检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2022年第3期57卷 412-417页

作者：陈定宇何小凤程薇全欣莹张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;H... 详细信息

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;Hp感染胃上皮细胞AGS,24 h后收集样本,Western blot检测各组CDH1的表达。通过TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库比较胃癌组织和癌旁组织中CDH1的表达差异及CDH1与胃癌的预后分析;通过R语言对CDH1基因进行KEGG富集分析;另收集胃癌组织和癌旁组织标本各10例,免疫组化染色检测CDH1的表达。结果Hp灌胃蒙古沙鼠胃组织免疫组化染色结果显示,Hp感染3、12、24个月胃组织CDH1阳性率分别为13.70%、13.20%、22.90%,对照组阳性率分别为0.04%、4.50%、4.77%,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Hp感染AGS细胞组CDH1蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);TCGA胃癌数据库中共收集449例具有临床病理参数的病例及其对应的CDH1 mRNA表达量,癌旁组织中CDH1 mRNA表达水平(76.36±0.48)显著低于胃癌组织中CDH1 mRNA的表达水平(147.59±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明胃癌CDH1高表达时,生存率降低(P<0.05);KEGG富集显示CDH1表达与胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、黑色素瘤等肿瘤相关,功能显著富集到细菌侵袭上皮细胞和黏附连接,通路显著富集到Apelin信号通路、Hippo信号通路和Rap1信号通路等;CDH1阳性率在人胃癌组织为76.27%,高于癌旁组织45.68%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染引起CDH1表达水平升高,可能是Hp引起胃癌的原因之一。

关键词： E-钙黏蛋白幽门螺杆菌 TCGA Kaplan-Meier Plotter KEGG 胃癌

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幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞m^(6)A甲基化水平及相关酶表达的影响

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1639-1645页

作者：桂书琴何小凤吴丽霞赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染胃上皮细胞中N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2的表达变化,并使用在线网站分析其在胃癌中的表达和临床意义。方法Hp GZ7菌株感染正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞AGS,感染复数为30∶1,2... 详细信息

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染胃上皮细胞中N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2的表达变化,并使用在线网站分析其在胃癌中的表达和临床意义。方法Hp GZ7菌株感染正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞AGS,感染复数为30∶1,24 h后收集细胞总RNA和总蛋白,斑点杂交实验检测细胞总RNA的m^(6)A修饰水平,q-PCR和Western blot检测FTO、METTL3和YTHDF2的mRNA和蛋白表达。GEPIA网站分析FTO、METTL3和YTHDF2在胃癌组织和正常组织中的表达差异及其在Stage分期中表达,Kaplan-Meier Plotter分析FTO、METTL3和YTHDF2表达与预后的关系。结果与未感染组比较,Hp感染GES-1和AGS细胞中总RNA m^(6)A修饰水平均明显降低,FTO的mRNA和蛋白表达水平增加,METTL3和YTHDF2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中FTO表达水平高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),YTHDF2表达水平高于正常组织,METTL3表达水平低于正常组织,差异无统计学意义。FTO和METTL3表达较高的胃癌患者有较低的生存率,而YTHDF2高表达患者有较高的生存率。FTO表达与患者的Stage分期显著相关(P<0.05),而METTL3与YTHDF2表达与Stage分期无显著相关性。结论Hp感染可引起细胞m^(6)A水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2表达改变,提示m^(6)A甲基化可能在Hp诱导胃癌发生发展中发挥作用。

关键词：胃癌幽门螺杆菌 m^(6)A FTO METTL3 YTHDF2

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星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧后PC12细胞线粒体功能损伤的保护作用

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第6期40卷 827-837页

作者：高霄王正薇蔡娜唐智吴昌学齐晓岚官志忠肖雁地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学学报编辑部贵阳550004

外泌体可以改善由缺氧缺血引起的神经细胞损伤,但星形胶质细胞来源的外泌体(astrocyte-derived exosomes,As-exo)与线粒体功能、线粒体相关内质网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)的功能及线粒体自噬是否相关目前尚未明确... 详细信息

外泌体可以改善由缺氧缺血引起的神经细胞损伤,但星形胶质细胞来源的外泌体(astrocyte-derived exosomes,As-exo)与线粒体功能、线粒体相关内质网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)的功能及线粒体自噬是否相关目前尚未明确。本研究旨在探究星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后PC12细胞线粒体功能、MAM以及线粒体自噬的调控作用。超速离心法提取星形胶质细胞培养基上清中的外泌体并对其进行鉴定。利用活细胞工作站观察到荧光标记后的外泌体在24 h时即在PC12细胞内出现明显的富集现象,同时在激光共聚焦扫描显微镜下观察到外泌体与线粒体出现共定位现象;采用Seahorse细胞能量代谢分仪检测线粒体压力变化:与Control组相比,OGD/R组的基础呼吸、质子漏、最大呼吸和ATP相关呼吸都有明显降低(P<0.05或P<0.01),OGD/R+exo组与OGD/R组相比4项指标都升高且差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);线粒体和内质网共定位结果表明,MAM受到氧糖剥夺再复氧伤害时,结构出现距离减小的聚合现象,而As-exo处理后MAM聚合现象减弱;流式结果表明,As-exo,一定程度恢复由氧糖剥夺损伤带来的线粒体膜电位降低和ROS升高;Western印迹结果显示,As-exo能显著抑制由OGD/R引起的线粒体自噬相关蛋白张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PTEN induced kinase 1,PINK1)和Parkin蛋白(parkin RBR E3 ubiquitin protein ligase,Parkin)升高,加入As-exo可降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量,升高P62蛋白的表达水平,降低OGD/R引起的线粒体自噬水平。由此可见,OGD/R处理能引起PC12细胞的线粒体功能紊乱、MAM结构改变及线粒体自噬增加,As-exo处理后能改善细胞的线粒体功能、减弱MAM的形成和降低线粒体自噬,从而具有预防缺血性脑卒中再灌注损伤的治疗潜力。

关键词：外泌体星形胶质细胞氧糖剥夺再灌注线粒体自噬线粒体相关内质网膜

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贵州省3个少数民族线粒体DNA 9 bp序列缺失频率的分析研究

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重庆医学 2017年第33期46卷 4702-4704页

作者：国学红何燕张旺德王婵娟张婷官志忠地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室/贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探讨贵州省3个少数民族线粒体DNA(mtDNA)9bp序列缺失频率情况。方法随机选取贵州省雷山县苗族(69例)、荔波县布依族(70例)、荔波县水族(44例)共183例男性血液标本,应用PCR及直接测序检测线粒体DNA 9bp序列缺失情况。结果在贵州省3... 详细信息

目的探讨贵州省3个少数民族线粒体DNA(mtDNA)9bp序列缺失频率情况。方法随机选取贵州省雷山县苗族(69例)、荔波县布依族(70例)、荔波县水族(44例)共183例男性血液标本,应用PCR及直接测序检测线粒体DNA 9bp序列缺失情况。结果在贵州省3个少数民族样本中发现标准型、缺失型、3型,缺失频率最高为荔波县水族(40.91%),雷山县苗族中检出3型1例,3个少数民族群体间mtDNA 9bp缺失频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3个世居少数民族mtDNA 9bp缺失频率不同,水族的遗传变异较大,水族与苗族的亲缘关系相比水族与布依族较近。

关键词：贵州布依族水族苗族 mtDNA

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不同培养条件对幽门螺杆菌体外感染活力的影响

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中国病原生物学杂志 2017年第9期12卷 833-836页

作者：李雅洁周建奖赵艳袁航龙妮娅王琴容谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的比较不同培养条件下幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对胃癌细胞株AGS感染的能力。方法按不同培养条件分为微需氧培养组和10%CO2培养组。每组再分为未加抗生素组、加Hp选择剂组及Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组;液体培养组和培养7d组... 详细信息

目的比较不同培养条件下幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对胃癌细胞株AGS感染的能力。方法按不同培养条件分为微需氧培养组和10%CO2培养组。每组再分为未加抗生素组、加Hp选择剂组及Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组;液体培养组和培养7d组。37℃培养3d或7d后收集细菌,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50分别感染胃癌细胞株AGS细胞,6h后收集培养上清液,分别采用ELISA和BCA法检测白细胞介素-8(IL-8)水平和总蛋白含量,计算上清液中每mg蛋白IL-8含量。结果微需氧培养组和10%CO2培养组中未加抗生素组IL-8含量分别为2.30±0.16和2.91±0.74,加Hp选择剂组分别为0.95±0.01和1.11±0.28,Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组分别为1.01±0.15和1.37±0.23,10%CO2培养组IL-8含量均高于微需氧培养组(P<0.05);微需氧培养及10%CO2培养条件下,未加抗生素组IL-8含量均高于加抗生素组(P<0.05);液体培养组(3.25±0.57)IL-8含量高于固体培养组(0.95±0.01),培养3d组(1.11±0.28)高于培养7d组(0.6±0.17)(P<0.05)。结论在37℃、10%CO2条件下用无抗生素液体培养基培养3d,Hp体外感染胃癌细胞的活力较强。

关键词：幽门螺杆菌白细胞介素8 感染活力胃癌

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硫酸软骨素对实验性慢性氟中毒脑损害大鼠的保护作用及机制研究

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中华地方病学杂志 2018年第4期37卷 271-277页

作者：王胜远邱志伟官志忠刘艳洁贵州医科大学附属医院病理科贵阳550004 贵州医科大学附属医院地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省分子生物学重点实验室贵阳550004

目的观察细胞外调节蛋白激酶（Erk）1／2、磷酸化（phospho）-Erk1／2、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9在实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中的改变及硫酸软骨素的治疗作用与机制。方法采用成组设计及细胞培养方法，将人神经母细胞瘤SH-S... 详细信息

目的观察细胞外调节蛋白激酶（Erk）1／2、磷酸化（phospho）-Erk1／2、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9在实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中的改变及硫酸软骨素的治疗作用与机制。方法采用成组设计及细胞培养方法，将人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为对照组（正常培养液）、染氟组（氟离子：4.0 mmol／L）和硫酸软骨素处理组（氟离子：4.0 mmol／L、硫酸软骨素：0.4 g／L）。染氟24 h，电子显微镜观察SH-SY5Y细胞超微结构变化；染氟72 h，锥虫蓝染色观察细胞存活数量并计算细胞存活率。15只清洁级SD大鼠，按体质量（100 - 120 g）采用随机数字表法分为对照组（饮用自来水，含氟量〈 0.5 mg／L）、染氟组（氟离子：10.0 mg／L）和硫酸软骨素处理组（氟离子：10.0 mg／L，染氟90 d后0.66 mg／kg硫酸软骨素连续腹腔注射5 d），每组5只，实验周期为95 d。采用Morris水迷宫方法检测大鼠行为学变化，蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Erk1／2、phospho-Erk1／2、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平，免疫组织化学法检测大鼠脑组织海马CA2区phospho-Erk1／2、MMP-2、MMP-9的表达及分布。结果细胞体外培养结果显示，电镜下硫酸软骨素处理组细胞内吞饮小泡较多，有线粒体及内质网肿胀但相对染氟组较少。硫酸软骨素处理组SH-SY5Y细胞存活率［（92 ± 23）%］和细胞数［（7.83 ± 1.38） × 10^6个／ml］明显高于染氟组［（55 ± 2）%、（2.19 ± 1.26） × 10^6个／ml，P均〈 0.05］。动物实验结果显示，对照组与硫酸软骨素处理组大鼠趋向式搜索次数（2.20 ± 1.09、3.40 ± 1.34）高于染氟组（0.40 ± 0.54，P均〈 0.05）。染氟组phospho-Erk1／2的蛋白表达（3.26 ± 0.88）较对照组和硫酸软骨素处理组升高（1.53 ± 0.28、2.36 ± 0.87，P均〈 0.05）。免疫组织化学结果显示，硫酸软骨素处理组phospho-Erk1／2平均灰度值（220.20 ± 3.09）显著高于对照组和染氟组（100.00 ± 0.00、130.98 ± 1.27，P均〈 0.05）；染氟组MMP-2平均灰度值（294.52 ± 5.18）显著高于对照组和硫酸软骨素处理组（100.00 ± 0.00、117.95 ± 1.55，P均〈 0.05）；染氟组和硫酸软骨素处理组MMP-9平均灰度值（993.64 ± 3.66、1 167.30 ± 2.39）均显著高于对照组（100.00 ± 0.00， P均〈 0.05）。结论 Erk1／2通路可能通过调节MMP-2和MMP-9表达维持细胞生存内环境稳定。硫酸软骨素对慢性氟中毒所致的神经损害具有一定的拮抗作用。

关键词：氟硫酸软骨素细胞外调节蛋白激酶1/2 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9

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一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用

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环境与健康杂志 2018年第2期35卷 128-132,F0003页

作者：朱丹刘宇平桂传枝官志忠贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004 贵州省分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1... 详细信息

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4 mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、Na F(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、Na F和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO和1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力。结果与对照组相比,0.02~4 mmol/L Na F染毒组及4~10 mmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L Na F染毒组e NOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起的原代海马神经细胞e NOS蛋白、m RNA表达及细胞凋亡率增高,起到一定的神经保护作用。

关键词：氟中毒海马神经细胞内皮型一氧化氮合酶一氧化氮 L-亚氨基乙基鸟氨酸

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活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 379-383页

作者：谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州省妇幼保健医院

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测... 详细信息

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体活性氧

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幽门螺杆菌毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白表达的影响

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中国病原生物学杂志 2019年第12期14卷 1394-1397,1402页

作者：鲍丽雅黄婷婷赵艳李超陈定宇王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科肝炎实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感... 详细信息

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感染原代胃癌细胞,感染6 h收集细胞蛋白,用高表达cagA的真核表达载体pcDNA3.1/cagA脂质体转染胃癌细胞AGS,24 h收集细胞蛋白,用Western blot检测各组细胞线粒体自噬相关蛋白***3表达变化。结果parkin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在1004 HpAcagA感染组分别为0.97±0.23 J.71±0.23,1.03+0.14,1004 Hp感染组分别为1.61±0,32,2.26±0,08,1.32±0,04,1004 Hp感染组较1004 HpAcagA感染组升高了1.66倍、1.32倍、1.27倍,差异有统计学意义(F值分别为7.96,15.35,11.09,P<0.05);par-kin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在pcDNA3.1空载体转染组分别为1.15+0.14,0.75+0.23,0.74±0,19,pcDNA 3.1/cagA转染组分别为1.49±0,02,1.01+0.02、l.29±0.07,pcDNA3.1/cagA转染组较pcDNA3.1空载体转染组升高1.29倍、1.35倍、1.74倍,差异有统计学意义(F值分别为17.48,14.02,21.06,P<0.05)。Hp/cagA+感染和pcDNA 3.1/cagA转染取得一致结果,提示Hp cagA注入胃上皮细胞后影响细胞线粒体自噬相关蛋白的表达。结论HpCagA对线粒体自噬有一定的调控作用,其可能是Hp诱导胃癌发生发展的分子机制。

关键词：胃癌细胞线粒体自噬幽门螺杆菌 CagA

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氟暴露对大鼠肾脏损伤及SIRT3-FOXO3a-PINK1/PARKIN通路的影响

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中华地方病学杂志 2024年第7期43卷 528-535页

作者：宋居会何文雯李瑞超罗蕴胭张婷王婵娟董阳婷何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550004

目的探讨氟暴露对大鼠肾脏损伤及沉默信息调节因子3(SIRT3)-叉头蛋白O3a(FOXO3a)-张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(PARKIN)通路的影响。方法选取4周龄SD大鼠(清洁级,体质量100~150 g)24只,按随机数字表法分为3组:对... 详细信息

目的探讨氟暴露对大鼠肾脏损伤及沉默信息调节因子3(SIRT3)-叉头蛋白O3a(FOXO3a)-张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(PARKIN)通路的影响。方法选取4周龄SD大鼠(清洁级,体质量100~150 g)24只,按随机数字表法分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组8只(雌雄各半)。对照组自由饮用自来水(氟离子浓度<0.5 mg/L),低、高氟组分别自由饮用自来水和氟化钠配制的溶液(氟离子浓度分别为5.0、50.0 mg/L),周期为180 d。实验结束后,观察并记录大鼠氟斑牙形成情况,采集大鼠股骨、尿液、血液,检测骨氟、尿氟、血氟含量,并检测肾脏功能相关指标(血清尿酸、肌酐、尿素氮含量);光镜下观察苏木素-伊红(HE)染色肾组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和蛋白质印迹法分别检测肾脏SIRT3、FOXO3a、PINK1、PARKIN、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白(P62)mRNA和蛋白表达水平。结果低、高氟组大鼠分别有7、1只检出Ⅰ度氟斑牙,0、7只检出Ⅱ度氟斑牙。与对照组比较,低、高氟组大鼠骨氟(μg/g:1.18±0.06、2.16±0.07比0.52±0.05)、尿氟(mg/L:4.43±0.11、7.46±0.09比2.58±0.14)、血氟含量(μg/ml:0.77±0.06、1.68±0.10比0.52±0.08),血清尿酸(μg/ml:61.01±4.17、103.92±5.43比28.68±2.91)、肌酐(μg/ml:74.82±9.61、132.05±5.35比22.38±4.11)、尿素氮含量(μg/ml:13.36±1.27、14.55±0.34比0.29±0.07)均较高(均P<0.05)。光镜下,对照组肾组织表现为肾小管和肾小球细胞排列紧密且整齐,细胞形态规则,轮廓完整清晰;低氟组与对照组相似,未见明显异常;高氟组可见肾小球结构异常,出现萎缩现象,部分区域肾小管表现为上皮细胞水肿和细胞间界限不清。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.82±0.03、0.58±0.02比1.00±0.08)和P62 mRNA表达水平(0.75±0.07、0.28±0.09比1.00±0.07)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.35±0.04、3.01±0.23比1.00±0.08),PINK1(1.58±0.09、3.28±0.09比1.00±0.07),PARKIN(1.51±0.04、1.67±0.10比1.00±0.05)和LC3 mRNA表达水平(1.74±0.07、2.38±0.18比1.00±0.08)均较高(均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.91±0.01、0.55±0.03比1.00±0.01)和P62蛋白表达水平(0.94±0.27、0.66±0.38比1.00±0.19)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.14±0.03、1.22±0.05比1.00±0.02),PINK1(1.46±0.03、1.56±0.03比1.00±0.05),PARKIN(1.98±0.02、2.33±0.11比1.00±0.06)和LC3蛋白表达水平(4.10±0.58、4.93±0.33比1.00±0.13)均较高(均P<0.05)。结论氟暴露可致大鼠肾组织损伤,SIRT3、P62表达水平下调,FOXO3a、PINK1、PARKIN及LC3表达水平上调。

关键词：氟大鼠线粒体自噬沉默信息调节因子3-叉头蛋白O3a 张力蛋白同源物诱导的假定激酶1/E3泛素连接酶

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