检索结果-内蒙古大学图书馆

贵州医科大学学报 2020年第2期45卷 125-131页

作者：李抄陈定宇张晓怡赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)毒力蛋白cagA基因敲除突变株并进行鉴定。方法:采用基因打靶技术,从Hp 1004基因组扩增cagA基因的上、下游同源重组臂序列,从pACYC184质粒上扩增氯霉素(Cm)序列,通过融合聚合酶链式反应(PCR)技术获得cagA基因敲... 详细信息

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)毒力蛋白cagA基因敲除突变株并进行鉴定。方法:采用基因打靶技术,从Hp 1004基因组扩增cagA基因的上、下游同源重组臂序列,从pACYC184质粒上扩增氯霉素(Cm)序列,通过融合聚合酶链式反应(PCR)技术获得cagA基因敲除打靶片段,克隆入载体pUCmT,得到打靶载体pUCmT-ΔcagA::Cm;再通过电转化法将pUCmT-ΔcagA::Cm质粒直接转入Hp 1004,氯霉素抗性平板筛选cagA基因敲除株并命名为Hp/ΔcagA::Cm;采用PCR进行鉴定,并用Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA感染原代胃癌细胞,检测胞内cagA的表达和对细胞形态的影响。结果:融合PCR构建打靶片段长度为1794 bp,打靶载体转化Hp并筛选后,用cagA外侧引物PCR扩增Hp/ΔcagA::Cm和野生型Hp/cagA,产物长度分别为2150 bp和5014 bp;Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA分别感染细胞后,细胞死亡数量多于感染Hp/ΔcagA::Cm突变株,差异有统计学意义(P<0.01);野生型Hp/cagA菌株及其感染细胞内cagA蛋白表达水平较Hp/ΔcagA::Cm突变型菌株及其感染细胞明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建Hp/ΔcagA::Cm突变株,并在感染细胞中得到验证,表明cagA蛋白对细胞有一定的毒性作用。

关键词：螺杆菌,幽门基因打靶感染细胞毒性相关蛋白cagA 聚合酶链式反应电转化

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贵州汉族、苗族和布依族原发性高血压与载脂蛋白E基因单核苷酸多态性的关系

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中华高血压杂志 2023年第3期31卷 247-256页

作者：李瑞超宋居会赵安宿刁晓艳张婷官志忠王婵娟何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院心血管内科

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州汉族、苗族、布依族人群原发性高血压(EH)的关联性。方法通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族原发性高血压患者343例(苗族110例,布依族119例,汉族114... 详细信息

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州汉族、苗族、布依族人群原发性高血压(EH)的关联性。方法通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族原发性高血压患者343例(苗族110例,布依族119例,汉族114例)和健康对照335例(苗族111例,布依族117例,汉族107例),并收集年龄、性别、身高、体质量、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油等临床资料和生化指标,采用t检验或χ^(2)检验比较两组临床资料与生化指标的差异。分别采用Sequenom MassARRAY和竞争性等位基因特异性PCR(KASP)基因分型技术对以上人群ApoE基因5个SNP位点(rs7259620、rs440446、rs769449、rs1065853、rs439401)和2个SNP位点(rs429358、rs7412)进行基因分型,采用logistic回归分析ApoE基因多态性与贵州人群EH的遗传关系。结果在贵州苗族和布依族人群中,没有发现与EH关联的SNP位点。汉族人群rs439401等位基因及基因型在EH组和对照组的分布差异具有统计学意义(χ^(2)=6.438,P=0.011和χ^(2)=6.389,P=0.041)。与TT或TC基因型相比,CC基因型增加EH的患病风险(OR=2.164,95%CI 1.035~4.526,P=0.040)。与单倍型G-G-T(rs7259620-rs1065853-rs439401)相比,单倍型G-G-C降低汉族人群原发性高血压的患病风险(OR=0.465,95%CI 0.263~0.824,P=0.008)。多因子降维分析结果显示,rs440446,rs429358,rs7412对于苗族EH的发生具有交互作用(χ^(2)=10.012,P=0.002);rs7259620,rs1065853,rs439401对于布依族EH的发生具有交互作用(χ^(2)=3.972,P=0.046);rs7259620,rs440446,rs439401对于汉族EH的发生具有交互作用(χ^(2)=10.155,P=0.001)。结论 ApoE基因rs439401位点及单倍型G-G-C(rs7259620-rs1065853-rs439401)可能与贵州汉族EH的发生有关联。

关键词：原发性高血压载脂蛋白E 基因多态性贵州民族

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氟中毒对神经细胞损伤及自噬的影响

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贵州医科大学学报 2024年第5期49卷 625-635页

作者：王正薇高霄蔡娜何雯雯唐智齐晓岚官志忠肖雁贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨氟中毒对小鼠小胶质细胞株BV2和小鼠来源神经母细胞瘤细胞株N2a及小鼠大脑皮质神经细胞损伤及自噬的影响。方法8周龄清洁级雄性C57BL/6J野生型小鼠,随机分为对照组(饮水含氟量<0.5 mg/L)、低氟组(饮水含氟量10.0 mg/L)和高氟... 详细信息

目的探讨氟中毒对小鼠小胶质细胞株BV2和小鼠来源神经母细胞瘤细胞株N2a及小鼠大脑皮质神经细胞损伤及自噬的影响。方法8周龄清洁级雄性C57BL/6J野生型小鼠,随机分为对照组(饮水含氟量<0.5 mg/L)、低氟组(饮水含氟量10.0 mg/L)和高氟组(饮水含氟量50.0 mg/L),每组10只喂养12周;BV2及N2a正常培养后分对照组、低氟组(培养基含氟量1.0 mmol/L)和高氟组(培养基含氟量1.5 mmol/L);采用CCK8检测不同浓度氟处理下BV2和N2a细胞增殖活力变化,氟离子选择电极法检测造模小鼠尿、血、骨氟含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BV2、小鼠大脑皮质中小胶质细胞活化标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的表达变化及N2a细胞、BV2细胞和小鼠大脑皮质中自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬受体蛋白P62蛋白(SQSTM1/P62)的表达水平;线粒体动力学及自噬融合分裂相关蛋白线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(Pink1)及E3泛素连接酶(Parkin)的表达水平。结果CCK8结果显示,1.5 mmol/LNaF处理的BV2、N2a细胞增殖活力明显下降(P<0.001,);低氟组小鼠氟斑牙发生率为60%,高氟组小鼠氟斑牙发生率为80%;与对照组比较,染氟组小鼠尿、血、骨氟含量明显上升(P<0.001);蛋白免疫印迹结果显示,与对照组比较,高氟组的小鼠大脑皮质和BV2的小胶质细胞活化标志物Iba-1表达水平显著升高(P<0.001,P<0.01),高氟组的小鼠大脑皮质和BV2及N2a细胞自噬相关蛋白LC3、Parkin、Pink1表达量显著增加(P<0.05)、P62水平显著下降(P<0.01);线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2水平显著增加(P<0.001),分裂蛋白Drp1无明显变化。结论氟中毒可导致线粒体损伤、破坏线粒体融合分裂平衡并引起细胞自噬,为阐明氟中毒神经系统损伤与细胞自噬之间相互关系提供新思路。

关键词：氟中毒细胞自噬线粒体分裂融合线粒体自噬小胶质细胞小鼠

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医学分子生物学教学改革的探索

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教育界（高等教育） 2018年第6期 66-67页

作者：谢渊张婷禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室

医学分子生物学是一门十分重要的课程.为有效解决医学专业分子生物学教学中存在的教学模式单一、课程内容设置不合理以及考核方式不客观等问题,文章提出有效的解决对策与建议,提高分子生物学教学改革的成效,进而提升医学专业学生运用分... 详细信息

医学分子生物学是一门十分重要的课程.为有效解决医学专业分子生物学教学中存在的教学模式单一、课程内容设置不合理以及考核方式不客观等问题,文章提出有效的解决对策与建议,提高分子生物学教学改革的成效,进而提升医学专业学生运用分子生物学理论解决实际问题的能力。

关键词：分子生物学医学教学改革

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贵州3个世居少数民族CCR5基因Δ32多态分布

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广东医学 2018年第1期39卷 88-91页

作者：国学红何燕张秀秀王婵娟张婷官志忠地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室(贵州医科大学) 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的调查贵州3个世居少数民族人群(苗族、布依族、水族)中趋化因子受体5(CCR5)基因Δ32位点多态性分布情况。方法采用PCR法直接扩增120例男性样本(雷山苗族27例、荔波布依族70例、荔波水族23例)的CCR5Δ32等位基因,分析PCR扩增产物并对... 详细信息

目的调查贵州3个世居少数民族人群(苗族、布依族、水族)中趋化因子受体5(CCR5)基因Δ32位点多态性分布情况。方法采用PCR法直接扩增120例男性样本(雷山苗族27例、荔波布依族70例、荔波水族23例)的CCR5Δ32等位基因,分析PCR扩增产物并对产物进行测序验证。结果 3个世居少数民族人群中只发现了169 bp片段的野生型基因型,CCR5Δ32等位基因突变频率为0。结论贵州3个世居少数民族人群CCR5Δ32等位基因突变频率较低,可能对人类免疫缺陷性病毒(HIV-1)易感。

关键词： CCR5△32基因贵州少数民族 HIV-1 易感性

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慢性氟中毒大鼠脑组织GFAP、β-tubulin Ⅲ和synaptophsin表达水平及硫酸软骨素干预作用

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中华地方病学杂志 2021年第10期40卷 781-789页

作者：王纯梁璐璐叶凌何琪钟毅王胜远何冬玲官志忠刘艳洁四川省自贡市贡井区中医医院 643020 贵州医科大学附属医院病理科贵阳550004 贵阳市花溪区人民医院神经内科 550004 地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省分子生物学重点实验室贵阳550004

目的观察慢性氟中毒大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)和突触素(synaptophsin)表达水平,探索三复合体突触在慢性氟中毒大鼠中枢神经系统(CNS)损伤机制中的作用,以及硫酸软骨素(CS)的神经保护作用。方法选... 详细信息

目的观察慢性氟中毒大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)和突触素(synaptophsin)表达水平,探索三复合体突触在慢性氟中毒大鼠中枢神经系统(CNS)损伤机制中的作用,以及硫酸软骨素(CS)的神经保护作用。方法选择1月龄清洁级SD大鼠雌雄各48只,按体重(90~120 g)采用随机数字表法分为8组,每组12只,雌雄各半。采用含有不同浓度氟化钠(NaF)的自来水[<0.5 mg/L(对照,CN),10.0 mg/L(低剂量染氟,LF),50.0 mg/L(高剂量染氟,HF)]喂养,其中部分大鼠直接喂养185 d(CN、LF、HF组),其余大鼠于喂养180 d后连续5 d腹腔注射生理盐水(NS)或染氟大鼠腹腔注射0.66 mg/kg CS,分别为CN+NS、LF+NS、HF+NS组和LF+CS、HF+CS组。实验结束后采用苏木素-伊红染色于光镜下观察各组大鼠脑组织海马CA4区病理改变,免疫组织化学法检测海马CA4区GFAP、β-tubulinⅢ和synaptophsin的表达及分布,蛋白免疫印迹法检测海马GFAP、β-tubulinⅢ和synaptophsin蛋白表达水平。结果光镜下LF、HF、LF+NS、HF+NS组雌、雄性大鼠海马CA4区均可见神经元嗜酸性变、丢失和排列层次不整齐,LF+CS、HF+CS组较CN组形态学未见明显改变,而较LF、HF、LF+NS、HF+NS组有明显改善。免疫组织化学法检测结果显示,LF、HF组雌、雄性大鼠GFAP、β-tubulinⅢ、synaptophsin阳性面积率均低于CN组(P均<0.05);而LF+CS、HF+CS组分别高于LF、HF组(P均<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,LF、HF组雌、雄性大鼠GFAP、β-tubulinⅢ、synaptophsin蛋白表达水平(LF组:0.90±0.09、0.82±0.08,1.43±0.14、0.92±0.02,1.21±0.15、0.87±0.02,HF组:0.58±0.14、0.73±0.03,0.63±0.06、0.67±0.03,0.87±0.04、0.70±0.05)均低于CN组(1.24±0.08、1.09±0.10,2.64±0.30、1.54±0.09,1.72±0.10、1.13±0.06,P均<0.05)。结论慢性氟中毒引起的CNS损伤可能与三复合体突触以及细胞外基质有关,CS可能在一定程度上降低损伤。

关键词：氟化物中毒三复合体突触细胞外基质硫酸软骨素性别差异

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基于TCGA数据库及转录组数据分析HDAC 1基因在胃癌中的表达和临床意义

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贵州医科大学学报 2020年第2期45卷 132-137,150页

作者：李抄陈定宇张晓怡赵艳王琴容周建奖鲍丽雅谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院感染科肝炎实验室贵州贵阳550004

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库及转录组数据分析组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在胃癌(GC)中的表达情况、探讨HDAC 1与临床参数的关系,并预测其在肿瘤发生发展中的可能机制。方法:从TCGA数据库中下载GC组织(GC组,371例)和正常胃组织(... 详细信息

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库及转录组数据分析组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在胃癌(GC)中的表达情况、探讨HDAC 1与临床参数的关系,并预测其在肿瘤发生发展中的可能机制。方法:从TCGA数据库中下载GC组织(GC组,371例)和正常胃组织(正常组,36例)的RNASeq数据和临床信息,比较正常组与GC组HDAC 1 mRNA的表达差异;将GC组分为HDAC 1 mRNA高表达组(高于均值)271例和HDAC 1 mRNA低表达组(低于均值)100例,分析GC患者HDAC 1表达量与临床病理参数的相关性及其预后;利用LinkedOmics数据库分析与HDAC 1表达相关的基因,Omicsbean-Canner预测HDAC 1基因相关信号通路及功能富集。结果:GC组标本HDAC 1基因平均表达量明显高于正常组(t=6.88,P<0.01);GC患者HDAC 1基因表达与患者的年龄、T分期、AJCC分期及幽门螺杆菌(***)感染等病理参数呈正相关性(P<0.05),但与性别、N分期及M分期等病理参数无相关性(P>0.05);Kaplan-Meier分析结果表明,HDAC 1基因表达与生存无相关性(P>0.05);GC组患者HADC 1基因表达与AK 2(adenylate kinase 2)、EIF 3 I(eukaryotic translation initiation factor 3 subunit I,)及MARCKSL 1(MARCKS like 1)等9118个基因表达量呈正相关,与GNAL(G protein subunit alpha L)、ARMCX 2(armadillo repeat containing X-linked 2)及CCDC 46(centrosomal protein 112)等10907个基因表达量呈负相关;HDAC 1基因功能显著富集到细胞周期、notch信号通路及Transcriptional misregulation in cancer等。结论:HDAC 1基因在GC样本中呈高表达,且HDAC 1基因的表达与患者的年龄、T分期、AJCC分期及***感染等病理参数相关。

关键词：胃肿瘤 TCGA数据库组蛋白去乙酰化酶1 转录组

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人肠道来源样品中肺炎克雷伯菌的分离及特征研究

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贵州医科大学学报 2019年第12期44卷 1377-1382页

作者：洪伟钱声艳吴昌学饶凤琴程玉梅张婷齐晓岚禹文峰官志忠贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院ICU 贵州贵阳550004

目的:了解重症监护病房(ICU)肠道来源样品(粪便)中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)携带情况及其特征。方法:采用哥伦比亚培养基分离粪便样品中的肺炎克雷伯菌,对其进行16S rDNA测序并构建发育进化树;使用稀释平板法,参照CLSI(20... 详细信息

目的:了解重症监护病房(ICU)肠道来源样品(粪便)中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)携带情况及其特征。方法:采用哥伦比亚培养基分离粪便样品中的肺炎克雷伯菌,对其进行16S rDNA测序并构建发育进化树;使用稀释平板法,参照CLSI(2017)标准测定分离的肺炎克雷伯菌对肠道感染常用抗生素耐药性。结果:共收集粪便样本54份,从中分离到14株肺炎克雷伯菌(携带率为26%);14株肺炎克雷伯菌与欧、美菌株亲缘关系较远,与亚洲肺炎克雷伯菌(Klebsiella singaporensis strain LX3)亲缘关系较近,14株肺炎克雷伯菌聚为2个分支;抗生素耐药性检测结果表明,14株菌株对红霉素、克拉霉素、链霉素、四环素、氯霉素、阿莫西林、甲砜霉素、甲硝唑和克林霉素耐药率为100%,仅对诺氟沙星不耐药(耐药率为0%)。结论:贵州ICU病人粪便分离的14株肺炎克雷伯菌与亚洲株亲缘关系较近,且对肠道感染常用抗生素具有较强耐药性,仅对诺氟沙星不耐药。

关键词：重症监护病房粪便标本肺炎克雷伯进化地位耐药性

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人肠道来源大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因突变株的构建

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贵州医科大学学报 2019年第12期44卷 1370-1376页

作者：洪伟赵行行吴昌学饶凤琴程玉梅张婷齐晓岚禹文峰官志忠贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院ICU 贵州贵阳550004

目的:使用嗜热二型内含子基因失活系统(Thermotargetron)失活人肠道来源大肠杆菌(HSM174 DE3)β-半乳糖苷酶基因(LacZ),构建lacZ失活突变株。方法:使用分子克隆方法,构建lacZ基因失活质粒pHK-TT1A-lacZ426a、pHK-TT1A-lacZ1879a、pHK-TT1A-lacZ1880a及pHK-TT1A-lacZ1155s,将基因失活质粒转化大肠杆菌HSM174菌株(*** HSM174),转化子培养时提高温度至48℃,诱导TeI3c/4c二型内含子“归巢”活性,采用蓝白斑及PCR筛选lacZ基因失活突变株。结果:随机挑选20株克隆菌株的PCR结果显示,lacZ426a、lacZ1879a、lacZ1880a及lacZ1155s基因失活效率分别为60%、75%、60%及75%;白斑克隆基因失活效率为100%。结论:Thermotargetron系统可高效的实现*** HSM 174菌株lacZ基因失活,并可能具有在中温菌中广泛应用的潜力。

关键词：基因失活系统二型内含子大肠杆菌 β-半乳糖苷酶基因基因失活质粒分子克隆

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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析

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四川大学学报（自然科学版） 2024年第4期61卷 320-331页

作者：邵瑞瑞周青帅崔古贞廖健程玉梅官志忠齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550001

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 详细信息

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础.

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特征基因组分析耐药菌治疗

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