检索结果-内蒙古大学图书馆

亚慢性氟中毒大鼠脑组织RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的变化及银杏叶提取物和RAGE阻断剂的保护作用

环境与职业医学 2023年第5期40卷 577-582页

作者：梁秋哲李红梅邓婕张婷马彦琳张凯琳贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室/贵州省分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

[背景]长期摄入过量的氟会蓄积在脑组织中并造成神经损伤和学习记忆能力的衰退,晚期糖基化终产物受体(RAGE)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/核因子κB(NF-κB)信号通路是其中的重要机制。[目的]研究亚慢性氟中毒大鼠脑组织RAGE/p38MAP... 详细信息

[背景]长期摄入过量的氟会蓄积在脑组织中并造成神经损伤和学习记忆能力的衰退,晚期糖基化终产物受体(RAGE)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/核因子κB(NF-κB)信号通路是其中的重要机制。[目的]研究亚慢性氟中毒大鼠脑组织RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的改变,并探讨银杏叶提取物(EGb761)和RAGE阻断剂(FPS-ZM1)对神经记忆能力的保护作用。[方法]选择雄性清洁级SD大鼠90只,将其分为9组,每组10只,造模周期6个月。分别为对照组(C组):自由饮用自来水(含氟量<0.5 mg·L^(−1)),低、高剂量染氟组(LF、HF组):分别自由饮用含氟量为10、50 mg·L^(−1)的自来水;银杏叶提取物干预组(CE、LFE、HFE组):在C、LF、HF组的基础上,每天给予100 mg·kg^(−1)·d^(−1)EGb761灌胃;FPS-ZM1干预组(CF、LFF、HFF组):在C、LF、HF组的基础上,造模结束前7 d每天腹腔注射1 mg·kg^(−1)·d^(−1)FPS-ZM1。检测各组大鼠的脑氟和血氟含量;水迷宫实验检测各组学习记忆能力;尼氏染色检测各组大鼠海马的病理形态学改变;蛋白免疫印迹法检测脑组织中RAGE及其配体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、NF-κB、p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR法检测RAGE、HMGB1、p38MAPK的mRNA表达水平。[结果]与C组血氟、脑氟相比,LF、HF组大鼠的血氟、脑氟含量均增加(P均<0.05)。水迷宫实验结果显示,与C组相比,LF组、HF组的逃避潜伏时间延长,穿越次数减少;与HF组相比,HFE组和HFF组的逃避潜伏时间缩短,穿越次数增加(P均<0.05)。尼氏染色结果显示,与C组相比,HF组尼氏体数量减少;与HF组相比,HFE组和HFF组尼氏体数量增加。Western blotting结果显示:与C组RAGE、HMGB1、NF-κB、p38MAPK、p-p38MAPK、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量相比,LF组RAGE、HMGB1、NF-κB、p-p38MAPK、IL-6和HF组的RAGE、HMGB1、NF-κB、p38MAPK、p-p38MAPK、IL-6、TNF-α上调(P均<0.05);与HF组相比,HFE组、HFF组的RAGE、HMGB1、NF-κB、p38MAPK、p-p38MAPK、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量均下调(P均<0.05);与LF组RAGE、HMGB1蛋白相对表达量相比,LFE组和LFF组均下调(P均<0.05)。实时荧光定量PCR法结果显示:与C组相比,LF、HF组RAGE、HMGB1的mRNA表达水平上调;与LF组相比,LFE组、LFF组的RAGE的mRNA表达水平下调;与HF组相比,HFE组、HFF组的RAGE、HMGB1的mRNA表达水平下调(P均<0.05)。[结论]亚慢性氟中毒引起的中枢神经系统损伤可能与RAGE/p38-MAPK/NF-κB信号通路激活有关,可损害大鼠的学习记忆能力,而EGb761和FPS-ZM1可能对神经损伤有一定的保护作用。

关键词：亚慢性氟中毒脑组织晚期糖基化终产物受体银杏叶提取物阻断剂

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抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

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中国老年学杂志 2023年第13期43卷 3187-3192页

作者：杨洁邓于新彭亚倩陈竹懿齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室、贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免... 详细信息

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。

关键词：原代星形胶质细胞 LY294002 冈田酸磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β p21 p53

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幽门螺杆菌6S RNA敲除菌株构建及对细胞毒性的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第1期39卷 44-50页

作者：崔古贞管玉祝刘芳王鑫鑫吴道艳洪伟向松张峥嵘张玉典陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550025 地方病与少数民族病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌生长及细胞毒性的影响。结果成功构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,与野生型菌株相比,敲除菌株的生长方式显著改变,对GES-1胃粘膜上皮细胞的毒性显著降低。结论6S RNA具有调控幽门螺杆菌生长及毒力相关因子的功能,为幽门螺杆菌生物学功能及转录调控机制研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 6S RNA 转录调控基因敲除

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幽门螺杆菌阿莫西林稳定耐药克隆的筛选及其基因突变的检测

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安徽医科大学学报 2024年第1期59卷 39-44页

作者：陆秋丹糜孟衡崔古贞张峥嵘吴晓娟陈峥宏贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550025 黔东南州人民医院检验科凯里556000 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室(贵州省医学分子生物学重点实验室) 贵阳550004

目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(M... 详细信息

目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(MIC),置于-80℃冻存3个月后再复苏,根据冻存后MIC下降情况判断其耐药性是否稳定。对获得的AMX最高MIC值的克隆H390r和出发菌株H390进行基因组测序分析和外排泵抑制试验,检测并鉴定与H390r获得的AMX高水平耐药性相关的基因突变。结果通过AMX筛选获得4个AMX高水平耐药克隆,MIC分别为12、32、64和≥256 mg/L,经-80℃冻存后,MIC均未发生改变。相比于亲本菌株H390,AMX稳定耐药克隆H390r存在多个基因的突变,包括与AMX耐药性相关的编码RND外排系统的hefC、编码孔蛋白的hopB与hopC和编码青霉素结合蛋白的ftsI。H390r在有外排泵抑制剂存在时对AMX的MIC大幅降低。结论AMX能够在不稳定耐药的Hp中筛选出稳定耐药的克隆;H390r存在与AMX耐药相关的hefC、hopB、hopC和ftsI基因突变。这些突变可能是H390r获得AMX稳定高水平耐药的主要原因。

关键词：幽门螺杆菌阿莫西林不稳定耐药稳定耐药

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GIV对脑缺血/再灌注损伤模型中神经炎症反应的影响

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安徽医科大学学报 2023年第1期58卷 54-59页

作者：陈明石鹏夏明燕龙婷婷禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院贵阳550004

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑... 详细信息

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑梗死面积;Longa神经生物学评分评价小鼠的神经功能缺损程度;ELISA检测小鼠外周血及细胞培养物上清液中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放水平、Western blot检测小鼠梗死灶周围皮质区组织中卷曲螺旋结构域蛋白(GIV)、TREM2及TLR4的蛋白表达;不同浓度(1、5、10μg/ml)的脂多糖(LPS),刺激BV2细胞24 h建立神经炎症模型,qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA水平、Western blot检测GIV的表达;运用siRNA干扰技术敲低GIV基因的表达后进行OGD/R培养处理;ELISA检测细胞培养基上清液中IL-6和TNF-α的释放浓度;Western blot检测GIV的敲低效率。结果成功构建的MCAO/R及OGD/R模型均激活了神经炎症应答反应,诱导了GIV的蛋白表达降低;MCAO/R诱导了小鼠外周血中IL-6和TNF-α的释放浓度增加,促进了TREM2及TLR4的蛋白表达;LPS激活了BV2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α表达,但不影响GIV的表达;siRNA干扰GIV基因的表达后进一步增加炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结论GIV基因可能特异性地参与调控脑缺血再灌注损伤诱导的神经炎症应答反应,其可能是脑缺血再灌注损伤的一个潜在治疗靶点。

关键词： GIV 脑缺血/再灌注损伤脂多糖氧糖剥夺/复氧 BV2细胞神经炎症

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CD630_27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和抗生素的耐受性

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微生物学报 2023年第6期63卷 2440-2455页

作者：杨君仪鲍江舰邵瑞瑞张婷廖健程玉梅官志忠齐晓岚陈峥宏崔古贞洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550001 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵州贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵州贵阳550001

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株... 详细信息

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株表型差异,探讨CD630_27900基因对艰难拟梭菌感染的影响。【方法】用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange, ACE)构建CD630_27900基因缺失菌株与回补菌株。比较它们在生长曲线、自溶素(cwp19,Acd)基因表达、细胞毒力、主要毒素基因表达、抗生素及pH敏感性差异,以研究CD630_27900基因的功能。【结果】成功构建△CD630_27900突变菌株和::CD630_27900回补菌株。菌株△CD630_27900在衰亡期自溶速率显著低于菌株CD630,::CD630_27900自溶速率恢复。实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitative polymerasechainreaction,RT-qPCR)结果显示,缺失CD630_27900基因,自溶素cwp19、Acd基因表达量降低,::CD630_27900自溶素基因表达增强。相较于CD630,△CD630_27900菌株细胞毒力、毒素基因tcdA、tcdB表达量降低。相较于CD630,△CD630_27900对氨苄青霉素、甲硝唑、阿莫西林、万古霉素、诺氟沙星、头孢西丁、卡那霉素更加敏感,::CD630_27900对以上抗生素敏感性恢复。此外,△CD630_27900对酸比CD630敏感,对碱敏感性未发生变化。::CD630_27900对酸敏感性恢复至野生型水平。【结论】敲除CD630_27900基因,艰难拟梭菌自溶速率变慢、自溶素cwp19、Acd基因表达量降低、细胞毒力、毒素基因tcd A和tcd B降低,说明CD630_27900基因影响菌株自溶以及毒力释放。菌株△CD630_27900对临床上常见的抗生素及酸性环境更加敏感,且这些变化均可通过基因回补恢复。提示该基因可作为联合抗生素治疗艰难梭菌感染(Clostridioides difficile infection, CDI)的潜在靶点。

关键词：艰难拟梭菌 CD630_27900基因肽聚糖脱乙酰化非等长同源臂偶联等位交换突变表型

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fliL基因显著影响艰难拟梭菌运动功能及产孢能力

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生物工程学报 2023年第4期39卷 1578-1595页

作者：鲍江舰杨君仪邵瑞瑞张婷廖健程玉梅官志忠齐晓岚陈峥宏洪伟崔古贞贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵州贵阳550001 贵州医科大学口腔医学院附属口腔医院贵州贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵州贵阳550001 贵州医科大学病理科贵州医科大学附属医院贵州贵阳550001

鞭毛基底体相关FliL家族蛋白(flagellar basal body-associated FliL family protein,fliL)基因编码FliL蛋白,FliL是一种与鞭毛基体相结合的单跨膜蛋白。为研究艰难拟梭菌fliL基因功能,使用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange,ACE)方法成功构建了fliL基因缺失(ΔfliL)和回补(::fliL)突变株,研究突变菌株与野生型菌株(CD630)生长曲线、抗生素敏感性、pH耐受性、运动能力及产孢能力等表型的差异。结果显示,菌株ΔfliL生长速率及最大生物量均小于菌株CD630,::fliL回补菌株生长情况回复至野生型。与CD630菌株相比,ΔfliL对阿莫西林、氨苄青霉素、诺氟沙星的敏感性提高,对卡那霉素、四环素敏感性降低,::fliL抗生素敏感性部分回复至野生型水平。与CD630菌株相比,ΔfliL游泳运动能力显著降低,::fliL运动能力超越野生型菌株CD630。相比菌株CD630,菌株ΔfliL在pH值为5时耐受能力显著提高,在pH值为9时,耐受能力显著降低。除此之外,ΔfliL产孢能力较CD630显著降低,::fliL产孢能力部分恢复。以上结果表明,艰难拟梭菌fliL基因与其运动能力、抗生素敏感性、环境耐受能力和产孢能力密切相关,可能进一步影响艰难拟梭菌菌株的致病力。

关键词：艰难拟梭菌非等长同源臂偶联等位交换鞭毛 fliL 突变株表型

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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析

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四川大学学报（自然科学版） 2024年第4期61卷 320-331页

作者：邵瑞瑞周青帅崔古贞廖健程玉梅官志忠齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550001 贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵阳550001 贵州医科大学附属医院综合ICU 贵阳550001 省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550001

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 详细信息

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础.

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特征基因组分析耐药菌治疗

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小鼠脑缺血再灌注损伤模型中circRNA的m^(6)A修饰及表达谱分析

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第10期38卷 1403-1417页

作者：安小琼谢鹏朱晓西龙婷婷禹文峰地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

关键词：大脑中动脉栓塞/再灌注 m^(6)A甲基化高通量测序环状RNA

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嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3049-3061页

作者：花登雄王鑫鑫陈峥宏洪伟汪依航俞青凤谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其... 详细信息

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。

关键词：大肠杆菌嗜热Ⅱ型内含子 Thermotargetron Tel3c/4c 内含子编码蛋白反转录结构域

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