检索结果-内蒙古大学图书馆

CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因及核心基因的筛选

贵州医科大学学报 2022年第2期47卷 125-132,162页

作者：贾岑岑程薇李雷蕾曾晓燕廖永慧谢渊周建奖赵艳贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的通过生物信息学方法筛选出CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因。方法根据人CD133^(+)和CD133^(-)人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metas... 详细信息

目的通过生物信息学方法筛选出CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因。方法根据人CD133^(+)和CD133^(-)人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metascape对DEGs进行基因本体论(GO)富集及京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析,利用STRING数据库及Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白质^(-)蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选核心基因;利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析核心基因与胃癌患者总生存率的关系。结果在CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞间筛选出305个DEGs,其中下调的DEGs 227个,上调的DEGs 78个;这些DEGs主要参与钙离子通道调节、DNA复制及DNA的代谢过程;KEGG通路分析提示DEGs主要富集于IL^(-)17信号通路、RNA运输以及MAPK信号通路;PPI筛选出20个关键基因,其中趋化因子8(CXCL8)、TCP1伴侣蛋白亚基2(CCT2)、核糖体产物因子2(RPF2)、蛋白酶体20S亚基α4(PSMA4)、胞质伴侣素6A(CCT6A)、蛋白酶体26S亚基(PSMD12)以及凝聚素Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)表达与胃癌患者的总生存率负相关,RUNX家族转录因子2表达与胃癌患者的总生存率正相关(P<0.05)。结论获得CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的305个DEGs及20个核心基因。

关键词：原代胃癌细胞 CD133 RNA-seq 差异表达基因生物信息学信号通路

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上调C99片段对N2a/APP695细胞中MAM活性及线粒体自噬的影响

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贵州医科大学学报 2022年第5期47卷 504-510页

作者：付燕林张文萍龙培艳郑菊高霄齐晓岚肖雁贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨上调淀粉样前体蛋白(APP)剪切产物C99对线粒体相关内质网膜(MAM)及线粒体自噬的影响。方法制作N2a/APP695细胞的AD模型,分为正常对照组及γ-分泌酶抑制剂组(DAPT组,10μmol/L DAPT完全培养基培养20 h);采用蛋白免疫印迹(Western... 详细信息

目的探讨上调淀粉样前体蛋白(APP)剪切产物C99对线粒体相关内质网膜(MAM)及线粒体自噬的影响。方法制作N2a/APP695细胞的AD模型,分为正常对照组及γ-分泌酶抑制剂组(DAPT组,10μmol/L DAPT完全培养基培养20 h);采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测2组细胞中C99、胆固醇酰基转移酶(ACAT1)、线粒体融合蛋白1和2(MFN2/1)、线粒体分裂蛋白1(FIS1)、线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的推定激酶1(PINK1)、E3泛素-蛋白连接酶(Parkin)、微管相关蛋白1-轻链3(LC3)、P62蛋白及细胞抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2蛋白(BCL-2)的表达;用JC-1染色法检测线粒体膜电位变化情况,激光共聚焦显微镜检测线粒体与内质网偶联情况。结果经过DAPT处理20 h后DAPT组N2a/APP695细胞中C99蛋白表达明显增加(P<0.01);与正常对照组比较,DAPT组细胞中ACAT1、MFN2、MFN1、FIS1、PINK1、Parkin及LC3蛋白表达水平上调,但P62、BCL-2蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);JC-1染色结果显示,DAPT组细胞中线粒体膜电位较正常对照组明显降低(P<0.01),而内质网与线粒体偶联增加。结论上调C99水平可以使N2a/APP695细胞中MAM的活性增加,影响线粒体分裂融合后导致线粒体自噬异常。

关键词：阿尔茨海默病 C99 线粒体相关内质膜线粒体自噬线粒体分裂融合

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基于RNA-Seq技术的真菌病毒AfPV1感染对寄主黄曲霉基因表达的影响

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贵州医科大学学报 2022年第12期47卷 1377-1384页

作者：江银辉杨碧刘翔田询禹文峰齐晓岚吴昌学贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的基于转录组测序(RNA-Seq)技术探讨真菌病毒黄曲霉(***)partitivirus 1(AfPV1)感染对寄主***基因表达的影响。方法分别提取无病毒感染的***菌株LD-F1和真菌病毒AfPV1感染的***菌株LD-F1-b的RNA进行文库构建和RNA-Seq;以***菌株NRRL 3... 详细信息

目的基于转录组测序(RNA-Seq)技术探讨真菌病毒黄曲霉(***)partitivirus 1(AfPV1)感染对寄主***基因表达的影响。方法分别提取无病毒感染的***菌株LD-F1和真菌病毒AfPV1感染的***菌株LD-F1-b的RNA进行文库构建和RNA-Seq;以***菌株NRRL 3357(GCA_009017415.1)的基因组为参考,分析RNA-Seq测序结果中有差异表达的基因(DEGs),并对DEGs进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析;随机选取12个DEGs,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对转录组进行验证。结果样品RNA完整无污染,测序结果可靠,错误率0.02%,测序的结果能够成功比对到***的基因组序列(>56%);获得真菌病毒AfPV1感染的***的DEGs有4127个;GO富集分析显示,DEGs涉及***的氧化还原过程、单生物过程、单生物代谢过程、跨膜转运、谷氨酰胺家族氨基酸代谢过程、谷氨酰胺家族氨基酸生物合成过程、二羟酸代谢过程及血红素结合等;KEGG富集分析显示,DEGs参与***代谢通路中的戊糖与葡萄糖醛酸互相转换、非同源重组末端连接、氮代谢、错配修复、同源重组、DNA复制、次级代谢产物的生物合成及碱基切除修复等;qRT-PCR的结果与转录组测序结果趋势一致。结论真菌病毒AfPV1感染***能够引起基因表达差异,DEGs涉及***生命过程中多个基因和多个信号通路。

关键词：真菌病毒转录组黄曲霉差异表达基因基因功能注释富集分析

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N2a/APP695细胞表达载脂蛋白E4对线粒体自噬的影响

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贵州医科大学学报 2022年第5期47卷 497-503页

作者：付燕林吴昌学郑菊龙培艳张文萍高霄王正微齐晓岚肖雁贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨载脂蛋白E4(APOE4)表达对N2a/APP695细胞中线粒体自噬的影响。方法慢病毒APOE4感染N2a/APP695细胞构建表达APOE4细胞组(表达组),同时设立N2a/APP695正常细胞组(正常组)、阴性对照慢病毒空载N2a/APP695细胞组(阴性对照组),共3个... 详细信息

目的探讨载脂蛋白E4(APOE4)表达对N2a/APP695细胞中线粒体自噬的影响。方法慢病毒APOE4感染N2a/APP695细胞构建表达APOE4细胞组(表达组),同时设立N2a/APP695正常细胞组(正常组)、阴性对照慢病毒空载N2a/APP695细胞组(阴性对照组),共3个实验组;培养72 h后进行嘌呤霉素筛选处理,Western blot检测细胞APOE4表达情况、线粒体融合蛋白-2(MFN2)、MFN1及线粒体分裂蛋白-1(FIS1)、线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,激光共聚焦观察线粒体形态及细胞中胆固醇含量,免疫荧光观察线粒体与LC3Ⅱ的共定位情况。结果成功构建表达APOE4的慢病毒感染N2a/APP695细胞;与正常组和阴性对照组相比,表达组MFN2、MFN1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FIS1、PINK1、Parkin蛋白表达明显上调(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值下调(P<0.05),线粒体形态碎片化和细胞中胆固醇高,LC3Ⅱ与线粒体的共定位减少。结论表达APOE4的N2a/APP695细胞中线粒体分裂增多、线粒体自噬关键通路障碍、自噬异常,这可能与APOE4减少胆固醇外排、细胞内游离胆固醇增多、进而破坏线粒体分裂融合平衡有关。

关键词：阿尔茨海默病载脂蛋白E 线粒体自噬胆固醇

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RANK基因2个SNP位点多态性与贵州燃煤污染型地氟病患病风险的相关性

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贵州医科大学学报 2022年第4期47卷 391-396页

作者：赵安宿田薇李瑞超喻艳琴王婵娟张婷吴昌学何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨核因子κB受体活化因子(RANK)基因rsrs1505034、rs884205单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤型地氟病患病风险的关系。方法483例贵州地氟病区人群按照氟斑牙诊断标准(WS/T 208-2011)分为地氟组(283例,氟斑牙程度在极轻度及以上)和... 详细信息

目的探讨核因子κB受体活化因子(RANK)基因rsrs1505034、rs884205单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤型地氟病患病风险的关系。方法483例贵州地氟病区人群按照氟斑牙诊断标准(WS/T 208-2011)分为地氟组(283例,氟斑牙程度在极轻度及以上)和对照组(200例,氟斑牙分度正常),采用TaqMan-MGB探针法对2组人群外周血DNA样本RANK基因的rs1505034、rs884205位点进行基因分型,分析rs1505034、rs884205等位基因和基因型在两组的分布,采用SNPstats对SNP位点基因型与燃煤型地氟病发生发展的相关遗传模式进行分析,采用SHEsis对RANK基因rs1805034和rs884205位点之间进行连锁不平衡分析。结果RANK基因rs1805034位点等位基因和基因型频率在地氟组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);最优遗传模式分析显示,RANK基因rs1805034位点最优遗传模式为共显性,在该遗传模式下C/T基因型和T/T基因型相对于C/C基因型是燃煤型地氟病发生的保护因素(OR=0.17,95%CI为0.09~0.31;OR=0.04,95%CI为0.02~0.08);rs884205位点与燃煤型地氟病的发生无相关性(P>0.05);SHEsis分析结果显示上述2个位点之间不存在连锁不平衡(D′<0.5)。结论RANK基因rs1805034位点多态型可能与贵州燃煤型地氟病的发生相关。

关键词：燃煤污染型地氟病 RANK基因基因多态性等位基因基因型

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贵州医科大学学报 2024年第10期49卷 1417-1427页

作者：夏明燕谢鹏任真奎朱晓西吴昌学禹文峰贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省第二人民医院检验科贵州贵阳550002 贵州医科大学贵州省高等学校功能与疾病人脑组织库重点实验室贵州贵阳550000

目的利用生物信息学分析筛选与缺血性脑卒中(IS)相关的microRNA(miRNA)和mRNA,通过实验鉴定关键基因、利用Cytoscape构建miRNA-mRNA相互作用网络,探讨其在IS中的作用及其主要调控的相关信号通路。方法从基因表达数据库(GEO)中下载微阵... 详细信息

目的利用生物信息学分析筛选与缺血性脑卒中(IS)相关的microRNA(miRNA)和mRNA,通过实验鉴定关键基因、利用Cytoscape构建miRNA-mRNA相互作用网络,探讨其在IS中的作用及其主要调控的相关信号通路。方法从基因表达数据库(GEO)中下载微阵列数据集GSE58294(mRNA谱)、GSE16561(mRNA谱)和GSE43618(miRNA谱),对GEO2R鉴定差异基因和mRNA、DAVID数据库筛选得到的差异表达基因(DEGs)进行功能及通路富集分析,通过STRING构建差异基因的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、MCODE插件从PPI中提取相互作用最密切的网络和关键基因,通过TargetScan预测差异表达miRNA(DEMs)的靶基因;利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)细胞模型、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证筛选得到的关键基因,利用蛋白免疫印迹(WB)检测铁死亡标志蛋白SLC2A3及GPX4的蛋白表达水平。结果共筛选到198个DEGs,基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)结果显示,198个基因主要参与Toll样受体信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控及细胞凋亡;从PPI网络中鉴定出12个关键基因(CEACAM1、CKAP4、ITGAM、STOM、SLC2A3、ADAM8、DEGS3、MOSPD2、FPR2、MCEMP1、CLEC4D及ADGRG3)和26个DEMs;根据miRNA和mRNA的靶向关系构建miRNA-mRNA作用网络对12个关键基因进行了验证,除MCEMP1外,其余11个关键基因都随再灌注时间延长而上调;利用生物信息学分析人外周血样本发现,SLC2A3与GPX4呈负相关;WB结果显示,当SLC2A3表达上调时、GPX4表达下调(P<0.05)。结论IS发生后DGEs和DEMs表达上调,本研究共筛选到198个DEGs,确定了12个关键DEGs和26个DEMs,构建了12个miRNA-mRNA调控网络,这些基因可能是IS的发病的潜在调控机制,在炎症过程的发生中起着重要作用。

关键词：微小RNA 蛋白质-蛋白质相互作用网络生物信息学分析氧糖剥夺/再灌注缺血性中风

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黔西南地区99582位新生儿耳聋基因热点突变筛查结果

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中华耳科学杂志 2022年第4期20卷 612-619页

作者：张秀秀慕容红梅李盼盼常华赵鸿李琼向玉婷唐大春黄婵何燕黔西南布依族苗族自治州人民医院产前诊断中心黔西南布依族苗族自治州562400 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学贵阳550004

目的对黔西南州2016年06月-2020年10月出生的99582名新生儿的耳聋基因突变情况进行分析,为新生儿耳聋基因突变防控提供科学依据。方法运用微测序技术(Microsequencing)检测黔西南地区99582位新生儿4个遗传性耳聋基因的20个常见突变位... 详细信息

目的对黔西南州2016年06月-2020年10月出生的99582名新生儿的耳聋基因突变情况进行分析,为新生儿耳聋基因突变防控提供科学依据。方法运用微测序技术(Microsequencing)检测黔西南地区99582位新生儿4个遗传性耳聋基因的20个常见突变位点,采用ArcMap 10.2软件基于筛查数据绘制当地耳聋空间分布图。结果 99582名新生儿中,共检测出耳聋基因异常者2812例(2.82%),其中GJB2基因杂合突变1594例(1.60%),线粒体DNA 12SrRNA突变187例(0.19%),SLC26A4基因杂合突变型812例(0.82%),GJB3基因突变192例(0.19%),复合杂合突变型27例(0.03%),在空间分布中存在高发区。结论黔西南州地区新生儿常见耳聋基因突变以GJB2基因突变为主。基因突变率以兴义市、普安县和兴仁市居多,针对高发区应加强筛查力度以减少耳聋的发生。

关键词：新生儿耳聋基因微测序突变

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基于网络药理学的益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫治疗效果及机制

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贵州医科大学学报 2024年第10期49卷 1405-1416,1427页

作者：沙婷高霄邓于新彭亚倩唐智况时祥齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院检验科贵州贵阳550004 贵阳中医学院第二附属医院神经内科贵州贵阳550000

目的基于网络药理学探讨益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(MG)大鼠免疫治疗的效果及机制。方法运用中医药分子机理生物信息学分析软件(BATMAN-TCM)筛选益气解毒复方相关靶点信息,利用在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库以及Geneca... 详细信息

目的基于网络药理学探讨益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(MG)大鼠免疫治疗的效果及机制。方法运用中医药分子机理生物信息学分析软件(BATMAN-TCM)筛选益气解毒复方相关靶点信息,利用在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库以及Genecards数据库查询MG疾病有关靶点的信息;通过注释、可视化和综合发现数据库(DAVID)、Metascape数据库对益气解毒复方治疗MG的潜在靶点进行蛋白-蛋白互作网络(PPI)分析、基因本体(GO)功能富集及京都基因组百科全书(KEGG)相关信号通路分析;制备鼠源性乙酰胆碱受体(AChR)Rα97-116肽段抗原乳剂并皮下注射至30只无特定病原体(SPF)级雌性Lewis大鼠的尾基部、后肢垫部及背部(第1次免疫注射),分别于第30天和第45天时进行加强免疫(第2、3次免疫注射),第3次免疫注射结束后1周判断实验性自身免疫性MG(EAMG)大鼠模型是否成功,造模成功后EAMG大鼠随机均分为模型组、0.945 g/(kg·d)益气解毒复方(低剂量)组、1.890 g/(kg·d)益气解毒复方(中剂量)组、3.780 g/(kg·d)益气解毒复方(高剂量)组及5.400 mg/(kg·d)醋酸泼尼松片剂组,另取6只SPF级雌性Lewis大鼠作为正常组,各药物组大鼠分别予对应药物、正常组和模型组大鼠分别予等体积纯净水,连续灌胃干预30 d,采用电子天平和Lennon评分检测各组大鼠灌胃干预前和干预第30天时的体质量和肌力,同时采用酶联免疫吸附试剂盒检测各组大鼠血清AChR抗体(AChR-Ab)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,采用流式细胞术方法检测各组大鼠灌胃干预第30天时外周血中白细胞分化抗原4(CD4^(+))T细胞、白细胞分化抗原8(CD8^(+))T细胞的百分比及T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率;灌胃干预30 d后处死各组大鼠,取骨骼肌组织,采用苏木精-伊红染色(HE)评估骨骼肌组织的形态学特征。结果筛选到益气解毒复方治疗疾病相关基因168个,PPI分析预测IL-6、TNF、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤蛋白(TP53)等可能是其治疗MG的重要靶点;GO功能富集结果表明,细胞组成(CC)、生物过程(BP)及分子功能(MF)涉及354个、4365个及61个条目,KEGG富集分析搜集到有关作用通路257条;灌胃干预第30天,与模型组相比,低、中、高益气解毒复方剂量组及醋酸泼尼松组大鼠体质量增加(P<0.01),Lennon评分降低(P<0.01),血清AChR-Ab、IL-1β、IL-6及TNF-α水平降低(P<0.05);EAMG大鼠血清中CD4^(+)T细胞分布及CD4^(+)/CD8^(+)比值减少(P<0.01),CD8^(+)T细胞分布增高(P<0.01),骨骼肌组织改善,肌纤维恢复,细胞核排列更规则,炎性细胞减少,其中益气解毒复方高剂量组效果较为明显。结论益气解毒复方可减轻EAMG大鼠炎症反应、减轻骨骼肌组织的损伤及促进免疫系统恢复,其机制与血清AChR-Ab水平降低及平衡CD4^(+)、CD8^(+)T细胞两者的比例有关。

关键词：大鼠重症肌无力益气解毒复方网络药理学 CD4^(+)/CD8^(+)比值乙酰胆碱受体抗体

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黑骨藤对高表达表皮生长因子受体突变体Ⅲ的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及机制

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贵州医科大学学报 2023年第10期48卷 1137-1144页

作者：唐银彤官志忠陆定艳陈帅帅吴忠秀曹陶涛郭玮钰刘亭贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(... 详细信息

目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(100 mg/L黑骨藤培养液)、中浓度黑骨藤组(200 mg/L黑骨藤培养液)及高浓度黑骨藤组(400 mg/L黑骨藤培养液),处理细胞24 h,采用细胞增殖与毒力检测试剂盒(MTS)检测各组DKMG、U87MG细胞的存活率,采用流式细胞术检测各组DKMG细胞凋亡率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及BCL2-Associated X(Bax)的信使核糖核酸(mRNA)表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋酶家族(Caspase-3、Cleaved caspase-3)蛋白的表达。结果MTS检测显示,与Con组相比,各浓度黑骨藤组DKMG细胞存活率明显降低(P<0.05),各浓度黑骨藤组U87MG细胞存活率比较、差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞凋亡率明显增加(P<0.05);qRT-PCR结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ和Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.05),Bax表达无变化(P>0.05);Western blot结果显示,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论黑骨藤可诱发DKMG细胞凋亡,产生细胞杀伤作用,其机制可能与下调EGFRvⅢ、Bcl-2、Caspase-3表达及上调Bax、Cleaved caspase-3表达有关。

关键词：细胞凋亡黑骨藤 DKMG细胞 U87MG细胞表皮生长因子受体突变体Ⅲ 细胞毒性

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活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 379-383页

作者：谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州省妇幼保健医院

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测... 详细信息

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体活性氧

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