检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2021年第2期16卷 155-160页

作者：陈定宇何小凤张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响。方法用CagA基因失活突变Hp菌株(1004Hp△cagA)和野生型1004Hp菌株分别感染人胃上皮细胞GES-1和AGS 24 h,收集标本。Western blot检测各... 详细信息

目的评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响。方法用CagA基因失活突变Hp菌株(1004Hp△cagA)和野生型1004Hp菌株分别感染人胃上皮细胞GES-1和AGS 24 h,收集标本。Western blot检测各组细胞中CagA蛋白、线粒体融合分裂蛋白Mfn1、Mfn2、Fis1和Drp1的表达情况;加入JC-1荧光探针后,荧光显微镜观察各组细胞线粒体膜电位变化;ATP检测试剂盒检测各组细胞中ATP生成水平的变化。结果Western blot鉴定显示野生型1004Hp中有CagA的表达,而1004Hp△cagA无CagA的表达。1004Hp感染组与1004Hp△cagA感染组比较,线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2表达下降(P<0.05),线粒体分裂蛋白Fis1、Drp1表达上升(P<0.05),线粒体膜电位下降,且在GES-1和AGS两株细胞结果一致。1004Hp感染组和1004Hp△cagA中AGS和GES-1细胞ATP相对生成量分别为0.30±0.03、0.64±0.04和0.64±0.01、1.23±0.19,AGS中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降53.1%,GES-1中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降48.0%(P<0.05)。结论Hp/cagA影响线粒体动态平衡,诱发功能障碍,可能是Hp引起胃部病理变化的原因之一。

关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白CagA 线粒体融合线粒体分裂线粒体膜电位

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嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3049-3061页

作者：花登雄王鑫鑫陈峥宏洪伟汪依航俞青凤谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其... 详细信息

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。

关键词：大肠杆菌嗜热Ⅱ型内含子 Thermotargetron Tel3c/4c 内含子编码蛋白反转录结构域

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大肠埃希菌密度感应调节子qseC基因失活突变株构建及其生物学特性

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实用医学杂志 2022年第3期38卷 288-294页

作者：周青帅赵行行李冬梅崔古贞陈峥宏任玮齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其... 详细信息

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其对大肠埃希菌生理、生化特征的影响。方法使用嗜热二型内含子基因打靶系统(Thermotargetron)构建大肠埃希菌HMS174菌株qseC基因失活突变株,测定其生长速率、溶血能力、生物膜形成和运动能力等表型的变化,以及对酸碱和6种抗生素的敏感性。结果成功构建了大肠埃希菌HMS174 qseC627s位点的打靶载体,该载体基因失活效率为100%。对比大肠埃希菌HMS174与ΔqseC627s突变株的表型发现,突变株生长速率和最大生物量降低、溶血能力丧失、生物膜形成能力降低、运动能力减弱、对酸、碱的耐受能力降低。抗生素敏感性测定结果表明,ΔqseC627s对氯霉素、氨苄青霉素、四环素、阿莫西林、甲硝唑耐受性降低。结论大肠埃希菌HMS174中qseC基因缺失后,突变株表型和对抗外界压力因素发生了显著改变。

关键词：大肠埃希菌密度感应系统 Thermotargetron 突变株表型

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Stattic增强三氧化二砷诱导急性髓样白血病THP1细胞生存和凋亡的机制

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西安交通大学学报（医学版） 2021年第1期42卷 53-58页

作者：吴昌学赵艳张婷张健禹文峰柏华张启芳贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学贵州贵阳550004 贵州医科大学第三附属医院医学中心实验室贵州都匀558000

目的探讨STAT3抑制剂Stattic联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)THP1细胞生存和凋亡的影响及其作用机制。方法以THP1细胞株为研究对象,用CCK8法检测Stattic联合ATO对THP1细胞生存的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡、ROS水平,用Caspase 3/7 Glo assay试剂盒检测细胞Caspase 3/7活性,用qPCR检测mRNA表达,Western blotting检测蛋白表达。结果Stattic可明显抑制磷酸化STAT3的水平,显著加剧ATO对AML细胞生存抑制,增强ATO诱导的细胞凋亡和氧化应激产物。Stattic显著抑制ATO上调的Nrf2的表达以及下游基因的表达。结论Stattic可增强ATO对AML细胞生存抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与抑制Nrf2和Nrf2下游基因表达引起ROS增多有关。

关键词： Stattic 三氧化二砷 THP1细胞细胞生存凋亡 Nrf2

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艰难拟梭菌PaLoc致病决定区基因座敲除突变株转录组学分析及其减毒验证

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中华预防医学杂志 2022年第5期56卷 601-608页

作者：崔古贞周青帅程钦全饶凤琴程玉梅田艳张婷陈峥宏廖健官志忠齐晓岚吴棋洪伟贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550001 同济大学附属第十人民医院检验科上海200072 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵阳550001 贵州省建设职业技术学院清镇551400 贵州医科大学附属口腔医院贵阳550001

目的对艰难拟梭菌630(Cd630)菌株和致病决定区基因座(PaLoc)敲除突变株(ΔPaLoc)进行转录组测序和分析,获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱,并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力,为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫... 详细信息

目的对艰难拟梭菌630(Cd630)菌株和致病决定区基因座(PaLoc)敲除突变株(ΔPaLoc)进行转录组测序和分析,获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱,并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力,为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序,接着对差异表达基因进行筛选,随后对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞(Vero)和人克隆结肠腺癌细胞株(Caco-2)中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因tcdA、tcdB未转录。CD630_36010、CD630_020910、CD630_02080和cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍;编码高丝氨酸脱氢酶的hom2基因、孢子形成蛋白基因CD630_15810、锌结合脱氢酶基因CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇5-脱氢酶基因CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明,ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶(PTS)系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力,ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。结论通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序,表明毒素基因未转录,其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明,ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力,ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。

关键词：基因敲除技术规律间隔成簇短回文重复序列细菌毒素艰难拟梭菌减毒突变体

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黄曲霉基因敲除体系的构建及其RNA依赖的RNA聚合酶1基因在生长发育中的作用

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贵州医科大学学报 2023年第11期48卷 1282-1291页

作者：刘翔杨碧田询周建鸿禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学、地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨黄曲霉(***)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在***生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overl... 详细信息

目的探讨黄曲霉(***)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在***生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入***的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得***基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与***表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。

关键词：基因敲除技术原生质体黄曲霉重叠延伸聚合酶链式反应聚乙二醇 RNA依赖的RNA聚合酶1

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天麻对APP/PS1痴呆小鼠模型的神经保护作用及其对衰老相关蛋白的影响

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中国老年学杂志 2023年第23期43卷 5767-5772页

作者：高玉梅王晓玲胡晓霞李若淳江沂齐晓岚周莉贵阳康养职业大学贵州贵阳550081 赣南医学院第一附属医院检验科贵州医科大学基础医学院生理学教研室广州医科大学附属中医医院贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室

目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg... 详细信息

目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg·d)的RG,各组小鼠6月龄时进行水迷宫实验;免疫组织化学检测脑组织内Aβ聚集;Western印迹测定脑组织中衰老相关蛋白p53、p21表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组脑组织中白细胞介素(IL)-6、IL-8表达。结果与正常组比较,模型组学习记忆能力显著降低,脑组织内Aβ斑块聚集明显增多,p21、IL-6、IL-8表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,模型加药组学习记忆能力显著升高,脑组织内Aβ斑块聚集明显减少,p21、IL-6、IL-8表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论RG可能通过调控衰老相关蛋白及IL-6、IL-8表达延缓衰老进程,改善阿尔茨海默病(AD)病理进程。

关键词：阿尔茨海默病天麻衰老

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基于生物信息学数据分析ATM在胃癌组织中的表达及其临床意义

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年第7期28卷 714-720页

作者：何小凤陈定宇周建奖赵艳鲍利雅王琴容谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州贵阳550004

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃癌细胞共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因表达的影响及其临床意义。方法:从TCGA数据库中获取胃癌相关RNAseq数据,比较ATM基因的表达差异,分析ATM... 详细信息

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃癌细胞共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因表达的影响及其临床意义。方法:从TCGA数据库中获取胃癌相关RNAseq数据,比较ATM基因的表达差异,分析ATM表达与患者临床病理参数的相关性及预后价值,用Kaplan-Meier法进行生存分析,LinkedOmics数据库分析ATM相关基因,用R语言进行GO、KEGG富集分析。选用2019年3月至2019年12月贵州医科大学附属医院12例手术切除的胃癌及癌旁组织标本,以及胃癌细胞系AGS和BGC823,用感染复数40∶1的Hp GZ7菌感染细胞,用免疫组织化学染色法检测胃癌组织中ATM蛋白的表达,qPCR法检测胃癌组织和细胞中ATM mRNA的表达。结果:TCGA数据显示胃癌和Hp感染胃癌组织中ATM miRNA表达水平均显著高于癌旁组织(均P<0.01);胃癌组织中ATM miRNA表达与患者的T分期、AJCC分期等病理参数呈正相关(均P<0.05),ATM高表达时生存率显著降低(P<0.05)。实验检测显示,胃癌组织标本中ATM蛋白的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);Hp感染胃癌细胞中ATM miRNA表达水平显著高于未感染胃癌细胞(P<0.01)。胃癌中ATM基因与NPAT等12461个基因呈正相关(P<0.05),与MIF等7764个基因呈负相关(P<0.05)。GO、KEGG富集分析显示,ATM富集到DNA修复复合体、癌症中的转录失调等信号通路。结论:ATM基因在胃癌组织中高表达,患者生存率随表达水平的增高而降低,其与患者的T分期、AJCC分期等病理参数相关,且Hp感染引起ATM表达水平升高可能是Hp引起胃癌的原因之一。

关键词：胃癌 AGS细胞 BGC823细胞共济失调毛细血管扩张突变基因 TCGA数据库预后

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外源性H_(2)S对氧糖剥夺再灌注后SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

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西安交通大学学报（医学版） 2021年第5期42卷 659-665页

作者：吴昌学董艳军黄赟肖子宇李毅齐晓岚官志忠肖雁地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州省人民医院贵州贵阳550004

目的探讨外源性硫化氢(H_(2)S)对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)后SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法建立SH-SY5Y细胞OGD/R模型,SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+不同浓度NaHS(H_(2)S供体)处理组;OGD/R制备:用不含血清的低糖DMEM培养... 详细信息

目的探讨外源性硫化氢(H_(2)S)对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)后SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法建立SH-SY5Y细胞OGD/R模型,SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+不同浓度NaHS(H_(2)S供体)处理组;OGD/R制备:用不含血清的低糖DMEM培养基在37℃、930 mL/L N_(2)、20 mL/L O_(2)的低氧条件下培养各组细胞12 h,然后用完全培养液复氧培养24 h。采用CCK-8检测存活率,流式细胞技术检测细胞凋亡水平,蛋白印迹方法(Western blotting)检测细胞中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及NF-κBP65、COX-2蛋白表达水平。结果OGD/R模型组SH-SY5Y细胞活性较对照组降低(P<0.05)。0~0.5 mmol/L浓度的NaHS处理组细胞活性随着给予NaHS浓度的增加较OGD/R模型组逐渐升高(P<0.05),超过这个浓度范围,细胞活性较OGD/R模型组降低(P<0.05)。模型组细胞的早期凋亡水平均显著高于对照组(P<0.05)。0.2、0.4 mmol/L NaHS处理组细胞的早期凋亡水平较OGD/R模型组显著降低、4 mmol/L NaHS处理组细胞的早期凋亡水平较OGD/R模型组显著升高(P<0.05);Western blotting检测结果显示,OGD/R模型组细胞的GRP78、CHOP、NF-κBp65及COX-2蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05);与OGD/R模型组比较,0.2、0.4、4 mmol/L浓度NaHS处理组细胞的GRP78、CHOP、NF-κBp65及COX-2表达水平显著降低(P<0.05),但各剂量组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论NaHS可以提高经OGD/R损伤后细胞的活性,可能是通过抑制内质网应激诱导的NF-κBp65、COX-2蛋白的激活从而减少细胞凋亡水平来实现。

关键词：血管性痴呆硫化氢核转录因子-κB 凋亡

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14种喀斯特地区植物药提取物的体外抗氧化活性比较

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贵州医科大学学报 2024年第1期49卷 41-47页

作者：邹健邓婕王道平吴昌学曾晓晓向洁冉龙艳肖霄喻彦龙官志忠贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550014

目的对14种喀斯特地区特色植物药抗氧化活性进行筛选,为氧化应激诱导的相关疾病药物干预提供基础数据。方法构建抗氧化测定体系(清除羟自由基能力的测定、清除2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基能力的测定、铁氰化钾还原能力的测定... 详细信息

目的对14种喀斯特地区特色植物药抗氧化活性进行筛选,为氧化应激诱导的相关疾病药物干预提供基础数据。方法构建抗氧化测定体系(清除羟自由基能力的测定、清除2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基能力的测定、铁氰化钾还原能力的测定及抑制脂质过氧化能力测定),以维生素C作为阳性对照,检测14植物药醇提取物的体外抗氧化活性,采用隶属函数分析法进行结果的综合评价及排序。结果植物药对羟自由基的清除能力强弱为仙桃草、瓜子金>凉粉柴>天冬>锦茵陈>维生素C>其余药物;植物药对DPPH自由基的清除能力强弱为维生素C>锁阳>吴茱萸>响铃草>皂角>薏苡仁>仙桃草>其余药物;植物药还原能力的强弱为吴茱萸、仙桃草、锁阳、锦茵陈和菟丝子的还原能力比阳性对照组强,响铃草和皂角的还原能力与对照组相近,其余药物弱于对照组;植物药抑制脂质过氧化能力强弱为凉粉柴>仙桃草>响铃草>吴茱萸>菟丝子>玉竹>瓜子金>天冬>维生素C>其余药物;最后通过隶属函数分析显示,14种植物药的抗氧化能力为仙桃草>吴茱萸>维生素C>凉粉柴>响铃草>锁阳>天冬>皂角>瓜子金>薏苡仁>菟丝子>锦茵陈>黄精>一朵云>玉竹。结论所检测的植物药中,仙桃草可能作为潜在的抗氧化应激候选药物;采用抗氧化评价体系结合隶属函数分析,更加科学可靠地评价了药物的抗氧化能力。

关键词：植物药氧化应激抗氧化能力隶属函数分析仙桃草

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