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甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

中国公共卫生 2021年第1期37卷 100-103页

作者：王琪陈芳萍官志忠于燕妮楼迪栋贵州医科大学法医学院法医病理学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省分子生物学重点实验室贵州中医药大学基础医学院

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细... 详细信息

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现象;激光共聚焦显微镜观察溶酶体吞噬线粒体活性;Western bolt检测自噬标志蛋白LC3和P62及自噬调节蛋白PINK1和Parkin表达水平。结果METH诱导SH-SY5Y细胞24 h后,SH-SY5Y细胞凋亡水平与METH剂量呈正相关(P<0.05);线粒体超微结构破坏严重,数量减少,出现自噬小体,溶酶体数量增加,吞噬线粒体活性增强(P<0.05);LC3-II/LC3-I比值上升(P<0.05),P62蛋白早期表达水平不变,48 h后表达量下调(P<0.05);Parkin蛋白表达量升高,PINK1蛋白表达量无明显变化。结论METH通过诱导PINK1/Parkin信号通路介导了线粒体自噬,其自噬流通畅,自噬流末端反馈迟滞,可能与SH-SY5Y细胞凋亡有关。

关键词：甲基苯丙胺(METH) 线粒体自噬自噬调节蛋白细胞凋亡神经毒性

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医学院校研究生分子生物学技术实验教学创新体系的构建

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基础医学教育 2022年第2期24卷 103-105页

作者：齐晓岚张婷洪伟谢渊何燕沈祥春贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院

分子生物学技术是推动生命科学领域及其他多个相关领域学科发展的关键技术,是各个科学研究领域的必备工具。随着分子生物学的发展以及其重要性的逐渐提升,博士、硕士研究生及本科生对分子生物学技术教学的需求也日益明显且各有侧重。文... 详细信息

分子生物学技术是推动生命科学领域及其他多个相关领域学科发展的关键技术,是各个科学研究领域的必备工具。随着分子生物学的发展以及其重要性的逐渐提升,博士、硕士研究生及本科生对分子生物学技术教学的需求也日益明显且各有侧重。文章通过对研究生课程实践教学体系、教学模式、教学方法等进行教学体系构建的探索,提升实验技术课的教学效果,为培养高素质的医学院校研究生提供参考。

关键词：分子生物学技术实验教学教学改革

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幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

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贵州医科大学学报 2022年第2期47卷 133-140页

作者：贾岑岑王琴容周建奖程薇赵艳贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院血液科贵州贵阳550004

目的探讨幽门螺杆菌(***)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的***东亚株GZ7及其CagA敲除株*** GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌(***)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的***东亚株GZ7及其CagA敲除株*** GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;*** GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于*** GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。结论CagA是***感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。

关键词：螺杆菌,幽门胃肿瘤细胞周期细胞毒素相关基因A蛋白 DNA损伤磷酸化组蛋白H2AX

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精准医学背景下医学院校医学分子生物学教学改革浅析

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黔南民族医专学报 2022年第2期35卷 147-148页

作者：齐晓岚张婷洪伟谢渊何燕沈祥春地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州医科大学)贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

精准医学是以基因组测序技术、生物信息学和大数据科学的交叉应用而发展起来的突出个体化诊疗的新型医学理念与医疗模式。精准医学的推广实施依赖于分子生物学的理论与技术的进步。因此提高与增强医学生分子生物学理论知识、实践技能,... 详细信息

精准医学是以基因组测序技术、生物信息学和大数据科学的交叉应用而发展起来的突出个体化诊疗的新型医学理念与医疗模式。精准医学的推广实施依赖于分子生物学的理论与技术的进步。因此提高与增强医学生分子生物学理论知识、实践技能,改善科研创新思维与创新能力水平方面至关重要。我们对地方医药院校医学生分子生物学课程教学改革进行思考与分析,以期能更好地提高适应精准医学背景下医学分子生物学课程教学效果。

关键词：精准医学医学分子生物学教学改革

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地方性氟中毒家兔的心、肝、肾组织病理学特征

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贵州医科大学学报 2023年第5期48卷 545-549页

作者：江梦露李颖官志忠段庆红贵州医科大学附属医院影像科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属肿瘤医院影像科贵州贵阳550003 贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的观察地方性氟中毒(地氟病)家兔心、肝、肾组织的病理学变化。方法24只家兔随机均分为3组,对照组饮用自来水20周,10周组饮用200 mg/L含氟水10周、20周组饮用200 mg/L含氟水20周造模,实验持续20周;观察实验期间各组家兔的生长情况,实... 详细信息

目的观察地方性氟中毒(地氟病)家兔心、肝、肾组织的病理学变化。方法24只家兔随机均分为3组,对照组饮用自来水20周,10周组饮用200 mg/L含氟水10周、20周组饮用200 mg/L含氟水20周造模,实验持续20周;观察实验期间各组家兔的生长情况,实验结束时处死家兔,采用氟离子选择电极法测定家兔股骨骨氟含量,取各组家兔心肝肾、观察外观变化,苏木素-伊红(HE)染色、病理形态学观察。结果实验期间,10周组、20周组家兔体长、体质量平均增长率略低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05);对照组、10周组、20周组家兔骨氟分别为(548.33±41.65)mg/kg、(1709.40±236.91)mg/kg、(2754.65±427.61)mg/kg,后两组较对照组家兔的骨氟含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,两模型组家兔心脏稍充血,肝脏增大,肾脏外观较苍白;HE染色发现,与对照组相比,两模型组家兔心肌横纹模糊、心肌纤维肿胀、界限不清,肝细胞排列紊乱、部分出现水肿、胞浆疏松、出现空泡变性,部分肾小管上皮细胞空泡样变、偶见局灶性坏死、炎性细胞浸润。结论地方性氟中毒家兔的心肝肾均发生病理学改变。

关键词：氟中毒兔 HE染色病理变化组织学

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CD630 27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和抗生素的耐受性

CD630 27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和...

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中国微生物学会第十一届地质微生物学学术研讨会

作者：杨君仪鲍江舰邵瑞瑞张婷廖健程玉梅官志忠齐晓岚陈峥宏崔古贞洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵州贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵州贵阳550001 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。[目的]本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株表型差异,探讨CD630_27900基因对艰难拟梭菌感染的影响。[方法]用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange,ACE)构建CD630_27900基因缺失菌株与回补菌株。比较它们在生长曲线、自溶素(cwp19,Acd)基因表达、细胞毒力、主要毒素基因表达、抗生素及pH敏感性差异,以研究 CD630_27900基因的功能。[结果]成功构建ΔCD630_27900突变菌株和：：CD630 27900 回补菌株。菌株ΔCD630 27900 在衰亡期自溶速率显著低于菌株CD630,∷CD630_27900自溶速率恢复。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)结果显示,缺失 CD630_27900 基因,自溶素cwp19、Acd基因表达量降低,∷CD630_27900自溶素基因表达增强。相较于CD630,ΔCD630_27900菌株细胞毒力、毒素基因tcdA、tcdB表达量降低。相较于CD630,ΔCD630_27900对氨苄青霉素、甲硝唑、阿莫西林、万古霉素、诺氟沙星、头孢西丁、卡那霉素更加敏感,∷CD630_27900对以上抗生素敏感性恢复。此外,ΔCD630 27900对酸比CD630敏感,对碱敏感性未发生变化。∷CD630 27900对酸敏感性恢复至野生型水平。[结论]敲除CD630_27900基因,艰难拟梭菌自溶速率变慢、自溶素cwp19、Acd基因表达量降低、细胞毒力、毒素基因tcdA和 tcdB降低,说明CD630_27900基因影响菌株自溶以及毒力释放。菌株ΔCD630_27900对临床上常见的抗生素及酸性环境更加敏感,且这些变化均可通过基因回补恢复。提示该基因可作为联合抗生素治疗艰难梭菌感染(Clostridioides difficile infection,CDI)的潜在靶点。

关键词：

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肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定

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贵州医科大学学报 2023年第3期48卷 259-265页

作者：彭秀玲邵瑞瑞田艳黄孝彬陈绍海文胜陈峥宏崔古贞齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室&贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学生物与工程学院贵州贵阳550025 贵州建设职业技术学院公共艺术教研室贵州清镇市551400 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025

目的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定。方法以18株临床分离肺炎克雷伯菌为宿主菌,采用双层平板法从水样中分离肺炎克雷伯菌噬菌体并进行纯化,透射电镜观察噬菌体形态,提取噬菌体DNA及蛋白并测定其生理生化特性。结果成功分... 详细信息

目的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定。方法以18株临床分离肺炎克雷伯菌为宿主菌,采用双层平板法从水样中分离肺炎克雷伯菌噬菌体并进行纯化,透射电镜观察噬菌体形态,提取噬菌体DNA及蛋白并测定其生理生化特性。结果成功分离到1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体,并命名为KP-ZS5,pH稳定性实验表明KP-ZS5不耐强酸(pH≤3);限制性片段酶切多样性(RFLP)分析表明,KP-ZS5基因组中存在3个BglⅡ酶切位点,预计总基因组大小为20000~30000 bp;裂解谱实验表明,KP-ZS5可以感染33%(6/18)的临床肺炎克雷伯菌株;SDS-PAGE结果显示,在KP-ZS5外壳蛋白由3种蛋白组成,外壳蛋白分子量为35~48 kDa。结论成功分离出1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体KP-ZS5,该噬菌体具有较广的宿主范围和pH值耐受性,外壳蛋白组成简单,仅含3种分子量为35~48 KDa的组分,具有在临床治疗肺炎克雷伯菌感染的潜力。

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生理生化特征双层平板法噬菌体疗法

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贵州壮侗语族7个少数民族21个Y-SNP多态性

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中山大学学报（自然科学版） 2020年第1期59卷 125-132页

作者：张秀秀喻艳琴田薇张婷王婵娟单可人何燕地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室/贵州医科大学贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

调查贵州壮侗语族7个少数民族(水族、布依族、侗族、仡佬族、壮族、毛南族、仫佬族)人群Y染色体上21个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的遗传多态性,并探讨该人群与其他民族以及其他语族之间的遗传关系。采用SN... 详细信息

调查贵州壮侗语族7个少数民族(水族、布依族、侗族、仡佬族、壮族、毛南族、仫佬族)人群Y染色体上21个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的遗传多态性,并探讨该人群与其他民族以及其他语族之间的遗传关系。采用SNapShot法对445例贵州壮侗语族7个少数民族男性个体21个Y-SNP位点进行复合扩增检测,用直接计数法计算等位基因频率、单倍型频率与单倍群频率,运用SPSS 24软件进行主成分分析。在贵州水族、布依族、侗族、仡佬族、壮族、毛南族和仫佬族中,21个Y-SNP组成的单倍型多态性值(haplotype diversity,HD)分别为0.5977、0.9456、0.8856、0.8869、0.7686、0.3587和0.7078;与已报道的其他9个民族人群单倍群分布频率进行主成分分析,壮侗语族与苗瑶语族聚在一起。从父系遗传角度分析,壮侗语族与苗瑶语族亲缘关系较近。

关键词：壮侗语族 Y染色体单核苷酸多态性遗传多态性贵州

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幽门螺杆菌临床分离株CagA的序列比对及其对胃上皮细胞形态与功能的影响

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微生物学通报 2021年第5期48卷 1681-1688页

作者：全欣莹曾晓燕熊林王文玲赵艳谢渊王琴容张启芳周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 遵义市第一人民医院检验科贵州遵义563100 贵州省肿瘤医院腹部肿瘤科贵州贵阳550001

【背景】细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin Associated Gene A Protein,CagA)是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)重要的效应蛋白,CagA的多态性与胃癌的发生发展密切相关。【目的】比较幽门螺杆菌临床分离株的CagA结构差异,探讨不同CagA... 详细信息

【背景】细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin Associated Gene A Protein,CagA)是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)重要的效应蛋白,CagA的多态性与胃癌的发生发展密切相关。【目的】比较幽门螺杆菌临床分离株的CagA结构差异,探讨不同CagA对胃上皮细胞形态及功能的影响。【方法】对27株幽门螺杆菌的CagA序列进行比对,分析氨基酸组成差异及变异情况,用含不同CagA序列的5株***感染低恶性胃上皮细胞AGS 6 h,感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)为30:1,显微镜观察细胞形态变化,Western Blot法检测极性调节激酶1b(Polarity-Regulating Kinase 1b,PAR1b)的表达,ELISA检测培养液中白介素8(Interleukin-8,IL-8)的浓度。【结果】临床分离株的CagA存在结构和氨基酸组成差异,西方株的EPIYA基序存在更多变异,具有完整cagA基因的菌株感染后细胞形态发生显著变化。Western Blot分析结果显示:与对照组比较,西方株NCTC 11639和*** 26695感染的细胞中PAR1b的表达升高,而东亚株*** GZ7感染的细胞中PAR1b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);突变株*** GZ15及*** GZ7/ΔcagA感染后PAR1b的表达无显著变化。与对照组比较,实验组中***感染的细胞培养液中IL-8浓度均增加,东亚株促进IL-8分泌的能力大于西方株。【结论】含不同CagA的幽门螺杆菌发挥不同的生物学功能。东亚株能抑制PAR1b的表达,促进IL-8分泌的能力更强,***感染引起的细胞形态变化依赖cagA基因的完整性。

关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A 蛋白 EPIYA 基序极性调节激酶1b 白介素8

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嗜热基因打靶系统Thermotargetron构建及其打靶效率检测

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生物技术 2022年第3期32卷 276-283页

作者：花登雄管玉祝鲍江舰洪伟陈峥宏张馨月王鑫鑫郑建国谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

[目的]在大肠杆菌中构建基于嗜热Ⅱ型内含子的高效Thermotargetron基因打靶系统,并验证其温度敏感性及打靶效率,为嗜热Ⅱ型内含子功能分析建立快速遗传检测平台。[方法]首先,以大肠杆菌lacZ基因为靶基因,根据嗜热Ⅱ型内含子碱基识别规... 详细信息

[目的]在大肠杆菌中构建基于嗜热Ⅱ型内含子的高效Thermotargetron基因打靶系统,并验证其温度敏感性及打靶效率,为嗜热Ⅱ型内含子功能分析建立快速遗传检测平台。[方法]首先,以大肠杆菌lacZ基因为靶基因,根据嗜热Ⅱ型内含子碱基识别规律设计基因打靶引物,构建IPTG诱导型Thermotargetron打靶载体。然后,利用蓝白斑筛选及菌落PCR方法检测其打靶效率,并通过优化温度、IPTG浓度及诱导时间,确定Thermotargetron在大肠杆菌中的最佳打靶条件。[结果]在大肠杆菌正常生理条件下,Thermotargetron不具有基因打靶功能,而在45℃及以上条件下可获得较好的打靶效率,且在48℃、1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时在lacZ-369a、lacZ-60a、lacZ-515a三个位点的打靶效率分别达到98.05%±1.67%、91.76%±7.08%和69.77%±5.86%。[结论]在短暂耐高温的大肠杆菌中建立了IPTG诱导的Thermotargetron基因打靶系统,该系统在任意选择的3个靶位点的打靶效率平均为86.5%±12.1%,为嗜热Ⅱ型内含子的功能机制研究奠定了平台基础。

关键词：大肠杆菌 Thermotargetron 嗜热Ⅱ型内含子 lacZ基因遗传检测平台

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