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解剖学报 2019年第5期50卷 667-671页

作者：高杰胡蓉李红苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的探讨雨课堂在医学组织学实验教学中的适用性及其效果分析。方法将2017级126名学生随机分为雨课堂教学组(n=63)与传统教学组(n=63),两组学生分别在组织学实验课中实施传统教学和雨课堂教学,并对两组的学生从问卷调查、切片考核和理... 详细信息

目的探讨雨课堂在医学组织学实验教学中的适用性及其效果分析。方法将2017级126名学生随机分为雨课堂教学组(n=63)与传统教学组(n=63),两组学生分别在组织学实验课中实施传统教学和雨课堂教学,并对两组的学生从问卷调查、切片考核和理论考核3方面进行效果评价。结果雨课堂教学组与传统教学组进行比较,大部分学生对新的教学模式表示满意,切片和理论成绩差异均有统计学意义(P<0.05)。结论雨课堂适用于组织学实验课程教学,可锻炼学生多种能力,培养学生终身学习能力。

关键词：雨课堂组织学实验教学教学模式

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神经元素3过表达对诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响

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解剖学报 2021年第3期52卷 398-404页

作者：孔吟皓徐龙飞王琪韩晶洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550004

目的探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化。方法分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs... 详细信息

目的探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化。方法分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs,该过程包括低糖诱导和高糖诱导两阶段共21 d;实验分为两组,对照组仅进行分阶段诱导,实验组在分阶段诱导第6天感染载有目的基因Ngn3的慢病毒过表达载体,感染完成后继续诱导;电子显微镜观察诱导前、后细胞结构变化;两组细胞诱导完成后收集mRNA和蛋白质,通过Realtime PCR和Western blotting法比较诱导后两组细胞的胰岛素和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)表达情况;收集诱导中后期培养基上清液,ELISA测定C肽含量。结果成功分离HUCMSCs,细胞阳性表达CD105、CD90,阴性表达CD34、CD45,具有成脂、成骨分化能力;通过分阶段诱导将HUCMSCs向IPCs诱导,细胞阳性表达Mafa和胰岛素;实验组在诱导过程中成功过表达Ngn3;电子显微镜观察显示,实验组诱导细胞结构更为成熟;实验组IPCs胰岛素和Mafa的表达量明显高于对照组;诱导过程中实验组细胞分泌的C肽量高于对照组。结论慢病毒介导的Ngn3过表达提高了HUCMSCs向IPCs的诱导分化效率。

关键词：神经元素3 脐带间充质干细胞胰岛素分泌细胞基因过表达实时定量聚合酶链反应人

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VU0360172激活mGluR5对新生大鼠生发基质出血的保护作用

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中国药理学通报 2022年第7期38卷 1000-1004页

作者：王筱雅冯占辉熊英张晴杨清陈惠心汪朝云左丁叶兰贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院神经内科贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院机能学实验室贵州贵阳550025

目的研究VU0360172激活代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5)对新生大鼠生发基质出血(germinal matrix hemorrhage,GMH)产生的保护作用,并探讨其作用机制。方法7日龄SD大鼠随机分为假手术组、模型组、VU0360172低、中、高剂量组。颅内注射胶原酶Ⅶ-S建立乳鼠GMH模型,术后3 h腹腔注射不同剂量VU0360172,假手术组、模型组给予等容积溶剂;术后24 h对乳鼠进行神经行为学测试,测定脑含水量、脑血红蛋白含量,HE染色观察乳鼠脑部组织病理学,Western blot法检测Bcl-2、cleaved-caspase-3蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组神经行为学测试消耗时间增加,评分升高(P<0.01),脑含水量、脑血红蛋白含量增加(P<0.01),患侧脑组织损伤显著,Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05),cleaved-caspase-3蛋白表达上调(P<0.01);与模型组相比,VU0360172给药组神经测试时间缩短,评分降低(P<0.05),脑含水量、脑血红蛋白含量均降低(P<0.05),患侧脑组织损伤减轻,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),cleaved-caspase-3蛋白表达减少(P<0.01)。结论VU0360172激动mGluR5对乳鼠生发基质出血具有保护作用。

关键词： mGluR5 生发基质出血 VU0360172 细胞凋亡 Bcl-2 caspase-3

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美洲大蠊几丁质酶基因的原核表达及蛋白纯化

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基因组学与应用生物学 2016年第9期35卷 2311-2316页

作者：李宏伟王吉平张堤张春林赵文静张晶翟素珍贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物学教研室贵阳550025

昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建... 详细信息

昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建成功的pET32a-Cht1重组表达质粒导入大肠埃希菌Rosetta中,分别对诱导剂IPTG浓度和诱导时间进行优化,确定最佳诱导浓度和诱导时间,并对表达产物进行可溶性分析。表达产物经镍离子柱纯化后通过Western Blot鉴定。结果表明,美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1成熟肽基因编码区长1 083 bp,编码360个氨基酸。最佳诱导浓度和诱导时间分别为0.2 mmol/L和4 h。所得重组蛋白大小约60 k D,与预期结果大小一致,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Western Blot鉴定重组蛋白可与6×His-tag单克隆抗体特异性结合。说明成功构建了原核表达载体pET32a-Cht1,并诱导表达获得了重组几丁质酶蛋白。

关键词：美洲大蠊几丁质酶基因原核表达蛋白纯化

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黄精降低活性氧水平促进衰老内皮祖细胞功能的研究

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中国药理学通报 2019年第1期35卷 123-127页

作者：秦臻韦正新宰青青许键炜贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550025

目的观察黄精在老年大鼠内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)传代培养衰老进程中对细胞功能及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法分离培养大鼠骨髓EPCs并鉴定,将培养至第2代的EPCs分为4组,分别用黄精含药... 详细信息

目的观察黄精在老年大鼠内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)传代培养衰老进程中对细胞功能及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法分离培养大鼠骨髓EPCs并鉴定,将培养至第2代的EPCs分为4组,分别用黄精含药血清和空白对照血清继续培养至第4、6、8代。β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度;MTT法检测细胞增殖功能;Transwell小室检测迁移功能;体外成血管试剂盒检测成血管功能;流式细胞仪检测ROS水平。结果 EPCs在体外传代培养中,其衰老程度逐渐加重,并伴有增殖、迁移和成血管功能的明显减退,ROS水平急剧升高(P<0.05);经黄精干预后,EPCs衰老程度有所减轻,其功能有所增强,ROS水平明显降低(P<0.05)。结论黄精可能通过降低ROS水平来延缓传代培养EPCs的衰老进程,保护EPCs的功能。

关键词：黄精内皮祖细胞活性氧细胞衰老细胞功能老年大鼠

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Ⅱ型内含子及其生物技术应用研究进展

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生物工程学报 2022年第3期38卷 915-924页

作者：崔古贞花登雄谷俊莹陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025

型内含子(groupⅡintrons)是一类具有自我剪接功能的核酶,能够通过“归巢”(retrohoming)机制高频插入到DNA靶位点。Ⅱ型内含子对DNA靶位点的识别和剪接具有高度专一性和高效性,这种特性使其在基因工程中具有重要的应用价值。文中首先... 详细信息

型内含子(groupⅡintrons)是一类具有自我剪接功能的核酶,能够通过“归巢”(retrohoming)机制高频插入到DNA靶位点。Ⅱ型内含子对DNA靶位点的识别和剪接具有高度专一性和高效性,这种特性使其在基因工程中具有重要的应用价值。文中首先综述了Ⅱ型内含子基因打靶原理及其在微生物遗传改造中的应用;然后,根据Ⅱ型内含子“归巢”特点及其依赖高浓度Mg2+的特性,分析了Ⅱ型内含子在多功能基因编辑及真核生物应用中的局限性;最后,以笔者课题组研究工作为基础,结合Ⅱ型内含子自身结构特点,分析了Ⅱ型内含子在新型基因编辑工具开发方面的潜能,为Ⅱ型内含子生物技术应用提供借鉴。

关键词： Ⅱ型内含子 Targetron 基因编辑生物技术应用

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中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第2期36卷 158-160页

作者：牟小会吕清巧颜凤程金芝郑棉扬商正玲吴家红韦艳贵州医科大学基础医学院现代病原生物学实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室贵阳550025

流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，三带喙库蚊是其主要的传播媒介，感染人体后可引起流行性乙型脑炎（乙脑）。人群对本病普遍易感，15岁以下儿童发病率较高。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 PCR检测方法 TaqMan 中国大陆地区荧光定量 encephalitis 一步法单股正链RNA病毒

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地高辛和他莫昔芬协同抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭

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中国药理学通报 2021年第9期37卷 1256-1263页

作者：沈敬堃朱海涛梅珈彬潘际刚王璐王旭东贵州医科大学基础医学院生理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院肝胆外科贵州贵阳550004

目的探讨地高辛与他莫昔芬联合用药对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的机制。方法MTT法、平板克隆和流式细胞术实验检测他莫昔芬和地高辛联合用药对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,划痕和Transwell实验检测他莫昔芬与地高辛联合用药... 详细信息

目的探讨地高辛与他莫昔芬联合用药对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的机制。方法MTT法、平板克隆和流式细胞术实验检测他莫昔芬和地高辛联合用药对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,划痕和Transwell实验检测他莫昔芬与地高辛联合用药对MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测他莫昔芬和地高辛联合用药对MCF-7细胞中相关蛋白表达的影响。结果MTT、平板克隆和流式细胞术结果显示,地高辛可与他莫昔芬可协同抑制MCF-7细胞增殖并促进其凋亡;划痕愈合实验和Transwell实验结果显示地高辛与他莫昔芬联合用药可协同抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭;Western blot结果显示地高辛与他莫昔芬联合用药可协同抑制PI3K、p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin的表达,促进Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、E-cadherin的表达。结论他莫昔芬联合地高辛用药可协同抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,其机制可能与其抑制PI3K-AKT信号通路及EMT有关。

关键词：地高辛他莫昔芬乳腺癌细胞协同作用增殖上皮-间质转换

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不同刚度Ⅰ型胶原凝胶三维环境调控NK细胞免疫功能

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 81-86页

作者：龙世棋吴翠芳曾柱贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院免疫学教研室贵阳550029

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,... 详细信息

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,通过激光共聚焦显微镜观察其微结构,流变仪测量平台期的储能模量表征其刚度。将NK-92MI细胞培养于不同刚度Ⅰ型胶原凝胶中,倒置显微镜观察NK-92MI细胞的形态,高内涵成像系统记录NK-92MI细胞的自由迁移过程,分析迁移速度和距离。不同刚度的Ⅰ型胶原凝胶培养NK-92MI细胞24、48 h,再与人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)共培养后,用CCK8法检测DLD-1细胞增殖率,分析NK-92MI细胞的细胞杀伤能力。结果成功制备出刚度为(10.97±2.10)Pa的低刚度Ⅰ型胶原凝胶和刚度为(114.50±3.40)Pa的高刚度Ⅰ型胶原凝胶。与在低刚度Ⅰ型胶原凝胶中相比,在高刚度Ⅰ型胶原凝胶中,NK-92MI细胞呈现更细长的形态(P<0.05),细胞平均面积减少〔(69.88±26.97)μm^(2)vs.(46.59±21.62)μm^(2),P<0.05〕,细胞圆度减小(0.82±0.12 vs.0.78±0.18,P<0.05),细胞迁移速度降低〔(2.50±0.91)μm/min vs.(1.70±0.72)μm/min,P<0.001〕,迁移距离缩短〔(147.10±53.74)μm vs.(98.03±40.95)μm,P<0.0001〕,差异均有统计学意义。与低刚度Ⅰ型胶原凝胶相比,高刚度Ⅰ型胶原凝胶培养24 h的NK-92MI细胞可促进DLD-1细胞增殖〔增殖率(46.39±12.79)%vs.(65.87±4.45)%,P<0.05〕,降低细胞杀伤能力,48 h的比较结果类似〔增殖率(31.36±2.88)%vs.(74.57±2.16)%,P<0.05〕,差异均有统计学意义。结论不同刚度Ⅰ型胶原凝胶3D培养环境可改变NK-92MI细胞的形态、迁移能力以及杀伤功能。该研究为探索和理解生物力学微环境影响NK细胞免疫应答机制提供了研究基础,为优化免疫治疗方案提供理论依据。

关键词： Ⅰ型胶原细胞外基质力学杀伤细胞免疫应答

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基于网络药理学分析火棘果实提取物的抗炎作用及实验研究

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贵州医科大学学报 2025年第3期50卷 346-360页

作者：朱亮伍明江邱佳范芳芳梁冰贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵州贵阳561113 遵义医药高等专科学校药学系贵州遵义563006

目的基于网络药理学预测火棘果实提取物的活性成分,并验证其抗炎作用。方法通过数据库筛选火棘果实提取物与炎症相关的靶点,并分析药物靶点与疾病靶点的交集;制备火棘果实提取物,使用质谱分析其化学成分;通过小鼠耳肿胀模型比较耳肿胀度... 详细信息

目的基于网络药理学预测火棘果实提取物的活性成分,并验证其抗炎作用。方法通过数据库筛选火棘果实提取物与炎症相关的靶点,并分析药物靶点与疾病靶点的交集;制备火棘果实提取物,使用质谱分析其化学成分;通过小鼠耳肿胀模型比较耳肿胀度,构建大鼠足跖肿胀模型,检测大鼠的足跖肿胀率及炎症因子[白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和前列腺素E_(2)(prostaglandin E_(2),PGE_(2))]变化,计算其胸腺(脾脏)指数,从而评价火棘果实提取物的抗炎作用;构建小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)炎症模型,检测火棘果实提取物对细胞存活率、细胞上清液炎症因子NO、IL-1β、IL-6、TNF-α及PGE_(2)的浓度及其细胞蛋白炎症因子[IL-1β、IL-6、TNF-α、环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)]表达水平的影响;运用网络药理学方法进一步预测火棘果实提取物的作用分子靶点。结果预测了3种抗炎成分,识别出130个药物与疾病交集靶点;质谱分析鉴定火棘果实提取物中的11种化合物,原花青素B1、槲皮素、儿茶素与预测的抗炎成分一致;在二甲苯诱导的小鼠耳朵肿胀实验中,火棘低、中、高剂量组耳肿胀度低于对照组(P<0.05);在角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀实验中,火棘各高剂量组足跖肿胀度低于对照组(P<0.05),火棘低、中、高剂量组IL-1β、IL-6和TNF-α表达降低(P<0.05);火棘中、高剂量组的PGE_(2)表达减少(P<0.05),火棘低、中、高剂量组胸腺和脾脏指数升高(P<0.05);RAW264.7细胞炎症模型实验中,细胞活性结果显示,火棘果实提取物的半抑制浓度(IC_(50))为242.1 mg/L,火棘各剂量组细胞上清液和蛋白中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达减少(P<0.05),NO、PGE_(2)、COX-2表达降低(P<0.05);蛋白质互作网络(protein-protein interaction,PPI)分析识别出33个核心靶点,基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of gene and genomes,KEGG)分析获得670个条目和152条与炎症相关的信号通路;活性成分与前6个关键靶点的结合能均<-5.0 kcal/mol。结论火棘果实提取物能够减少炎症因子和炎症介质的表达,从而发挥抗炎作用。

关键词：火棘果实提取物质谱分析抗炎作用网络药理学分子对接

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