影响贵州人群原发性高血压的发生。

关键词：原发性高血压肽基脯氨酰顺反异构酶基因多态性贵州民族

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幽门螺杆菌阿莫西林稳定耐药克隆的筛选及其基因突变的检测

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安徽医科大学学报 2024年第1期59卷 39-44页

作者：陆秋丹糜孟衡崔古贞张峥嵘吴晓娟陈峥宏贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550025 黔东南州人民医院检验科凯里556000 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州省医学分子生物学重点实验室) 贵阳550004

目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(M... 详细信息

目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(MIC),置于-80℃冻存3个月后再复苏,根据冻存后MIC下降情况判断其耐药性是否稳定。对获得的AMX最高MIC值的克隆H390r和出发菌株H390进行基因组测序分析和外排泵抑制试验,检测并鉴定与H390r获得的AMX高水平耐药性相关的基因突变。结果通过AMX筛选获得4个AMX高水平耐药克隆,MIC分别为12、32、64和≥256 mg/L,经-80℃冻存后,MIC均未发生改变。相比于亲本菌株H390,AMX稳定耐药克隆H390r存在多个基因的突变,包括与AMX耐药性相关的编码RND外排系统的hefC、编码孔蛋白的hopB与hopC和编码青霉素结合蛋白的ftsI。H390r在有外排泵抑制剂存在时对AMX的MIC大幅降低。结论AMX能够在不稳定耐药的Hp中筛选出稳定耐药的克隆;H390r存在与AMX耐药相关的hefC、hopB、hopC和ftsI基因突变。这些突变可能是H390r获得AMX稳定高水平耐药的主要原因。

关键词：幽门螺杆菌阿莫西林不稳定耐药稳定耐药

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槲皮素对N2a/APP细胞的神经保护作用机制

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贵州医科大学学报 2024年第9期49卷 1249-1258页

作者：郭敏彭亚倩张婷唐智齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探究槲皮素在稳定表达人瑞典淀粉样蛋白前体蛋白APP695的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中神经保护作用的机制。方法采用稳转APP695瑞士突变的N2a细胞(N2a/APP)为研究对象,通过CCK-8法检测槲皮素对N2a/APP细胞活力的影响;选择不同浓度槲... 详细信息

目的探究槲皮素在稳定表达人瑞典淀粉样蛋白前体蛋白APP695的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中神经保护作用的机制。方法采用稳转APP695瑞士突变的N2a细胞(N2a/APP)为研究对象,通过CCK-8法检测槲皮素对N2a/APP细胞活力的影响;选择不同浓度槲皮素处理N2a/APP细胞,并用蛋白质印迹法(Western blot)法检测槲皮素处理后N2a/APP细胞内β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、25kDa突触关联蛋白(SNAP25)、突触素(Synaptophysin,SYP)和突触后致密区蛋白95(PSD95)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)通路蛋白、胱氨酸/谷氨酸逆向转运系统的轻链亚基(xCT)蛋白及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白的表达水平;使用流式细胞术检测槲皮素处理后细胞活性氧自由基(ROS)和线粒体膜电位变化,免疫荧光法检测槲皮素处理后N2a/APP细胞内脂质过氧化和DNA损伤程度。结果槲皮素处理N2a/APP细胞后,APP表达显著降低,SNAP25和Synaptophysin表达明显升高,磷酸化ERK1/2水平显著降低,磷酸化AKT水平升高,NOX4表达降低,xCT表达明显升高,线粒体膜电位恢复,氧化应激、脂质过氧化和DNA氧化损伤程度降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对N2a/APP细胞的神经保护作用机制可能与ERK1/2和AKT通路减轻氧化应激、恢复受损突触和损伤线粒体的功能有关。

关键词：阿尔兹海默症槲皮素淀粉样前体蛋白线粒体功能障碍氧化应激

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