检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2022年第10期38卷 1403-1417页

作者：安小琼谢鹏朱晓西龙婷婷禹文峰地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

关键词：大脑中动脉栓塞/再灌注 m^(6)A甲基化高通量测序环状RNA

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幽门螺杆菌6S RNA敲除菌株构建及对细胞毒性的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第1期39卷 44-50页

作者：崔古贞管玉祝刘芳王鑫鑫吴道艳洪伟向松张峥嵘张玉典陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550025 地方病与少数民族病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌生长及细胞毒性的影响。结果成功构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,与野生型菌株相比,敲除菌株的生长方式显著改变,对GES-1胃粘膜上皮细胞的毒性显著降低。结论6S RNA具有调控幽门螺杆菌生长及毒力相关因子的功能,为幽门螺杆菌生物学功能及转录调控机制研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 6S RNA 转录调控基因敲除

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活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 379-383页

作者：谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州省妇幼保健医院

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测... 详细信息

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体活性氧

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α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对小鼠海马组织突触相关蛋白的影响

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中国老年学杂志 2018年第2期38卷 257-259页

作者：王晓玲邓于新董阳婷官志忠齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学病理学教研室

目的探讨特异性激动小鼠α7神经型尼古丁受体(α7n AChR)水平对海马组织中突触相关蛋白表达的影响。方法选取6月龄非转基因C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(Control),腹腔注射0.5、1.0 mg/kg、3.0 mg/kg PNU282987组各8只。采用Real-tim... 详细信息

目的探讨特异性激动小鼠α7神经型尼古丁受体(α7n AChR)水平对海马组织中突触相关蛋白表达的影响。方法选取6月龄非转基因C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(Control),腹腔注射0.5、1.0 mg/kg、3.0 mg/kg PNU282987组各8只。采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western印迹)法分别测定小鼠海马组织中囊泡相关蛋白突触素(Syn)、突触小体相关蛋白(SNAP)-25和突触后致密物(PSD)-95 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1.0 mg/kg PNU282987组、3.0 mg/kg PNU282987组中突触相关蛋白Syn、PSD-95、SNAP-25的mRNA和蛋白表达水平均显著增高。结论特异性激动小鼠α7n AChR能够使海马组织中突触相关蛋白水平表达增加。这可能提示了α7n AChR与突触密切相关,这可能与其神经保护作用有关。

关键词： α7神经型尼古丁受体突触

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嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3049-3061页

作者：花登雄王鑫鑫陈峥宏洪伟汪依航俞青凤谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其... 详细信息

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。

关键词：大肠杆菌嗜热Ⅱ型内含子 Thermotargetron Tel3c/4c 内含子编码蛋白反转录结构域

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腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响

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中国病原生物学杂志 2019年第11期14卷 1297-1302,1311页

作者：杨丽萍贾岑岑龙妮娅骆梅杨丹王珺谢渊赵艳王琴容周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州医科大学附属医院临检科

目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP(pAdeno-CagA),转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数(Multiplicity of infection, MOI) 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东亚株GZ7(CagA^+)以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶1/2(PKM1/2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调(P<0.05)。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加(P<0.05),感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。

关键词：幽门螺杆菌腺病毒 CagA 胃癌糖酵解细胞周期

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甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

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中国公共卫生 2021年第1期37卷 100-103页

作者：王琪陈芳萍官志忠于燕妮楼迪栋贵州医科大学法医学院法医病理学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省分子生物学重点实验室贵州中医药大学基础医学院

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细... 详细信息

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现象;激光共聚焦显微镜观察溶酶体吞噬线粒体活性;Western bolt检测自噬标志蛋白LC3和P62及自噬调节蛋白PINK1和Parkin表达水平。结果METH诱导SH-SY5Y细胞24 h后,SH-SY5Y细胞凋亡水平与METH剂量呈正相关(P<0.05);线粒体超微结构破坏严重,数量减少,出现自噬小体,溶酶体数量增加,吞噬线粒体活性增强(P<0.05);LC3-II/LC3-I比值上升(P<0.05),P62蛋白早期表达水平不变,48 h后表达量下调(P<0.05);Parkin蛋白表达量升高,PINK1蛋白表达量无明显变化。结论METH通过诱导PINK1/Parkin信号通路介导了线粒体自噬,其自噬流通畅,自噬流末端反馈迟滞,可能与SH-SY5Y细胞凋亡有关。

关键词：甲基苯丙胺(METH) 线粒体自噬自噬调节蛋白细胞凋亡神经毒性

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大肠埃希菌密度感应调节子qseC基因失活突变株构建及其生物学特性

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实用医学杂志 2022年第3期38卷 288-294页

作者：周青帅赵行行李冬梅崔古贞陈峥宏任玮齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其... 详细信息

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其对大肠埃希菌生理、生化特征的影响。方法使用嗜热二型内含子基因打靶系统(Thermotargetron)构建大肠埃希菌HMS174菌株qseC基因失活突变株,测定其生长速率、溶血能力、生物膜形成和运动能力等表型的变化,以及对酸碱和6种抗生素的敏感性。结果成功构建了大肠埃希菌HMS174 qseC627s位点的打靶载体,该载体基因失活效率为100%。对比大肠埃希菌HMS174与ΔqseC627s突变株的表型发现,突变株生长速率和最大生物量降低、溶血能力丧失、生物膜形成能力降低、运动能力减弱、对酸、碱的耐受能力降低。抗生素敏感性测定结果表明,ΔqseC627s对氯霉素、氨苄青霉素、四环素、阿莫西林、甲硝唑耐受性降低。结论大肠埃希菌HMS174中qseC基因缺失后,突变株表型和对抗外界压力因素发生了显著改变。

关键词：大肠埃希菌密度感应系统 Thermotargetron 突变株表型

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GIV对脑缺血/再灌注损伤模型中神经炎症反应的影响

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安徽医科大学学报 2023年第1期58卷 54-59页

作者：陈明石鹏夏明燕龙婷婷禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院贵阳550004

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑... 详细信息

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑梗死面积;Longa神经生物学评分评价小鼠的神经功能缺损程度;ELISA检测小鼠外周血及细胞培养物上清液中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放水平、Western blot检测小鼠梗死灶周围皮质区组织中卷曲螺旋结构域蛋白(GIV)、TREM2及TLR4的蛋白表达;不同浓度(1、5、10μg/ml)的脂多糖(LPS),刺激BV2细胞24 h建立神经炎症模型,qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA水平、Western blot检测GIV的表达;运用siRNA干扰技术敲低GIV基因的表达后进行OGD/R培养处理;ELISA检测细胞培养基上清液中IL-6和TNF-α的释放浓度;Western blot检测GIV的敲低效率。结果成功构建的MCAO/R及OGD/R模型均激活了神经炎症应答反应,诱导了GIV的蛋白表达降低;MCAO/R诱导了小鼠外周血中IL-6和TNF-α的释放浓度增加,促进了TREM2及TLR4的蛋白表达;LPS激活了BV2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α表达,但不影响GIV的表达;siRNA干扰GIV基因的表达后进一步增加炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结论GIV基因可能特异性地参与调控脑缺血再灌注损伤诱导的神经炎症应答反应,其可能是脑缺血再灌注损伤的一个潜在治疗靶点。

关键词： GIV 脑缺血/再灌注损伤脂多糖氧糖剥夺/复氧 BV2细胞神经炎症

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α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对APP/PS1小鼠海马组织中AP180蛋白表达的影响

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中风与神经疾病杂志 2017年第10期34卷 873-877页

作者：邓于新王晓玲吴昌学官志忠齐晓岚地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州医科大学) 贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室(贵州医科大学) 贵州贵阳550004 贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004

目的探讨特异性激动APP/PS1转基因小鼠中的α7nAChR后其海马组织中突触后膜蛋白的表达变化。方法选择16只经过鉴定的APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组(APP/PS1)和APP/PS1+PNU282987组(AP),每组各8只;另选16只野生型小鼠随机分为对照组(Cont... 详细信息

目的探讨特异性激动APP/PS1转基因小鼠中的α7nAChR后其海马组织中突触后膜蛋白的表达变化。方法选择16只经过鉴定的APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组(APP/PS1)和APP/PS1+PNU282987组(AP),每组各8只;另选16只野生型小鼠随机分为对照组(Control)和野生+PNU282987组(WP),每组各8只。饲养小鼠达到24周龄后,AP组和WP组于每天进行Morris水迷宫行为学测试前4 h腹腔注射PNU282987(1 mg/kg/d),之后利用Morris水迷宫进行行为学测试,Real-time PCR及Western blotting法分别检测各组小鼠海马组织中AP180 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果与对照组比较,APP/PS1组海马组织中AP180 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01,P<0.01);而特异性激动α7 nAChR水平后,WP组中AP180 mRNA和蛋白水平升高(P<0.01,P<0.05);与APP/PS1组相比AP组小鼠大脑海马组织中AP180 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.01,P<0.01)。结论特异性激动APP/PS1转基因小鼠海马组织中α7 nAChR能够使网格蛋白介导的突触囊泡内吞过程中的关键蛋白AP180表达水平升高。这可能提示了α7nAChR对突触有一定的保护作用,进一步说明α7nAChR在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。

关键词： α7神经型尼古丁受体阿尔茨海默病 APP/PS1转基因鼠 AP180

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