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α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对APP/PS1小鼠海马组织中DYN-Ⅰ蛋白表达的影响

中风与神经疾病杂志 2017年第9期34卷 777-781页

作者：王晓玲邓于新董阳婷官志忠齐晓岚王凡地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州医科大学) 贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室(贵州医科大学) 贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院神经外科贵州贵阳550004

目的研究特异性激动APP/PS1转基因小鼠脑组织中α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)水平后对海马组织DYN-Ⅰ蛋白的影响;探讨α7 nAChR在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病机制中的神经保护作用机制。方法实验动物分为对照组(Control)... 详细信息

目的研究特异性激动APP/PS1转基因小鼠脑组织中α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)水平后对海马组织DYN-Ⅰ蛋白的影响;探讨α7 nAChR在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病机制中的神经保护作用机制。方法实验动物分为对照组(Control)、野生加PNU282987组(WP)、APP/PS1转基因组(APP/PS1)和APP/PS1加PNU282987组(AP)各8只,WP和AP组给予α7 nAChRs特异性激动剂PNU-282987,另两组给予生理盐水,给药方式为小鼠24 w龄时1 mg/kg腹腔注射PNU-282987,连续5 d。采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别测定小鼠海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与control组相比,APP/PS1组海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平下降(P<0.05,P<0.01);而特异性激动α7 nAChR水平后,与对照组相比WP组中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01);与APP/PS1组相比AP组小鼠大脑海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.01,P<0.01)。结论特异性激动APP/PS1转基因小鼠海马组织中α7 nAChR水平能够使网格蛋白内吞调节蛋白DYN-Ⅰ表达升高。这可能提示了α7 nAChR对突触有一定的保护作用,进一步说明α7 nAChR在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。

关键词： α7神经型尼古丁受体阿尔茨海默病 APP/PS1转基因鼠 DYN-Ⅰ

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PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系

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贵州医科大学学报 2019年第12期44卷 1390-1394页

作者：江银辉杨碧吴昌学周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室

目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用... 详细信息

目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用聚乙二醇(PEG)介导黄曲霉菌原生质体转化法,将携带ptrA的质粒pPTRI整合到黄曲菌株LD-F基因组DNA中,随机挑选7个转化子,通过聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,验证ptrA是否整合到黄曲菌基因组DNA中。结果:0.2 mg/L PT可以完全抑制黄曲霉菌的菌丝生长,1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶处理黄曲霉菌丝2 h可得到大量的原生质体;PCR检测结果显示,质粒pPTRI能够成功整合到黄曲菌基因组。结论:以PT为抗性筛选,建立PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系。

关键词：黄曲霉菌吡啶磺胺素 PEG介导原生质体遗传转化

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PNU282987通过α7神经型尼古丁受体激活PI3K/Akt/HSF1信号通路上调星形胶质细胞内源性αB-crystallin抑制Aβ聚集的研究

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第6期33卷 475-476页

作者：任真奎董智慧吕菊谢鹏胡玉梅官志忠禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 黔西南州人民医院检验科贵州兴义562400

目的β-淀粉样蛋白(Aβ)的异常聚集,导致细胞外老年斑和细胞内神经原纤维缠结的形成,从而引发的细胞毒性诱导神经元凋亡,导致渐进性认知功能障碍的临床表现,是阿尔茨海默病(AD)常见发病机制之一。因此,我们研究PNU282987激活SD新生乳鼠... 详细信息

目的β-淀粉样蛋白(Aβ)的异常聚集,导致细胞外老年斑和细胞内神经原纤维缠结的形成,从而引发的细胞毒性诱导神经元凋亡,导致渐进性认知功能障碍的临床表现,是阿尔茨海默病(AD)常见发病机制之一。因此,我们研究PNU282987激活SD新生乳鼠大脑皮质星形胶质细胞α7尼古丁乙酰胆碱能受体(n ACh R)后通过PI3K/Akt/HSF1信号通路介导内源性αB-crystallin(Cryab)对Aβ聚集的影响。方法分离出生24 h内SD乳鼠皮质层的星形胶质细胞进行培养、纯化、并传代,通过细胞免疫荧光的方法对星形胶质细胞进行鉴定;体外制备Aβ1-42寡聚体并进行鉴定;将细胞分为空白对照组、MLA处理组、PNU282987处理组、PNU282987+MLA处理组、LY294002处理组、PNU282987+LY294002处理组、Aβ处理组、PNU282987+Aβ处理组、PNU282987+LY294002+Aβ处理组及HSF1敲低组。收集细胞总蛋白,通过Western蛋白印迹法检测p-Akt,Cryab,HSF1和Aβ的蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光鉴定显示培养的原代星形胶质细胞占总细胞98%以上;Western蛋白印迹法对细胞中Cryab,p-Akt,HSF1和Aβ表达水平的结果显示:与空白对照组相比较,PNU282987处理后,Cryab,p-Akt,HSF1蛋白都表现出上升的趋势(P<0.05),而单独MLA组或LY294002组无明显差异;在HSF1敲低组,PNU282987上调Cryab的作用受到明显的抑制;正常对照组未检测到Aβ的表达,与Aβ组相比,PNU282987组的Aβ表达降低(P<0.05);与PNU282987+Aβ组相比,PNU282987+LY294002+Aβ组的Aβ表达升高(P<0.01)。结论在原代星形胶质细胞模型上,PNU282987可通过激活星形胶质细胞的α7 n ACh R介导HSF1上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚,PI3K/Akt信号通路很可能是这个过程中的重要参与因素,为探讨Cryab和HSF1可能是治疗AD的一个潜在靶点提供了一定的基础研究。

关键词：阿尔茨海默病星形胶质细胞 Cryab HSF1 α7尼古丁乙酰胆碱能受体

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外源性H_2S对血管性痴呆大鼠海马MDA、SOD、Cyt C表达的影响

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贵州医科大学学报 2019年第4期44卷 393-398,405页

作者：刘雨霞郑菊肖子宇张文萍李毅吴昌学官志忠肖雁贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学

目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)对血管性痴呆大鼠(VaD)学习记忆能力、脑组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及神经元细胞色素C(Cyt C)表达的影响。方法:60只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(VaD)、阳性对... 详细信息

目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)对血管性痴呆大鼠(VaD)学习记忆能力、脑组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及神经元细胞色素C(Cyt C)表达的影响。方法:60只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(VaD)、阳性对照组(Nimodipine)、NaSH低剂量组(Low-NaSH)及NaSH高剂量组(High-NaSH),除假手术组(仅分离双侧颈总动脉但不结扎)外,其余4组大鼠采用改良二血管法复制大鼠VaD模型,造模后阳性对照组给予尼莫地平10 mg/(kg·d)灌胃给药,NaSH低、高剂量组分别给予30μmoL/(kg·d)、100μmoL/(kg·d) NaSH灌胃给药,模型组及假手术组均给予等量生理盐水灌胃;给药30 d时,采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,水迷宫测试结束后采用BCA蛋白定量法测定样本蛋白浓度记为C_(样本),结合标准曲线计算组织中MDA含量;用BCA法测定样本蛋白浓度C_(样本),计算组织中SOD活力单位;Western blot法检测海马胞浆Cyt C表达。结果:与Sham组比较,VaD组大鼠的学习记忆能力显著下降,神经元胞浆蛋白中Cyt C表达显著升高,脑组织中MDA含量显著增多、SOD活性显著升高(P<0.01);与VaD组大鼠比较,加NaSH处理后,大鼠学习记忆能力显著提高,神经元胞浆蛋白中Cyt C表达显著降低、脑组织中MDA含量及SOD活性均显著降低(P<0.01),与阳性对照组结果相近。结论:NaSH可改善VaD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与NaSH降低大鼠海马的氧化应激水平、保护神经元细胞中线粒体功能有关。

关键词：痴呆,血管性硫化氢细胞色素C 氧化应激水迷宫丙二醛超氧化物歧化酶

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不同时间氧糖剥夺再灌注对SH-SY5Y细胞线粒体自噬及功能的影响

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贵州医科大学学报 2019年第4期44卷 399-405页

作者：刘雨霞郑菊张文萍李毅吴昌学齐晓岚官志忠肖雁贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学

目的:探讨不同时点氧糖剥夺再灌注(OGD/R)后人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体自噬及功能改变。方法:利用无糖DMEM及三气培养箱对SH-SY5Y细胞进行OGD/R,根据OGD/R不同时间将细胞分为control组、3 h/12 h组、3 h/24 h组、6 h/12 h组及6 ... 详细信息

目的:探讨不同时点氧糖剥夺再灌注(OGD/R)后人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体自噬及功能改变。方法:利用无糖DMEM及三气培养箱对SH-SY5Y细胞进行OGD/R,根据OGD/R不同时间将细胞分为control组、3 h/12 h组、3 h/24 h组、6 h/12 h组及6 h/24 h组,OGD/R后采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位及活性氧(ROS)含量,采用Western blot法检测线粒体蛋白Beclin1及P62表达。结果:与control组比较,OGD/R后SH-SY5Y细胞线粒体膜电位发生去极化(P<0.01)、胞内ROS含量升高(P<0.01),3 h/24 h组、6 h/12 h组及6 h/24 h组线粒体Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01),,3 h/12 h、6 h/24 h组线粒体P62蛋白表达升高(P<0.05); OGD/R各组间比较,3 h/24 h组线粒体去极化程度、细胞内ROS含量及线粒体Beclin1蛋白表达水平均较3 h/12 h组显著升高(P<0.01),且6 h/24 h组ROS含量最高(P<0.01)。结论:SH-SY5Y细胞OGD/R后线粒体功能受损且线粒体自噬活性升高,且随着缺血时间及再灌注时间增加线粒体受损加重,线粒体自噬也增加。

关键词： SH-SY5Y 再灌注流式细胞术活性氧线粒体膜电位线粒体自噬氧糖剥夺

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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析

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四川大学学报（自然科学版） 2024年第4期61卷 320-331页

作者：邵瑞瑞周青帅崔古贞廖健程玉梅官志忠齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550001

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 详细信息

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础.

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特征基因组分析耐药菌治疗

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Y染色体DNA遗传标记在汉藏语系民族研究中的应用

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贵州医科大学学报 2019年第4期44卷 373-378页

作者：张秀秀何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学

Y染色体DNA存在严格的父系遗传和非重组等特性,其上单核苷酸多态性(Y-SNP)和短串联重复序列(Y-STR)已广泛用于人群或族群的父系遗传背景研究;本文针对Y染色体常用遗传标记Y-SNP和Y-STR的特性,综述其在汉藏语系民族的起源、迁徙和融合等... 详细信息

Y染色体DNA存在严格的父系遗传和非重组等特性,其上单核苷酸多态性(Y-SNP)和短串联重复序列(Y-STR)已广泛用于人群或族群的父系遗传背景研究;本文针对Y染色体常用遗传标记Y-SNP和Y-STR的特性,综述其在汉藏语系民族的起源、迁徙和融合等相关研究中扮演的角色和重要作用。

关键词： Y-SNP Y-STR 民族起源民族迁徙汉藏语系民族

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RANKL基因rs9594738位点与贵州燃煤污染型地氟病的相关性

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贵州医科大学学报 2020年第1期45卷 1-6,12页

作者：田薇李鸣喻艳琴张秀秀王婵娟张婷单可人官志忠何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 不详

目的:探讨核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤污染型地氟病的关系。方法:选取燃煤污染型地氟病病区样本365例为病例组,其中地氟重症组(氟斑牙明显且有氟骨症症状者)130例、地氟轻症组(有氟斑牙且无氟... 详细信息

目的:探讨核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤污染型地氟病的关系。方法:选取燃煤污染型地氟病病区样本365例为病例组,其中地氟重症组(氟斑牙明显且有氟骨症症状者)130例、地氟轻症组(有氟斑牙且无氟骨症症状者)235例,另选贵州省黔南布依族苗族自治州长顺县样本235例为对照组(无氟斑牙及氟骨症症状);采用TaqMan-MGB探针基因分型方法对上述样本RANKL基因的SNP位点rs9594738进行基因分型,分析rs9594738等位基因和基因型在各组间的分布差异。结果:rs9594738位点在地氟重症组与对照组的等位基因分布频率差异有统计学意义(P<0.05),地氟重症组男女之间基因型频率和等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.05);遗传模式分析结果显示,在最优遗传模式显性遗传模式下,地氟重症组rs9594738基因型C/T-T/T可能是地氟重症人群的风险因素(P=0.014,OR=2.08,95%CI=1.16~3.72)。结论:RANKL基因rs9594738位点多态性与贵州省毕节市燃煤污染型地氟病氟骨症的发生可能有关联。

关键词：等位基因基因型燃煤污染型地氟病基因多态性 RANKL基因 rs9594738位点

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贵州3个世居少数民族CCR5基因Δ32多态分布

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广东医学 2018年第1期39卷 88-91页

作者：国学红何燕张秀秀王婵娟张婷官志忠地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室(贵州医科大学) 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的调查贵州3个世居少数民族人群(苗族、布依族、水族)中趋化因子受体5(CCR5)基因Δ32位点多态性分布情况。方法采用PCR法直接扩增120例男性样本(雷山苗族27例、荔波布依族70例、荔波水族23例)的CCR5Δ32等位基因,分析PCR扩增产物并对... 详细信息

目的调查贵州3个世居少数民族人群(苗族、布依族、水族)中趋化因子受体5(CCR5)基因Δ32位点多态性分布情况。方法采用PCR法直接扩增120例男性样本(雷山苗族27例、荔波布依族70例、荔波水族23例)的CCR5Δ32等位基因,分析PCR扩增产物并对产物进行测序验证。结果 3个世居少数民族人群中只发现了169 bp片段的野生型基因型,CCR5Δ32等位基因突变频率为0。结论贵州3个世居少数民族人群CCR5Δ32等位基因突变频率较低,可能对人类免疫缺陷性病毒(HIV-1)易感。

关键词： CCR5△32基因贵州少数民族 HIV-1 易感性

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天麻对APP/PS1痴呆小鼠模型的神经保护作用及其对衰老相关蛋白的影响

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中国老年学杂志 2023年第23期43卷 5767-5772页

作者：高玉梅王晓玲胡晓霞李若淳江沂齐晓岚周莉贵阳康养职业大学贵州贵阳550081 赣南医学院第一附属医院检验科贵州医科大学基础医学院生理学教研室广州医科大学附属中医医院贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室

目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg... 详细信息

目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg·d)的RG,各组小鼠6月龄时进行水迷宫实验;免疫组织化学检测脑组织内Aβ聚集;Western印迹测定脑组织中衰老相关蛋白p53、p21表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组脑组织中白细胞介素(IL)-6、IL-8表达。结果与正常组比较,模型组学习记忆能力显著降低,脑组织内Aβ斑块聚集明显增多,p21、IL-6、IL-8表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,模型加药组学习记忆能力显著升高,脑组织内Aβ斑块聚集明显减少,p21、IL-6、IL-8表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论RG可能通过调控衰老相关蛋白及IL-6、IL-8表达延缓衰老进程,改善阿尔茨海默病(AD)病理进程。

关键词：阿尔茨海默病天麻衰老

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