检索结果-内蒙古大学图书馆

西南农业学报 2025年

作者：郝倩倩吴书东张昌容国果彭建谭书萍尚小丽李博岩贵州医科大学公共卫生与健康学院贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州省农业科学院生物技术研究所

【目的】探明资源昆虫对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性，为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解，进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物转... 详细信息

【目的】探明资源昆虫对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性，为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解，进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物转化器，分别研究不同配比酒糟饲料〔T0（CK）：纯麦麸；T1：25%酒糟；T2：50%酒糟；T3：75%酒糟；T4：纯酒糟〕对家蝇和黑水虻的生物学特征等生长发育的影响；同时研究酒糟空白组（CK2）、自然发酵组（ZF）、家蝇幼虫取食组（MD）和黑水虻幼虫取食组（HI）4种处理条件下各组酒糟一般营养成分和木质纤维素的含量变化，综合分析筛选较优的酒糟降解利用方法。【结果】随酒糟含量增加，家蝇和黑水虻2种昆虫各虫态体重、体长、化蛹率、羽化率和存活率均呈下降趋势，T4较T0均差异显著，其中，T3和T4家蝇的存活率分别为79.26%和30.92%，黑水虻则分别为78.99%和65.06%；HI的酒糟总糖含量（13.2%）和粗蛋白质含量（13.1%）较MD更低（总糖和粗蛋白质含量分别为21.2%和16.2%）。MD、HI与ZF和CK2相比，纤维素和半纤维素的降解均存在显著差异（P＜0.05），其中，MD整体木质纤维素降解率为24.01%，HI木质纤维素降解率可达34.34%。【结论】家蝇和黑水虻能够通过有效降解酒糟中的木质纤维素和利用一般营养成分进行较好生长发育，整体而言，黑水虻较家蝇更易在酒糟中进行饲养，且对酒糟木质纤维素的降解效果更优，该研究结果为今后更好的利用资源昆虫产业化降解酒糟类农业有机废弃物提供重要的理论依据。

关键词：家蝇黑水虻农业资源昆虫酒糟类有机废弃物生物降解木质纤维素

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家蝇与黑水虻对酒糟利用的比较研究

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西南农业学报 2025年第2期38卷 422-428页

作者：郝倩倩吴书东张昌容国果彭建谭书萍尚小丽李博岩贵州医科大学公共卫生与健康学院贵阳561113 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵阳561113 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳561113 贵州省农业科学院生物技术研究所贵阳550025

【目的】探明家蝇和黑水虻对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性,为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解,进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物... 详细信息

【目的】探明家蝇和黑水虻对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性,为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解,进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物转化器,分别研究不同配比酒糟饲料[T_(0)(CK):纯麦麸;T_(1):25%酒糟;T_(2):50%酒糟;T_(3):75%酒糟;T_(4):纯酒糟]对家蝇和黑水虻的生物学特征等生长发育的影响;同时研究酒糟空白组(CK_(2))、自然发酵组(ZF)、家蝇幼虫取食组(MD)和黑水虻幼虫取食组(HI)4种处理条件下各组酒糟一般营养成分和木质纤维素的含量变化,综合分析筛选较优的酒糟降解利用方法。【结果】随酒糟含量增加,家蝇和黑水虻2种昆虫的虫态体重、体长、化蛹率、羽化率和存活率均呈下降趋势,T_(4)较T_(0)均差异显著,其中,T_(3)和T_(4)家蝇的存活率分别为79.26%和30.92%,黑水虻则分别为78.99%和65.06%;HI的酒糟总糖含量(13.2%)和粗蛋白质含量(13.1%)较MD更低(总糖和粗蛋白质含量分别为21.2%和16.2%)。MD、HI与ZF和CK_(2)相比,纤维素和半纤维素的降解均存在显著差异(P<0.05),其中,MD整体木质纤维素降解率为24.01%,HI木质纤维素降解率可达34.34%。【结论】家蝇和黑水虻能够通过有效降解酒糟中的木质纤维素和利用一般营养成分进行较好生长发育,整体而言,黑水虻较家蝇更易在酒糟中进行饲养,且对酒糟木质纤维素的降解效果更优,该研究结果为今后更好地利用资源昆虫产业化降解酒糟类农业有机废弃物提供重要的理论依据。

关键词：家蝇黑水虻农业资源昆虫酒糟类有机废弃物生物降解木质纤维素

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金刚烷胺抗人呼吸道合胞病毒感染的体内外研究

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中国抗生素杂志 2025年

作者：陈芳张勇沈胡艳张平平林思宇侯长周张淋牟荣罗语思张科贵州医科大学基础医学院贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室/病毒研究所/现代病原生物学特色重点实验室/人体寄生虫学教研室贵州中医药大学药学院贵州医科大学附属医院急诊ICU 贵州医科大学附属医院六盘水医院急诊科

目的研究离子通道阻断剂金刚烷胺在体内外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)感染的活性。方法以MTT方法测定金刚烷胺对HEp-2细胞的半数毒性浓度，分别将30、60、90和120μmol/L金刚烷胺加入已感染RSV的HE... 详细信息

目的研究离子通道阻断剂金刚烷胺在体内外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)感染的活性。方法以MTT方法测定金刚烷胺对HEp-2细胞的半数毒性浓度，分别将30、60、90和120μmol/L金刚烷胺加入已感染RSV的HEp-2细胞上清，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验和免疫荧光实验评估金刚烷胺的体外抗病毒活性。将Balb/c小鼠分为Mock组、GZ08-18攻毒组、GZ08-18攻毒加10 mg/kg金刚烷胺治疗组、GZ08-18攻毒加20 mg/kg金刚烷胺治疗组和GZ08-18攻毒加50 mg/kg利巴韦林治疗组。通过小鼠体重变化、存活情况、肺指数、肺泡灌洗液病毒滴度、肺切片免疫荧光、肺组织病理损伤和炎症因子变化等评估金刚烷胺的体内抗病毒活性。结果体外实验qRT-PCR和免疫荧光结果显示不同浓度金刚烷胺处理后，病毒滴度与病毒融合蛋白表达均显著下降，且具量效依赖性。体内实验结果示，与GZ08-18攻毒组相比，金刚烷胺治疗后小鼠体重下降减缓，存活率显著提高，肺指数和病毒滴度在20 mg/kg金刚烷胺治疗组显著降低，肺组织切片病毒融合蛋白免疫荧光强度明显降低，相关炎症因子表达水平显著下调。肺组织病理切片的H&E染色结果示金刚烷胺明显抑制小鼠肺组织损伤。结论金刚烷胺在体内外均可显著抑制RSV感染。

关键词：人呼吸道合胞病毒金刚烷胺抗病毒离子通道

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斑马鱼结核性脑膜炎模型的制备及其用于抗结核性脑膜炎药物评价的研究

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贵州医科大学学报 2025年第4期50卷 502-512页

作者：刘茂颖牛良飞郭文娟郭晓奎宋曙晏博陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 上海市公共卫生临床中心上海201508 贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025

目的制备两种不同的斑马鱼-海分枝杆菌(Mycobacterium marinum,M.m)结核性脑膜炎模型,评价抗结核药物穿过血脑屏障清除斑马鱼脑部细菌的能力,评估模型应用于抗结脑药物评价的可行性。方法以斑马鱼幼鱼为观察对象,显微注射M.m至斑马鱼幼... 详细信息

目的制备两种不同的斑马鱼-海分枝杆菌(Mycobacterium marinum,M.m)结核性脑膜炎模型,评价抗结核药物穿过血脑屏障清除斑马鱼脑部细菌的能力,评估模型应用于抗结脑药物评价的可行性。方法以斑马鱼幼鱼为观察对象,显微注射M.m至斑马鱼幼鱼总主静脉与后脑,制备全身性与局限性感染的结核性脑膜炎模型;通过高内涵显微镜拍摄斑马鱼体内M.m的动态变化,同时利用抗酸染色、HE染色评估两种模型的制备效果;体外测试异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RIF)对M.m菌株的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);用不同剂量的INH、RIF以总主静脉注射或浸泡给药的方式处理脑部局部感染的斑马鱼幼鱼,通过检测药物作用后斑马鱼脑部菌载量,评价药物穿过血脑屏障对脑部M.m生长的作用。结果经总主静脉注射,M.m可随血液循环生长扩散至斑马鱼幼鱼脑部,可模拟肺外(mycobacterium tuberculosis,Mtb)随血液循环系统进入脑部的感染过程;后脑注射M.m可在斑马鱼脑部引发类上皮细胞增生、炎症细胞聚集等免疫反应,并且在感染后4 d,M.m仍局限在斑马鱼脑部,此种感染方式适用于研究药物入脑的效果;INH对抑制脑部M.m生长的效果优于RIF(P<0.05),提示INH能更好的穿透血脑屏障发挥功效。结论通过总主静脉、后脑注射M.m至斑马鱼幼鱼可成功制备斑马鱼结核性脑膜炎模型,该模型可用于评估抗结核药物通过血脑屏障的能力。

关键词：斑马鱼海分枝杆菌结核性脑膜炎模型异烟肼利福平

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抗生物降解药渣中高效水解木质素的菌株筛选

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贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 24-30页

作者：程敏王海洁黄劲赵亮王迪廖万清康颖倩贵州医科大学附属医院医院感染管理科贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地&贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025 海军军医大学长征医院皮肤科上海200003 上海市医学真菌分子生物学重点实验室上海200003

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果... 详细信息

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果从药渣中分离出42株真菌,经过木质素碳源平板筛选进一步发现了8株水解效果较好的丝状真菌,其中ZYJHYZ246、ZYJHYZ257、ZYJHYZ280在平板上脱色效果最明显;将以上8株真菌进行分子鉴定及LiP及Lac酶活检测发现多数菌株在发酵第5~7天时达峰值,其中阳性对照NDM3-2在第7天时产LiP酶最高,为223.59 U/L,其次是ZYJHYZ268,生长第3天时达峰值(176.85 U/L);Lac酶活结果表明,ZYJHYZ268是产酶最高的一株菌,在第5天时达到250.83 U/L,是阳性对照最高产酶时期的1.8倍。结论筛选出的ZYJHYZ268经鉴定为Piloderma sp.,其能产较高水平LiP与Lac,具有良好的水解木质素的能力,为降解木质素菌株提供了更多选择。

关键词：木质素中草药渣丝状真菌水解酶活

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纳米化特比萘芬的制备及其与常规药物体外抗菌活性的比较

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贵州医科大学学报 2025年第4期50卷 536-544,554页

作者：程敏徐东旭马露王梅竹罗罡曹荷清周路路廖万清康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院医院感染管理科贵州贵阳550004 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地&贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 海军军医大学长征医院皮肤科上海200003 上海市医学真菌分子生物学重点实验室上海200003

目的研究纳米化特比萘芬的制备及其与常规药物体外抗菌活性的比较。方法采用超声震荡技术制备纳米化特比萘芬,检测纳米化特比萘芬、特比萘芬、两性霉素-B、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑6种药物分别对红色毛癣菌GYKYQ02、石膏样小孢子菌... 详细信息

目的研究纳米化特比萘芬的制备及其与常规药物体外抗菌活性的比较。方法采用超声震荡技术制备纳米化特比萘芬,检测纳米化特比萘芬、特比萘芬、两性霉素-B、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑6种药物分别对红色毛癣菌GYKYQ02、石膏样小孢子菌GYKYQ01、白念珠菌ATCC10231和近平滑念珠菌ATCC22019的抗菌活性。结果成功制得粒径小、稳定性良好的纳米化特比萘芬;纳米化特比萘芬、特比萘芬、两性霉素-B、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑对红色毛癣菌GYKYQ02最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)依次为0.028125~0.05625、0.0625~0.125、0.0625~0.125、0.5~1、4~8及2~4 mg/L,对石膏样小孢子菌GYKYQ01 MIC依次为0.001758~0.003512、0.0625~0.125、0.0625~0.125、0.5~1、16~64及2~4 mg/L,对白念珠菌ATCC10231 MIC依次为0.0140625~0.028125、0.0625~0.125、0.03125、2~4、0.5~1及8~16 mg/L,对近平滑念珠菌ATCC22019 MIC依次为0.028125~0.05625、0.0625~0.125、0.0625、0.125、0.5~1、1 mg/L。结论本研究制备的纳米化特比萘芬与常规的5种药物相比,对两种皮肤癣菌和两种念珠菌的药敏试验的MIC值最低,抗真菌活性最好,抑菌效果增强。

关键词：纳米化特比萘芬抗菌活性皮肤癣菌念珠菌最低抑菌浓度

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家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin2的诱导表达条件优化及原核重组蛋白纯化

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贵州农业科学 2025年第04期53卷 66-72页

作者：王玮王丽国果修江帆尚小丽张昌容贵州省感染免疫与抗体工程特色实验室贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色实验室贵州省生物技术研究所

【目的】通过诱导表达获取大量纯化的家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin2重组蛋白，为后续深入分析模式昆虫家蝇的Serpin体内外免疫调节功能奠定基础。【方法】使用pET-28a(+)作为表达载体构建家蝇Serpin2的原核表达系统并导入到大肠杆菌（B... 详细信息

【目的】通过诱导表达获取大量纯化的家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin2重组蛋白，为后续深入分析模式昆虫家蝇的Serpin体内外免疫调节功能奠定基础。【方法】使用pET-28a(+)作为表达载体构建家蝇Serpin2的原核表达系统并导入到大肠杆菌（BL21）中，设置不同IPTG浓度、不同诱导温度和不同诱导时间以探索最佳诱导条件，在此条件下进行Serpin2原核重组蛋白大量诱导表达和纯化，并通过SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白质谱对纯化的Serpin2重组蛋白进行鉴定。【结果】成功构建了pET28a(+)-Serpin2的重组质粒并转化至感受态细胞中，明确在30℃条件下以终浓度为0.2 mmol/L的IPTG诱导表达15 h，可使家蝇Serpin2重组蛋白在大肠杆菌BL21中获得较优表达，且在上清和包涵体内均有表达，经鉴定纯化后的蛋白即为家蝇Serpin2重组蛋白。【结论】最佳诱导条件（30℃、0.2 mmol/L IPTG、15 h）下可获得大量纯化的家蝇Serpin2重组蛋白。

关键词：家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂2 原核表达优化蛋白纯化重组质粒重组蛋白

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埃及伊蚊yellow基因家族的鉴别和表达谱分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第1期34卷 1-8页

作者：颜凤吕清巧程金芝牟小会翟慧杨迅商正玲吴家红贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州医科大学现代病原生物学实验室贵阳550025

目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）... 详细信息

目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）王浆主蛋白（MRJP）结构域氨基酸序列，在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊yell0叫基因家族．采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．1预测信号肽．结合使用DNAstar、MAGA6．0和GeneDoc软件包进行同源性比对、保守性分析和系统进化树构建。提取埃及伊蚊总RNA，合成cDNA，利用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）法对埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹以及未吸血雌蚊和雄蚊）和未吸血雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）的yellow基因表达谱进行相对定量分析。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出12条yellow基因（Aa-一yellow、Aa一yellow—b、Aa一yellow—c、Aa一yellow—d、Aa-yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yellow-fb、Aa一yellow-fc、Aa—yellow—g、Aa—yellow—g2、Aa—yellow—h和Aa一fellow—x）。生物信息学分析结果显示，12条yellow基因均具有MRJP结构域和信号肽序列。同源性比对结果显示．埃及伊蚊yellow基因家族成员间同源性较低，为15％～49％：但其保守域间同源性较高，可达60％。系统进化树分析结果显示．12个yellow蛋白分为5个亚家族，其中11个在黑腹果蝇中均有直系同源蛋白存在。Ⅱ***结果显示，An—yellow-d和Aa-yelloW一Ⅳ在雄蚊中高表达（P〈0．01或P〈O．05），相对表达量分别为0．0189和0．0235；Aa一yelloW一尼在雌蚊和唾液腺中特异高表达（P〈0．01），相对表达量分别为0．0248和0．0349；Aa一yellow-f2在Ⅱ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01），相对表达量为0．0934；Aa一yellow、Aa—yellow—e和Aa—yellow一加在Ⅲ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01）．相对表达量分别为0．5621、0．0044和0．0084：Aa—yellow、Aa—yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yelloW—fb、Aa一yellow-h和Aa一yellow一x等6条基因在卵巢中高表达（P〈0.01或P〈0．05），相对表达量分别为0．5694、0．0270、0．0065、0．0010、0．0848和0．0151；除Aa一yyellow一c（0．0040）和Aa一yellow一z（0．0074）外，其余基因几乎不在中肠表达。结论在埃及伊蚊基因组中获得的12条yelloW基因同源性较低．

关键词：埃及伊蚊 yellow基因家族 qRT—PCR 表达谱

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Ⅱ型内含子及其生物技术应用研究进展

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生物工程学报 2022年第3期38卷 915-924页

作者：崔古贞花登雄谷俊莹陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025

型内含子(groupⅡintrons)是一类具有自我剪接功能的核酶,能够通过“归巢”(retrohoming)机制高频插入到DNA靶位点。Ⅱ型内含子对DNA靶位点的识别和剪接具有高度专一性和高效性,这种特性使其在基因工程中具有重要的应用价值。文中首先... 详细信息

型内含子(groupⅡintrons)是一类具有自我剪接功能的核酶,能够通过“归巢”(retrohoming)机制高频插入到DNA靶位点。Ⅱ型内含子对DNA靶位点的识别和剪接具有高度专一性和高效性,这种特性使其在基因工程中具有重要的应用价值。文中首先综述了Ⅱ型内含子基因打靶原理及其在微生物遗传改造中的应用;然后,根据Ⅱ型内含子“归巢”特点及其依赖高浓度Mg2+的特性,分析了Ⅱ型内含子在多功能基因编辑及真核生物应用中的局限性;最后,以笔者课题组研究工作为基础,结合Ⅱ型内含子自身结构特点,分析了Ⅱ型内含子在新型基因编辑工具开发方面的潜能,为Ⅱ型内含子生物技术应用提供借鉴。

关键词： Ⅱ型内含子 Targetron 基因编辑生物技术应用

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乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平及免疫功能的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第2期39卷 210-217页

作者：秦敏邵天业赵成思缪婷婷张戎邱竞帆王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京211166

目的探讨抗弓形虫药物乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平和免疫功能的影响。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7(1×10^(4)个/孔)接种于96孔板中,用0(对照组)、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00、500.00和1 000.00μmo... 详细信息

目的探讨抗弓形虫药物乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平和免疫功能的影响。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7(1×10^(4)个/孔)接种于96孔板中,用0(对照组)、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00、500.00和1 000.00μmol/L的乙胺嘧啶分别处理24 h后,CCK8检测细胞活性抑制率。将RAW264.7细胞(5×10^(5)个/孔)接种于6孔板中,弓形虫RH株速殖子感染后3 h,用0(对照组)、0.10、1.00、10.00和100.00μmol/L的乙胺嘧啶分别处理24 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测弓形虫速殖子的二氢叶酸还原酶的表达。TRIzol试剂提取RAW264.7细胞的总RNA, qRT-PCR检测巨噬细胞二氢叶酸还原酶和炎症因子基因的表达,Western blotting检测巨噬细胞DHFR的蛋白表达,全自动化学发光免疫分析仪检测胞内活性叶酸水平。用BLAST对速殖子DHFR蛋白和小鼠巨噬细胞DHFR蛋白的氨基酸序列进行同源比对。用无叶酸培养基预处理RAW264.7细胞48 h,随后用100μmol/L的乙胺嘧啶处理24 h, qRT-PCR检测无叶酸条件下巨噬细胞炎症因子基因的表达。两组之间比较采用t检验,多重比较采用单因素方差分析。结果 CCK8检测结果显示,乙胺嘧啶的细胞活性抑制率具有剂量依赖效应,在0.01~0.10μmol/L时可促进巨噬细胞的轻度增殖,浓度高于0.10μmol/L时显示有抑制细胞增殖作用。qRT-PCR检测结果显示,0.10、1.00、10.00和100.00μmol/L组弓形虫二氢叶酸还原酶m RNA相对转录水平分别为1.190±0.054、1.460±0.206、0.468±0.077和0.399±0.073, 1μmol/L组高于对照组,10.00和100.00μmol/L组均低于对照组(P<0.01);而巨噬细胞二氢叶酸还原酶m RNA相对转录水平分别为0.789±0.505、1.820±0.119、2.120±0.140和2.080±0.189,其中1.00、10.00和100.00μmol/L组均高于对照组(P<0.05或0.01)。Western blotting分析结果显示,100.00μmol/L组巨噬细胞DHFR蛋白表达显著高于对照组。BLAST同源比对显示,速殖子DHFR蛋白和小鼠巨噬细胞DHFR蛋白的同源性仅为37.0%。化学发光免疫分析结果显示,100.00μmol/L组巨噬细胞的胞内活性叶酸水平为(10.600±2.930) nmol/L,高于对照组(P<0.01)。100μmol/L乙胺嘧啶处理后,巨噬细胞炎症相关指标TNF-α、i NOS、Arg-1和IL-1β的mRNA相对转录水平分别为2.230±0.100、11.800±1.350、3.610±0.256和7.810±0.987,均高于对照组(P<0.05或0.01)。乙胺嘧啶处理后,无叶酸培养组RAW264.7细胞TNF-α、i NOS、Arg-1和IL-1β的mRNA相对转录水平分别为2.460±0.026、1.330±0.091、0.974±0.141和0.997±0.018, i NOS、Arg-1和IL-1β低于含叶酸正常组(P<0.05或0.01), TNF-α高于含叶酸正常组(P<0.01)。结论乙胺嘧啶可以通过促进小鼠巨噬细胞二氢叶酸还原酶的表达,升高胞内活性叶酸水平,从而诱导巨噬细胞炎症因子基因表达。

关键词：乙胺嘧啶巨噬细胞叶酸二氢叶酸还原酶

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