检索结果-内蒙古大学图书馆

贵州医科大学学报 2020年第2期45卷 125-131页

作者：李抄陈定宇张晓怡赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)毒力蛋白cagA基因敲除突变株并进行鉴定。方法:采用基因打靶技术,从Hp 1004基因组扩增cagA基因的上、下游同源重组臂序列,从pACYC184质粒上扩增氯霉素(Cm)序列,通过融合聚合酶链式反应(PCR)技术获得cagA基因敲... 详细信息

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)毒力蛋白cagA基因敲除突变株并进行鉴定。方法:采用基因打靶技术,从Hp 1004基因组扩增cagA基因的上、下游同源重组臂序列,从pACYC184质粒上扩增氯霉素(Cm)序列,通过融合聚合酶链式反应(PCR)技术获得cagA基因敲除打靶片段,克隆入载体pUCmT,得到打靶载体pUCmT-ΔcagA::Cm;再通过电转化法将pUCmT-ΔcagA::Cm质粒直接转入Hp 1004,氯霉素抗性平板筛选cagA基因敲除株并命名为Hp/ΔcagA::Cm;采用PCR进行鉴定,并用Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA感染原代胃癌细胞,检测胞内cagA的表达和对细胞形态的影响。结果:融合PCR构建打靶片段长度为1794 bp,打靶载体转化Hp并筛选后,用cagA外侧引物PCR扩增Hp/ΔcagA::Cm和野生型Hp/cagA,产物长度分别为2150 bp和5014 bp;Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA分别感染细胞后,细胞死亡数量多于感染Hp/ΔcagA::Cm突变株,差异有统计学意义(P<0.01);野生型Hp/cagA菌株及其感染细胞内cagA蛋白表达水平较Hp/ΔcagA::Cm突变型菌株及其感染细胞明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建Hp/ΔcagA::Cm突变株,并在感染细胞中得到验证,表明cagA蛋白对细胞有一定的毒性作用。

关键词：螺杆菌,幽门基因打靶感染细胞毒性相关蛋白cagA 聚合酶链式反应电转化

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12722例新生儿出生体质量特点及其影响因素分析

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贵州医科大学学报 2021年第11期46卷 1294-1300页

作者：丁可军侯红林舒莉萍黄璟吴昌学郎溪县人民医院儿科安徽宣城242100 贵州医科大学基础医学院贵州省再生医学重点实验室&中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院儿科贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室&地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨12722例新生儿出生体质量及其影响因素。方法收集产科出生的12722例活产新生儿及孕母围生期临床资料,统计新生儿(新生儿出生体质量等基本数据,早产儿、低出生体质量儿、巨大儿、过期产儿发生率)、产妇(产妇总数、初产妇人数、... 详细信息

目的探讨12722例新生儿出生体质量及其影响因素。方法收集产科出生的12722例活产新生儿及孕母围生期临床资料,统计新生儿(新生儿出生体质量等基本数据,早产儿、低出生体质量儿、巨大儿、过期产儿发生率)、产妇(产妇总数、初产妇人数、年龄、孕前BMI、孕期增重程度等)情况,对新生儿出生体质量的进行单因素分析,采用Logistics回归分析新生儿出生体质量的影响因素。结果12722例新生儿平均出生体质量为(3324.37±457.64)g,男性高于女性(F=897.856,P<0.001);2012—2014年新生儿出生体质量逐年增加(F=36.552,P<0.001),2015—2019年逐年下降(F=10.663,P<0.001);2012—2019年早产儿的发生率总体保持递减趋势(χ^(2)=37.751,P<0.001);2012—2019年产妇平均年龄逐年增大(χ^(2)=57.865,P<0.001),30岁以上的产妇逐渐增多(χ^(2)=49.537,P<0.001);2012年后孕前消瘦孕妇逐渐增多(χ^(2)=19.228,P<0.001),孕前正常体质量产妇比例无明显改变(χ^(2)=0.806,P=0.652),孕前超重产妇比例下降(χ^(2)=14.559,P=0.001);单因素分析结果显示,不同性别、胎龄、出生胎儿数量新生儿的出生体质量比较,差异有统计学意义(P<0.001);不同年龄、文化水平、孕前BMI、孕期增重程度、羊水量、孕次、产次、身高以及有无患妊娠期高血压的产妇所产新生儿的出生体质量比较,差异有统计学意义(P<0.05);多Logistics回归分析果显示,新生儿出生体质量影响因素依次是双胎妊娠、胎龄、羊水量、妊娠期高血压、孕期增重程度、新生儿出生性别、产妇文化水平、妊娠糖期尿病、产妇年龄、孕前BMI、孕母身高、孕次以及产次。结论产妇年龄、孕前BMI、孕期增重程度、是否患妊娠期糖尿病和妊娠期高血压以及新生儿胎龄是新生儿出生体质量的影响因素。

关键词：新生儿出生体质量产妇婴儿,极低出生体重婴儿,早产体质量指数影响因素

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CD133^(+)原代胃癌细胞生长、迁移和侵袭能力的检测

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贵州医科大学学报 2021年第4期46卷 373-380,386页

作者：程薇陈学书谢渊周建奖袁航贾岑岑王琴容赵艳贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州省肿瘤医院检验科贵州贵阳550001 襄阳市第一人民医院病理科湖北襄阳441000

目的利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)胃癌细胞,研究其在体内外的增殖、迁移和侵袭能力。方法利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞,用免疫荧光检测细胞中CD133的表达,进行细胞克隆形成实验、... 详细信息

目的利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)胃癌细胞,研究其在体内外的增殖、迁移和侵袭能力。方法利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞,用免疫荧光检测细胞中CD133的表达,进行细胞克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭检测细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;建立CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,检测其体内成瘤能力及移植瘤中CD133和Ki67表达。结果用免疫磁珠成功分选到CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞,与CD133-原代胃癌细胞组比较,免疫荧光证实CD133^(+)细胞中CD133高表达、体外形成的细胞克隆数明显增加(P<0.001);细胞划痕和Transwell侵袭实验结果显示,CD133^(+)和CD133-细胞的伤愈百分比分别为(76.5±1.4)%和(39.8±2.0)%,侵袭细胞数分别为(624±37)/视野和(281±31)/视野,差异均有统计学意义(P<0.001);CD133^(+)细胞裸鼠内成瘤能力明显高于CD133-组,瘤组织中CD133和Ki67的表达水平也高于CD133-细胞(P<0.01)。结论CD133^(+)人原代胃癌细胞具有更强的体外增殖,迁移和侵袭能力及体内成瘤能力。

关键词：细胞运动分化抗原簇蛋白133 原代胃癌细胞侵袭裸鼠成瘤

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基于TCGA数据库及转录组数据分析HDAC 1基因在胃癌中的表达和临床意义

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贵州医科大学学报 2020年第2期45卷 132-137,150页

作者：李抄陈定宇张晓怡赵艳王琴容周建奖鲍丽雅谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院感染科肝炎实验室贵州贵阳550004

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库及转录组数据分析组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在胃癌(GC)中的表达情况、探讨HDAC 1与临床参数的关系,并预测其在肿瘤发生发展中的可能机制。方法:从TCGA数据库中下载GC组织(GC组,371例)和正常胃组织(... 详细信息

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库及转录组数据分析组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在胃癌(GC)中的表达情况、探讨HDAC 1与临床参数的关系,并预测其在肿瘤发生发展中的可能机制。方法:从TCGA数据库中下载GC组织(GC组,371例)和正常胃组织(正常组,36例)的RNASeq数据和临床信息,比较正常组与GC组HDAC 1 mRNA的表达差异;将GC组分为HDAC 1 mRNA高表达组(高于均值)271例和HDAC 1 mRNA低表达组(低于均值)100例,分析GC患者HDAC 1表达量与临床病理参数的相关性及其预后;利用LinkedOmics数据库分析与HDAC 1表达相关的基因,Omicsbean-Canner预测HDAC 1基因相关信号通路及功能富集。结果:GC组标本HDAC 1基因平均表达量明显高于正常组(t=6.88,P<0.01);GC患者HDAC 1基因表达与患者的年龄、T分期、AJCC分期及幽门螺杆菌(***)感染等病理参数呈正相关性(P<0.05),但与性别、N分期及M分期等病理参数无相关性(P>0.05);Kaplan-Meier分析结果表明,HDAC 1基因表达与生存无相关性(P>0.05);GC组患者HADC 1基因表达与AK 2(adenylate kinase 2)、EIF 3 I(eukaryotic translation initiation factor 3 subunit I,)及MARCKSL 1(MARCKS like 1)等9118个基因表达量呈正相关,与GNAL(G protein subunit alpha L)、ARMCX 2(armadillo repeat containing X-linked 2)及CCDC 46(centrosomal protein 112)等10907个基因表达量呈负相关;HDAC 1基因功能显著富集到细胞周期、notch信号通路及Transcriptional misregulation in cancer等。结论:HDAC 1基因在GC样本中呈高表达,且HDAC 1基因的表达与患者的年龄、T分期、AJCC分期及***感染等病理参数相关。

关键词：胃肿瘤 TCGA数据库组蛋白去乙酰化酶1 转录组

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DKK1对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第12期26卷 1324-1330页

作者：骆梅周建奖王琴容杨丽萍陈学书龙妮娅谢渊赵艳贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临检科贵州贵阳550004

目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对... 详细信息

目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照(Control)组、阴性对照(shNC)组及沉默DKK1(DKK1-shRNA)组,CCK-8实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1与胃癌临床病理的关系。结果:成功建立了稳定沉默DKK1基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control组和shNC组降低到72%和47%(均P<0.05)。细胞增殖曲线显示,与Control和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72h后其增殖显著降低(P<0.05)。与shNC组比较,DKK1-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关(均P<0.05)。结论:沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。

关键词：厚体1基因胃癌 AGS细胞增殖细胞周期凋亡

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RANKL基因rs9594738位点与贵州燃煤污染型地氟病的相关性

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贵州医科大学学报 2020年第1期45卷 1-6,12页

作者：田薇李鸣喻艳琴张秀秀王婵娟张婷单可人官志忠何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 不详

目的:探讨核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤污染型地氟病的关系。方法:选取燃煤污染型地氟病病区样本365例为病例组,其中地氟重症组(氟斑牙明显且有氟骨症症状者)130例、地氟轻症组(有氟斑牙且无氟... 详细信息

目的:探讨核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤污染型地氟病的关系。方法:选取燃煤污染型地氟病病区样本365例为病例组,其中地氟重症组(氟斑牙明显且有氟骨症症状者)130例、地氟轻症组(有氟斑牙且无氟骨症症状者)235例,另选贵州省黔南布依族苗族自治州长顺县样本235例为对照组(无氟斑牙及氟骨症症状);采用TaqMan-MGB探针基因分型方法对上述样本RANKL基因的SNP位点rs9594738进行基因分型,分析rs9594738等位基因和基因型在各组间的分布差异。结果:rs9594738位点在地氟重症组与对照组的等位基因分布频率差异有统计学意义(P<0.05),地氟重症组男女之间基因型频率和等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.05);遗传模式分析结果显示,在最优遗传模式显性遗传模式下,地氟重症组rs9594738基因型C/T-T/T可能是地氟重症人群的风险因素(P=0.014,OR=2.08,95%CI=1.16~3.72)。结论:RANKL基因rs9594738位点多态性与贵州省毕节市燃煤污染型地氟病氟骨症的发生可能有关联。

关键词：等位基因基因型燃煤污染型地氟病基因多态性 RANKL基因 rs9594738位点

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幽门螺杆菌毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白表达的影响

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中国病原生物学杂志 2019年第12期14卷 1394-1397,1402页

作者：鲍丽雅黄婷婷赵艳李超陈定宇王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科肝炎实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感... 详细信息

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感染原代胃癌细胞,感染6 h收集细胞蛋白,用高表达cagA的真核表达载体pcDNA3.1/cagA脂质体转染胃癌细胞AGS,24 h收集细胞蛋白,用Western blot检测各组细胞线粒体自噬相关蛋白***3表达变化。结果parkin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在1004 HpAcagA感染组分别为0.97±0.23 J.71±0.23,1.03+0.14,1004 Hp感染组分别为1.61±0,32,2.26±0,08,1.32±0,04,1004 Hp感染组较1004 HpAcagA感染组升高了1.66倍、1.32倍、1.27倍,差异有统计学意义(F值分别为7.96,15.35,11.09,P<0.05);par-kin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在pcDNA3.1空载体转染组分别为1.15+0.14,0.75+0.23,0.74±0,19,pcDNA 3.1/cagA转染组分别为1.49±0,02,1.01+0.02、l.29±0.07,pcDNA3.1/cagA转染组较pcDNA3.1空载体转染组升高1.29倍、1.35倍、1.74倍,差异有统计学意义(F值分别为17.48,14.02,21.06,P<0.05)。Hp/cagA+感染和pcDNA 3.1/cagA转染取得一致结果,提示Hp cagA注入胃上皮细胞后影响细胞线粒体自噬相关蛋白的表达。结论HpCagA对线粒体自噬有一定的调控作用,其可能是Hp诱导胃癌发生发展的分子机制。

关键词：胃癌细胞线粒体自噬幽门螺杆菌 CagA

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CircRNA4736通过“海绵状”吸附miR-206调控Seipin介导的线粒体自噬在缺血性脑卒中再灌注损伤的分子机制

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第6期33卷 409-410页

作者：禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室

目的缺血性脑卒中神经元损伤主要有2种形式:迟发性神经元坏死和凋亡。线粒体损伤和功能紊乱是脑缺血再灌注中导致神经元死亡的重要因素。因此,清除损伤的线粒体并避免对神经元造成更严重危害是缺血性脑卒中溶栓治疗后的再灌注损伤神经... 详细信息

目的缺血性脑卒中神经元损伤主要有2种形式:迟发性神经元坏死和凋亡。线粒体损伤和功能紊乱是脑缺血再灌注中导致神经元死亡的重要因素。因此,清除损伤的线粒体并避免对神经元造成更严重危害是缺血性脑卒中溶栓治疗后的再灌注损伤神经细胞保护的重要策略之一。内质网蛋白Seipin介导的线粒体自噬能够清除受损线粒体,但机制不清。本研究旨在探索circRNA4736是否竞争性吸附miR-206,解除miR-206对Seipin的抑制作用,从而上调Seipin蛋白的表达,促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元凋亡。方法通过RNA-seq检测PC12细胞正常组与OGD/R处理组中差异表达circRNA和miRNA的筛选及验证;构建circRNA4736和Seipin敲除、脑缺血再灌注的动物和细胞模型;检测目标circRNA4736、miR-206与靶基因Seipin内源性表达水平及其相关性;分析miR-206沉默对氧糖剥夺PC12细胞的影响;在PC12细胞中分析过表达circRNA4736通过充当'分子海绵'吸附miR-206,从而抑制miR-206对Seipin的阻碍作用;分析外源性circRNA4736对缺血再灌注损伤的神经细胞的保护作用。结果在Seipin-KO小鼠的MCAO模型发现,线粒体自噬水平较野生型小鼠MCAO模型显著降低;在Seipin敲低的PC12细胞经OGD/R处理后,线粒体自噬水平较野生型PC12细胞显著下降;PC12细胞Seipin缺失导致Akt-m TOR信号活性增加;通过全转录组测序分析获得了差异表达倍数最高的circRNA4736;同时我们发现,miR-206表达水平与circRNA4736呈负相关;双荧光素酶报告基因检测发现miR-206与circRNA4736和Seipin之间均具有相互结合位点,并且过表达circRNA4736或下调miR-206能够恢复Seipin表达及其介导的线粒体自噬;在PC12细胞的OGD/R模型中抑制miR-206水平,Seipin蛋白的表达得到回复,细胞纯化线粒体蛋白中P62和BNIP3的表达及Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均显著上调,即线粒体自噬增强;过表达circRNA4736能够有效促进OGD/R模型的PC12细胞Seipin的表达上调及显著抑制PC12细胞凋亡。结论 Seipin及其介导的线粒体自噬可能作为缺血性脑卒中溶栓治疗后导致的缺血再灌注损伤的潜在研究靶点,外源性circRNA4736通过'海绵状'竞争性结合miR-206,解除miR206对Seipin的3’UTR区的抑制作用,从而重新激活Seipin蛋白生物学功能,进而促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元的凋亡。

关键词：环状RNA4736 微小RNA206 Seipin蛋白线粒体自噬脑缺血再灌注

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MTHFR基因rs1801133位点多态性与贵州苗族和布依族及汉族人群原发性高血压的关系

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贵州医科大学学报 2020年第3期45卷 270-276,280页

作者：喻艳琴谢姣姣刁晓艳张秀秀王婵娟张婷单可人何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院心血管内科贵州贵阳550004

目的:探讨贵州苗族、布依族和汉族3个民族人群原发性高血压(EH)与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因rs1801133位点的关系。方法:选取保存的EH及健康体检者的DNA样本共850例,EH组有雷山苗族137例、荔波布依族131例及贵阳汉族163例,对照组... 详细信息

目的:探讨贵州苗族、布依族和汉族3个民族人群原发性高血压(EH)与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因rs1801133位点的关系。方法:选取保存的EH及健康体检者的DNA样本共850例,EH组有雷山苗族137例、荔波布依族131例及贵阳汉族163例,对照组有雷山苗族128例、荔波布依族131例及贵阳汉族160例;采用Taq Man探针法分别检测研究对象MTHFR基因rs1801133位点的基因分型,使用SPSS软件及SNPStats在线软件分析该位点多态性在2组被检者、2组被检者不同民族及不同性别人群的分布。结果:MTHFR基因rs1801133位点在各民族的2组被检人群中均存在C和T等位基因,以及CC、CT、TT 3种基因型;MTHFR基因rs1801133位点基因分型结果显示,布依族EH组与对照组比较、差异有统计学意义(P<0.05),其他民族组间比较、差异无统计学意义(P>0.05);各民族EH组及对照组男女间该位点基因型及等位基因分布比较,差异无统计学意义(P>0.05);遗传模式分析结果显示,3个民族人群在共显性遗传模式下CC、CT、TT基因型与EH的发生无相关性(P>0.05);布依族人群MTHFR基因rs1801133位点的最优遗传模式为隐性遗传模式,该遗传模式下TT基因型为危险基因型(OR=5.33,95%CI为1.14~24.82,P<0.05);贵州汉族与苗族、布依族之间MTHFR基因rs1801133位点多态性分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:贵州省布依族人群EH的发生可能与MTHFR基因rs1801133位点多态性有关联,TT基因型可能为EH发病的危险因素;贵州汉族与苗族、布依族之间MTHFR基因rs1801133位点多态性分布存在差异。

关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶少数民族危险因素原发性高血压同型半胱氨酸基因多态性

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腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响

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中国病原生物学杂志 2019年第11期14卷 1297-1302,1311页

作者：杨丽萍贾岑岑龙妮娅骆梅杨丹王珺谢渊赵艳王琴容周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州医科大学附属医院临检科

目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP(pAdeno-CagA),转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数(Multiplicity of infection, MOI) 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东亚株GZ7(CagA^+)以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶1/2(PKM1/2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调(P<0.05)。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加(P<0.05),感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。

关键词：幽门螺杆菌腺病毒 CagA 胃癌糖酵解细胞周期

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