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幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠胃组织NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达分析

中国病原生物学杂志 2023年第5期18卷 552-556页

作者：吴丽霞鲍丽雅陈定宇桂书琴赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对蒙古沙鼠胃组织中NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达的影响。方法采用Hp国际标准株11637灌胃处理蒙古沙鼠,隔天一次,共5次,以相同体积无菌脑心浸液肉汤灌胃的沙鼠作为对照组。... 详细信息

目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对蒙古沙鼠胃组织中NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达的影响。方法采用Hp国际标准株11637灌胃处理蒙古沙鼠,隔天一次,共5次,以相同体积无菌脑心浸液肉汤灌胃的沙鼠作为对照组。于感染第3、6、12和24个月后处死沙鼠,取胃黏膜组织并切片,HE染色后作病理学检查;免疫组织化学染色观察Hp定植;试剂盒法检测胃组织NLRP3炎症小体及其相关因子IL-18、IL-β和自噬相关蛋白P62、LC3的表达。结果Hp感染蒙古沙鼠胃组织检测到Hp的定植,HE染色检查显示不同时间感染组沙鼠胃黏膜均出现糜烂黏膜下层组织水肿、黏膜局部浅表糜烂和淋巴浆细胞浸润等不同程度的慢性胃炎病理改变,感染24月部分区域出现非典型增生甚至癌变。对照组沙鼠均无Hp定植及组织学病变。与未感染对照组比较,Hp感染蒙古沙鼠胃组织中NLRP3、IL-18、IL-1β和LC3、P62的表达水平均显著升高(均P<0.05);其中NLRP3、IL-18、LC3表达3到12个月随着Hp感染时间的延长呈升趋势,12到24个月呈下降趋势。IL-1β表达无显著变化,P62呈持续上升趋势。结论蒙古沙鼠感染Hp后可出现与人极相似的胃粘膜病理组织学改变,并促进蒙古沙鼠胃组织NLRP3炎症小体活化和自噬水平升高,这可能是Hp引起胃部病理变化的其中一个原因。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体自噬

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DKK1对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第12期26卷 1324-1330页

作者：骆梅周建奖王琴容杨丽萍陈学书龙妮娅谢渊赵艳贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临检科贵州贵阳550004

目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对... 详细信息

目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照(Control)组、阴性对照(shNC)组及沉默DKK1(DKK1-shRNA)组,CCK-8实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1与胃癌临床病理的关系。结果:成功建立了稳定沉默DKK1基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control组和shNC组降低到72%和47%(均P<0.05)。细胞增殖曲线显示,与Control和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72h后其增殖显著降低(P<0.05)。与shNC组比较,DKK1-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关(均P<0.05)。结论:沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。

关键词：厚体1基因胃癌 AGS细胞增殖细胞周期凋亡

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幽门螺杆菌东、西方株CagA的结构差异及其基因表达研究

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中国病原生物学杂志 2018年第10期13卷 1067-1072页

作者：张晓怡周建奖李雅洁赵艳陈学书龙妮娅王琴容谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东、西方株CagA蛋白的结构差异,探讨其致病性差异的原因。方法微需氧培养Hp东、西方株各3株,获取cagA全长序列,用DNA Star和MEGA6进行氨基酸序列和构成比对。PT-PCR和Western blot检测东、... 详细信息

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东、西方株CagA蛋白的结构差异,探讨其致病性差异的原因。方法微需氧培养Hp东、西方株各3株,获取cagA全长序列,用DNA Star和MEGA6进行氨基酸序列和构成比对。PT-PCR和Western blot检测东、西方株中CagA和尿素酶及其基因的表达。RT-qPCR检测东、西方株中8个基因的表达并进行分析。结果成功培养并鉴定Hp临床株4株,3株为东方株,1株为西方株。序列比对分析东、西方株中CagA氨基酸全长序列有明显差异。丙氨酸、精氨酸和苏氨酸在东方株中显著高于西方株:分别为88和83(t=5.303,P=0.006)、32和25(t=3.528,P=0.025)、57和50(t=3.951,P=0.017);组氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺和缬氨酸在东方株显著低于西方株:分别为13和17(t=8.485,P=0.001)、137和147(t=11.72,P=0.000)、12和20(t=9.449,P=0.001)、59和63(t=4.472,P=0.011)、59和63(t=6.5,P=0.003)。尿素酶α基因在6株Hp中均有表达,但有2株Hp不表达CagA和尿素酶β。定量PCR结果显示,东方株尿素酶α基因、LPS合成蛋白基因及鞭毛钩蛋白FlgE基因高表达,而西方株中尿素酶辅助蛋白Ureh基因、鞭毛合成蛋白FlhA基因及膜蛋白基因高表达(P<0.05)。结论 Hp东、西方株在CagA结构及基因表达存在差异性,推测可能是Hp东方株致病性更强的原因之一。

关键词：幽门螺杆菌分离鉴定 CagA 尿素酶

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过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白表达的影响

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中华地方病学杂志 2022年第9期41卷 722-728页

作者：傅晓丽周箫薄莉李彬何冬玲官志忠刘艳洁贵州医科大学附属医院病理科贵阳550004 贵州省分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探讨过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法(1)体内实验:选择24只SPF级SD大鼠,雌雄各半,按性别、体重采用随机数字表法分为对照组和染氟组,每组12只,分别饮用自来水配制的<1 mg/L和50 mg/L... 详细信息

目的探讨过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法(1)体内实验:选择24只SPF级SD大鼠,雌雄各半,按性别、体重采用随机数字表法分为对照组和染氟组,每组12只,分别饮用自来水配制的<1 mg/L和50 mg/L氟化钠溶液,饲养6个月。实验结束后采用免疫荧光法、免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平。(2)体外实验:分离成年(6月龄)大鼠大脑皮质星形胶质细胞进行原代培养(4 mmol/L氟化钠溶液培养24 h),采用免疫荧光法鉴定星形胶质细胞,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测GFAP mRNA及蛋白表达水平,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡情况及钙离子含量。结果(1)体内实验:免疫荧光法、免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法检测结果均显示,染氟组大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平高于对照组(0.440±0.200比0.250±0.120,t=-5.93,P=0.027;0.270±0.020比0.240±0.050,t=-4.87,P=0.040;1.017±0.001比0.486±0.006,t=-52.48,P=0.001)。(2)体外实验:免疫荧光法鉴定结果显示,GFAP阳性,原代培养细胞鉴定为星形胶质细胞;实时荧光定量PCR法检测结果显示,染氟组GFAP mRNA表达水平高于对照组(2.780±0.120比0.134±0.005,t=-37.84,P=0.001);蛋白质免疫印迹法检测结果显示,染氟组GFAP蛋白表达水平高于对照组(2.76±0.10比1.38±0.05,t=-20.44,P=0.002);流式细胞术检测结果显示,染氟组细胞凋亡率高于对照组(%:55.0±1.0比3.5±0.6,t=-10.28,P=0.009),钙离子含量低于对照组(%:54±9比72±13,t=4.64,P=0.043)。结论过量氟暴露可造成体内外星形胶质细胞GFAP表达增加,细胞凋亡增多,并影响钙信号转导通路。

关键词：氟化物中毒胶质纤维酸性蛋白星形胶质细胞原代细胞培养

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CDH1受幽门螺杆菌感染调控及其在胃癌组织中表达分析

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安徽医科大学学报 2022年第3期57卷 412-417页

作者：陈定宇何小凤程薇全欣莹张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;H... 详细信息

目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;Hp感染胃上皮细胞AGS,24 h后收集样本,Western blot检测各组CDH1的表达。通过TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库比较胃癌组织和癌旁组织中CDH1的表达差异及CDH1与胃癌的预后分析;通过R语言对CDH1基因进行KEGG富集分析;另收集胃癌组织和癌旁组织标本各10例,免疫组化染色检测CDH1的表达。结果Hp灌胃蒙古沙鼠胃组织免疫组化染色结果显示,Hp感染3、12、24个月胃组织CDH1阳性率分别为13.70%、13.20%、22.90%,对照组阳性率分别为0.04%、4.50%、4.77%,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Hp感染AGS细胞组CDH1蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);TCGA胃癌数据库中共收集449例具有临床病理参数的病例及其对应的CDH1 mRNA表达量,癌旁组织中CDH1 mRNA表达水平(76.36±0.48)显著低于胃癌组织中CDH1 mRNA的表达水平(147.59±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明胃癌CDH1高表达时,生存率降低(P<0.05);KEGG富集显示CDH1表达与胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、黑色素瘤等肿瘤相关,功能显著富集到细菌侵袭上皮细胞和黏附连接,通路显著富集到Apelin信号通路、Hippo信号通路和Rap1信号通路等;CDH1阳性率在人胃癌组织为76.27%,高于癌旁组织45.68%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染引起CDH1表达水平升高,可能是Hp引起胃癌的原因之一。

关键词： E-钙黏蛋白幽门螺杆菌 TCGA Kaplan-Meier Plotter KEGG 胃癌

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幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞m^(6)A甲基化水平及相关酶表达的影响

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1639-1645页

作者：桂书琴何小凤吴丽霞赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染胃上皮细胞中N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2的表达变化,并使用在线网站分析其在胃癌中的表达和临床意义。方法Hp GZ7菌株感染正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞AGS,感染复数为30∶1,2... 详细信息

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染胃上皮细胞中N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2的表达变化,并使用在线网站分析其在胃癌中的表达和临床意义。方法Hp GZ7菌株感染正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞AGS,感染复数为30∶1,24 h后收集细胞总RNA和总蛋白,斑点杂交实验检测细胞总RNA的m^(6)A修饰水平,q-PCR和Western blot检测FTO、METTL3和YTHDF2的mRNA和蛋白表达。GEPIA网站分析FTO、METTL3和YTHDF2在胃癌组织和正常组织中的表达差异及其在Stage分期中表达,Kaplan-Meier Plotter分析FTO、METTL3和YTHDF2表达与预后的关系。结果与未感染组比较,Hp感染GES-1和AGS细胞中总RNA m^(6)A修饰水平均明显降低,FTO的mRNA和蛋白表达水平增加,METTL3和YTHDF2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中FTO表达水平高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),YTHDF2表达水平高于正常组织,METTL3表达水平低于正常组织,差异无统计学意义。FTO和METTL3表达较高的胃癌患者有较低的生存率,而YTHDF2高表达患者有较高的生存率。FTO表达与患者的Stage分期显著相关(P<0.05),而METTL3与YTHDF2表达与Stage分期无显著相关性。结论Hp感染可引起细胞m^(6)A水平及相关酶FTO、METTL3和YTHDF2表达改变,提示m^(6)A甲基化可能在Hp诱导胃癌发生发展中发挥作用。

关键词：胃癌幽门螺杆菌 m^(6)A FTO METTL3 YTHDF2

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星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧后PC12细胞线粒体功能损伤的保护作用

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第6期40卷 827-837页

作者：高霄王正薇蔡娜唐智吴昌学齐晓岚官志忠肖雁地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学学报编辑部贵阳550004

外泌体可以改善由缺氧缺血引起的神经细胞损伤,但星形胶质细胞来源的外泌体(astrocyte-derived exosomes,As-exo)与线粒体功能、线粒体相关内质网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)的功能及线粒体自噬是否相关目前尚未明确... 详细信息

外泌体可以改善由缺氧缺血引起的神经细胞损伤,但星形胶质细胞来源的外泌体(astrocyte-derived exosomes,As-exo)与线粒体功能、线粒体相关内质网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)的功能及线粒体自噬是否相关目前尚未明确。本研究旨在探究星形胶质细胞来源外泌体对氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后PC12细胞线粒体功能、MAM以及线粒体自噬的调控作用。超速离心法提取星形胶质细胞培养基上清中的外泌体并对其进行鉴定。利用活细胞工作站观察到荧光标记后的外泌体在24 h时即在PC12细胞内出现明显的富集现象,同时在激光共聚焦扫描显微镜下观察到外泌体与线粒体出现共定位现象;采用Seahorse细胞能量代谢分仪检测线粒体压力变化:与Control组相比,OGD/R组的基础呼吸、质子漏、最大呼吸和ATP相关呼吸都有明显降低(P<0.05或P<0.01),OGD/R+exo组与OGD/R组相比4项指标都升高且差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);线粒体和内质网共定位结果表明,MAM受到氧糖剥夺再复氧伤害时,结构出现距离减小的聚合现象,而As-exo处理后MAM聚合现象减弱;流式结果表明,As-exo,一定程度恢复由氧糖剥夺损伤带来的线粒体膜电位降低和ROS升高;Western印迹结果显示,As-exo能显著抑制由OGD/R引起的线粒体自噬相关蛋白张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PTEN induced kinase 1,PINK1)和Parkin蛋白(parkin RBR E3 ubiquitin protein ligase,Parkin)升高,加入As-exo可降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量,升高P62蛋白的表达水平,降低OGD/R引起的线粒体自噬水平。由此可见,OGD/R处理能引起PC12细胞的线粒体功能紊乱、MAM结构改变及线粒体自噬增加,As-exo处理后能改善细胞的线粒体功能、减弱MAM的形成和降低线粒体自噬,从而具有预防缺血性脑卒中再灌注损伤的治疗潜力。

关键词：外泌体星形胶质细胞氧糖剥夺再灌注线粒体自噬线粒体相关内质网膜

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L-亚氨基乙基鸟氨酸与过量氟共培养对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞一氧化氮／内皮型一氧化氮合酶表达的影响

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中华地方病学杂志 2018年第6期37卷 455-460页

作者：朱丹刘宇平桂传枝官志忠贵州医科大学病理学教研室贵阳550004 贵州医科大学贵州省分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探讨内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）特异性抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸（L-iminoethyl ornithine hydrochloride，L-NIO）对氟致体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡、eNOS mRNA和蛋白表达以 ... 详细信息

目的探讨内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）特异性抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸（L-iminoethyl ornithine hydrochloride，L-NIO）对氟致体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡、eNOS mRNA和蛋白表达以及一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性改变的影响。方法将体外培养的 SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、L-NIO组、低氟＋ L-NIO组、高氟＋ L-NIO组，n = 3。对照组加入与实验组等体积的培养液，低氟组和高氟组加入氟化钠（sodium fluoride，NaF）浓度分别为0.2、2.0 mmol／L，L-NIO组加入3 μmol／L L-NIO，低氟＋ L-NIO组和高氟＋ L-NIO组分别加入0.2 mmol／L NaF和3 μmol／L L-NIO、2.0 mmol／L NaF和3 μmol／L L-NIO，培养时间为48 h。采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测细胞中eNOS蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR）法检测细胞中eNOS mRNA表达水平，流式细胞仪检测细胞的凋亡情况，硝酸还原酶法和比色法检测细胞培养液中NO含量和NOS活性。结果与对照组（1.000 ± 0.026）比较，低、高氟组eNOS蛋白表达量（1.108 ± 0.071、1.349 ± 0.057 ）升高，L-NIO组（0.755 ± 0.148）下降（P均〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟＋ L-NIO组（0.802 ± 0.115）下降（P均〈 0.05）；与高氟组比较，高氟＋ L-NIO组（0.988 ± 0.135）下降（P 〈 0.05）。与对照组（1.000 ± 0.018）比较，低、高氟组eNOS mRNA表达量（1.809 ± 0.099、2.416 ± 0.295）升高，L-NIO组（0.609 ± 0.077）下降（P均〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟＋ L-NIO组（1.040 ± 0.034）下降（P均〈 0.05）；与高氟组比较，高氟＋ L-NIO组（1.233 ± 0.152）下降（P 〈 0.05）。与对照组［（1.66 ± 0.07）％］比较，低、高氟组细胞凋亡率［（8.81 ± 0.27）%、（17.60 ± 0.20）%］升高，L-NIO组［（1.03 ± 0.04）%］下降（P均〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟＋ L-NIO组［（6.03 ± 0.10）%］下降（P均〈 0.05）；与高氟组比较，高氟＋ L-NIO组［（12.12 ± 0.08）％］下降（P 〈 0.05）。与对照组［（2.773 ± 0.145）μmol／L］比较，低、高氟组细胞培养液中NO含量［（8.251 ± 1.047）、（14.287 ± 1.062）μmol／L ］升高，L-NIO组［（1.648 ± 0.155）μmol／L］下降（P均〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟＋ L-NIO组［（4.622 ± 0.252）μmol／L］下降（P均〈 0.05）；与高氟组比较，高氟＋ L-NIO组［（7.899 ± 0.385）μmol／L］下降（P 〈 0.05）。与对照组［（0.507 ± 0.041）Ｕ／ｍｌ］比较，低、高氟组细胞培养液中NOS活性［（0.772 ± 0.032）、（2.258 ± 0.062 ）Ｕ／ｍｌ］升高，L-NIO组［（0.346 ± 0.015）Ｕ／ｍｌ］下降（P均〈 0.05）；与低氟组比较，高氟组升高，低氟＋ L-NIO 组［（0.637 ± 0.026）Ｕ／ｍｌ］下降（P均〈 0.05）；与高氟组比较，高氟＋ L-NIO组［（1.161 ± 0.071）Ｕ／ｍｌ］下降（P 〈 0.05）。结论过量氟可导致SH-SY5Y细胞eNOS蛋白和mRNA过度表达以及细胞凋亡率上升，细胞培养液中NO含量增多以及NOS 活性增强，加入L-NIO与氟共培养后可拮抗氟对SH-SY5Y细胞的损伤，起到一定的神经保护作用。

关键词：氟人神经母细胞瘤细胞内皮型一氧化氮合酶一氧化氮

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不同培养条件对幽门螺杆菌体外感染活力的影响

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中国病原生物学杂志 2017年第9期12卷 833-836页

作者：李雅洁周建奖赵艳袁航龙妮娅王琴容谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的比较不同培养条件下幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对胃癌细胞株AGS感染的能力。方法按不同培养条件分为微需氧培养组和10%CO2培养组。每组再分为未加抗生素组、加Hp选择剂组及Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组;液体培养组和培养7d组... 详细信息

目的比较不同培养条件下幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对胃癌细胞株AGS感染的能力。方法按不同培养条件分为微需氧培养组和10%CO2培养组。每组再分为未加抗生素组、加Hp选择剂组及Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组;液体培养组和培养7d组。37℃培养3d或7d后收集细菌,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50分别感染胃癌细胞株AGS细胞,6h后收集培养上清液,分别采用ELISA和BCA法检测白细胞介素-8(IL-8)水平和总蛋白含量,计算上清液中每mg蛋白IL-8含量。结果微需氧培养组和10%CO2培养组中未加抗生素组IL-8含量分别为2.30±0.16和2.91±0.74,加Hp选择剂组分别为0.95±0.01和1.11±0.28,Hp选择剂+杆菌肽+萘啶酸组分别为1.01±0.15和1.37±0.23,10%CO2培养组IL-8含量均高于微需氧培养组(P<0.05);微需氧培养及10%CO2培养条件下,未加抗生素组IL-8含量均高于加抗生素组(P<0.05);液体培养组(3.25±0.57)IL-8含量高于固体培养组(0.95±0.01),培养3d组(1.11±0.28)高于培养7d组(0.6±0.17)(P<0.05)。结论在37℃、10%CO2条件下用无抗生素液体培养基培养3d,Hp体外感染胃癌细胞的活力较强。

关键词：幽门螺杆菌白细胞介素8 感染活力胃癌

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幽门螺杆菌东、西方株CagA的序列差异及其对胃癌细胞生长与凋亡的影响

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微生物学通报 2018年第4期45卷 848-855页

作者：龙妮娅熊林赵艳袁航李雅洁陈学书张晓怡谢渊周建奖地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州医科大学贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临检科贵州贵阳550004

【背景】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)是胃癌的主要致病因素,其分泌的细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin associated gene A,CagA)是目前已知唯一能被***注入胃上皮细胞并模拟细胞内蛋白发挥作用的癌蛋白,参与胃癌的发生发展。... 详细信息

【背景】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)是胃癌的主要致病因素,其分泌的细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin associated gene A,CagA)是目前已知唯一能被***注入胃上皮细胞并模拟细胞内蛋白发挥作用的癌蛋白,参与胃癌的发生发展。【目的】比较***东亚株和西方株CagA结构差异,初步探讨***-CagA对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。【方法】对***东亚株和西方株CagA的核酸及氨基酸序列进行生物信息学分析,构建含东亚株和西方株cagA基因的真核表达载体,转染胃癌细胞AGS,用Western blot法检测CagA蛋白的表达,用CCK8法测定细胞的生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡。【结果】生物信息学分析发现***东亚、西方菌株CagA的核酸序列和氨基酸序列均存在特征性差异。构建了含东亚、西方菌株cagA基因的表达载体[命名为GZ7/cagA(东亚株)和26695/cagA(西方株)]。与空载体组比较,GZ7/cagA和26695/cagA转染组均表达CagA蛋白,两组比较表达量无显著性差异,GZ7/cagA转染组细胞生长显著增加,而26695/cagA转染组细胞生长显著降低(P<0.05)。GZ7/cagA转染组、26695/cagA转染组细胞的凋亡率分别为7.23±0.96及9.17±1.40,均高于空载体组(5.03±0.63),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】东亚株与西方株CagA之间有结构和功能的差异,东亚株CagA能促进细胞增殖,而西方株CagA却抑制细胞增殖,但两者均能促进细胞凋亡。

关键词：幽门螺杆菌 CagA 胃癌细胞增殖细胞凋亡

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