检索结果-内蒙古大学图书馆

西南农业学报 2025年

作者：郝倩倩吴书东张昌容国果彭建谭书萍尚小丽李博岩贵州医科大学公共卫生与健康学院贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州省农业科学院生物技术研究所

【目的】探明资源昆虫对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性，为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解，进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物转... 详细信息

【目的】探明资源昆虫对酒糟类有机废弃物饲料的适生性及降解特性，为今后规模化、产业化养殖和利用家蝇和黑水虻进行酒糟类有机废弃物生物降解，进而为有效解决资源短缺和环境污染问题提供理论参考。【方法】选取家蝇和黑水虻为生物转化器，分别研究不同配比酒糟饲料〔T0（CK）：纯麦麸；T1：25%酒糟；T2：50%酒糟；T3：75%酒糟；T4：纯酒糟〕对家蝇和黑水虻的生物学特征等生长发育的影响；同时研究酒糟空白组（CK2）、自然发酵组（ZF）、家蝇幼虫取食组（MD）和黑水虻幼虫取食组（HI）4种处理条件下各组酒糟一般营养成分和木质纤维素的含量变化，综合分析筛选较优的酒糟降解利用方法。【结果】随酒糟含量增加，家蝇和黑水虻2种昆虫各虫态体重、体长、化蛹率、羽化率和存活率均呈下降趋势，T4较T0均差异显著，其中，T3和T4家蝇的存活率分别为79.26%和30.92%，黑水虻则分别为78.99%和65.06%；HI的酒糟总糖含量（13.2%）和粗蛋白质含量（13.1%）较MD更低（总糖和粗蛋白质含量分别为21.2%和16.2%）。MD、HI与ZF和CK2相比，纤维素和半纤维素的降解均存在显著差异（P＜0.05），其中，MD整体木质纤维素降解率为24.01%，HI木质纤维素降解率可达34.34%。【结论】家蝇和黑水虻能够通过有效降解酒糟中的木质纤维素和利用一般营养成分进行较好生长发育，整体而言，黑水虻较家蝇更易在酒糟中进行饲养，且对酒糟木质纤维素的降解效果更优，该研究结果为今后更好的利用资源昆虫产业化降解酒糟类农业有机废弃物提供重要的理论依据。

关键词：家蝇黑水虻农业资源昆虫酒糟类有机废弃物生物降解木质纤维素

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SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放

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中国免疫学杂志 2024年第4期40卷 714-719页

作者：牟露敏龙启舟邓东青程金芝聂映吴家红贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染监测与疾病控制重点实验室贵阳550025 贵州中医药大学第一附属医院贵阳550002 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025

目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测... 详细信息

目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果:报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性(P<0.001),而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达(P<0.05)。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化(P<0.05)及p65的入核(P<0.01)。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论:SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。

关键词： SARS-CoV-2 ORF7a NF-κB信号通路炎症因子

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具备高效CRISPR协同激活活性的HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞株构建

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生物技术通报 2025年第5期41卷 52-61页

作者：任柱平杨泰然雷元三金留飞崔古贞田益明陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550000 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550000 贵州省微生物组与感染性疾病防控重点实验室贵阳550000

【目的】以人正常肠道上皮细胞(HIEC6)为研究模型,建立具有高水平转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞株,为利用CRISPR激活(CRISPRactivation,CRISPRa)系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供细胞工具。... 详细信息

【目的】以人正常肠道上皮细胞(HIEC6)为研究模型,建立具有高水平转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞株,为利用CRISPR激活(CRISPRactivation,CRISPRa)系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供细胞工具。【方法】首先利用PiggyBac转座子系统构建HIEC6-dCas9-SAM多克隆细胞;然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞株,并使用免疫印迹、间接免疫荧光法鉴定单克隆细胞株中dCas9-SAM蛋白(dCas9、VP64、MS2、HSF1、p65)的表达情况;最后利用CRISPRa荧光报告系统和构建包装特定靶基因sgRNA慢病毒,检测所构建稳转株在转录和蛋白水平的CRISPR激活效率。【结果】成功获得两株HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞,两株细胞均能高水平稳定表达dCas9-SAM蛋白。CRISPRa荧光报告系统检测显示,两株HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞的激活效率分别高达96.7%、99.0%。靶基因激活功能验证显示,在转录水平,两株HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞中靶基因APN的转录激活水平分别高达2725倍和4521倍,SLC35A1基因的转录激活水平分别为27.5倍和18.1倍;在蛋白水平,APN蛋白的激活效率分别高于12.9倍和11.2倍,SLC35A1蛋白的激活效率分别为1.32倍和0.97倍。两株单克隆稳转细胞均表现出较高的转录激活活性。【结论】成功构建两株具有高水平CRISPR转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆稳转细胞,为后续基于CRISPRa系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供了重要细胞工具。

关键词： dCas9-SAM HIEC6细胞 CRISPR激活稳转细胞株

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家蝇酵母双杂交cDNA文库构建和MD14-3-3互作蛋白筛选

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昆虫学报 2023年第11期66卷 1451-1458页

作者：陈明明焦振龙赵文静国果贵州医科大学基础医学院病原生物学特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550025

【目的】构建家蝇Musca domestica酵母双杂交cDNA文库,筛选MD14-3-3互作蛋白。【方法】以家蝇为研究对象,经mRNA纯化、cDNA初级文库构建、重组pGADT7-DEST构建次级文库,构建酵母双杂交筛选系统,构建pGBKT7-MD14-3-3质粒作为诱饵筛选与MD... 详细信息

【目的】构建家蝇Musca domestica酵母双杂交cDNA文库,筛选MD14-3-3互作蛋白。【方法】以家蝇为研究对象,经mRNA纯化、cDNA初级文库构建、重组pGADT7-DEST构建次级文库,构建酵母双杂交筛选系统,构建pGBKT7-MD14-3-3质粒作为诱饵筛选与MD14-3-3相互作用的蛋白,并进行回转验证。【结果】成功构建文库容量为1.6×10^(7) CFU,重组率为100%的家蝇酵母双杂交cDNA文库。酵母双杂交筛选获得2个靶蛋白,回转试验表明mucin-like protein HKR1与抗菌肽ctenidin-1为MD14-3-3的互作蛋白。【结论】从成功构建的家蝇酵母双杂交cDNA文库中筛选出MD14-3-3蛋白的2个互作蛋白,为进一步探究家蝇免疫应答机制奠定了基础。

关键词：家蝇血细胞 MD14-3-3 酵母双杂交互作蛋白

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微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织病理学观察及MUC2表达的分析

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黑龙江畜牧兽医 2024年第9期 109-113,121,122页

作者：王鸿雁李小毛崔轩胤张科牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵阳561113 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵阳561113 铜仁市人民医院检验科贵州铜仁554300

为了解微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织的病理学特征及黏蛋白2(MUC2蛋白)的表达情况,试验从贵阳市宠物市场随机选取60只宠物仓鼠,采用饱和盐水浮聚法检测仓鼠粪便中的虫卵并进行鉴定,根据仓鼠感染微小膜壳绦虫的情况将仓鼠分为未感染组、... 详细信息

为了解微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织的病理学特征及黏蛋白2(MUC2蛋白)的表达情况,试验从贵阳市宠物市场随机选取60只宠物仓鼠,采用饱和盐水浮聚法检测仓鼠粪便中的虫卵并进行鉴定,根据仓鼠感染微小膜壳绦虫的情况将仓鼠分为未感染组、无症状感染组、普通型感染组和重型感染组,解剖所有仓鼠获取肠道内寄生虫及小肠组织,制备小肠组织切片并进行苏木精-伊红(H.E.)染色、阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色及免疫组织化学染色,通过实时荧光定量PCR(qPCR)扩增分析仓鼠小肠MUC2基因相对表达情况。结果表明:微小膜壳绦虫在宠物仓鼠中的感染率为74.5%,其感染可引起仓鼠小肠绒毛损伤、上皮细胞变性坏死、杯状细胞异常、白细胞浸润等病理改变;与未感染组相比,无症状组杯状细胞数量及MUC2基因相对表达量差异不显著(P>0.05),普通型感染组的杯状细胞数量极显著增加(P<0.01),重型感染组的杯状细胞极显著减少(P<0.01),同时重型感染组的MUC2基因及MUC2蛋白表达水平极显著增高(P<0.01)。说明微小膜壳绦虫感染会导致仓鼠小肠绒毛结构破坏,杯状细胞数量及形态异常,并引起杯状细胞分泌MUC2蛋白增多,且重型感染组杯状细胞数量减少,但其分泌的MUC2蛋白量增加。

关键词：仓鼠微小膜壳绦虫小肠病理学特征黏蛋白2

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白纹伊蚊胰岛素样肽基因的鉴定和时空表达分析

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年第2期34卷 204-211页

作者：肖秋秋李威仪何珊程金芝彭哲慧吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室/寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550025

目的筛选并鉴定白纹伊蚊全基因组中的胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILP)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法基于埃及伊蚊ILPs家族成员序列,在Vectorbase网站上的白纹伊蚊全基因组数据库做同源搜索,Sig... 详细信息

目的筛选并鉴定白纹伊蚊全基因组中的胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILP)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法基于埃及伊蚊ILPs家族成员序列,在Vectorbase网站上的白纹伊蚊全基因组数据库做同源搜索,SignalP 6.0进行信号肽预测,MEGA 11.0软件包对ILPs基因结构特点进行分析,最大似然法构建系统进化树。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同发育时期(卵、4龄幼虫、蛹、成蚊),以及吸血前后雌蚊不同组织(头部、脂肪体、中肠、胸部、卵巢)的白纹伊蚊胰岛素样肽(insulin-like peptides of Aedes albopictus,AalbILPs)基因表达变化。采用SPSS 20.0软件做数据统计分析,Tukey’s HSD检验和t检验分析不同发育时期和吸血前后不同组织中AalbILPs基因的表达差异。结果在白纹伊蚊全基因组中获得7条ILPs开放阅读框序列。7条AalbILPs序列均具有胰岛素超家族的保守特征,由连续的信号肽、B、C和A链组成前肽。其中AalbILP6具有截短的C链和羧基末端延伸,类似脊椎动物的胰岛素生长因子。系统进化树显示,AalbILP1、2、3和5在蚊虫中最为保守,AalbILP6其次,而AalbILP4、7为伊蚊所特有。qRT-PCR结果显示,AalbILP1、2、3和5在不同发育阶段均有表达。AalbILP5在雄蚊中相对表达量为1.3583±0.5769,与其他发育阶段和雌蚊相比最高(q_(卵)=6.572,q_(幼虫)=5.771,q_(蛹)=5.409,q_(雌蚊)=3.115,均P<0.05)。AalbILP3和4在成蚊头部特异性表达,AalbILP6主要在雌蚊卵巢表达;AalbILP7为假基因,未转录。与未吸血蚊虫相比,吸血诱导AalbILP3和4在雌蚊头部的表达分别上调2.60和1.68倍(t_(AalbILP3-头部)=9.596,P_(AalbILP3-头部)<0.001;t_(AalbILP4-头部)=4.524,P_(AalbILP4-头部)=0.001);AalbILP1在头部、脂肪体以及中肠的表达分别上调10.33、6.07和3.79倍(t_(头部)=4.255,P_(头部)=0.001;t_(脂肪体)=4.305,P_(脂肪体)=0.001;t_(中肠)=10.480,P_(中肠)<0.001),胸部和卵巢的表达分别下调4.24和2.17倍(t_(胸部)=7.922,P_(胸部)<0.001;t_(卵巢)=3.752,P_(卵巢)=0.003);AalbILP6在雌蚊中肠和卵巢的相对表达量分别上调11.91和2.16倍(t_(中肠)=5.799,P_(中肠)<0.001;t_(卵巢)=9.074,P_(卵巢)<0.001)。结论在白纹伊蚊全基因组中共获得6条ILPs序列,并成功构建其时空表达谱。

关键词：白纹伊蚊胰岛素样肽时空表达血餐

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“虚实结合”实验教学新模式在《人体寄生虫学》教学中的应用——以“血吸虫综合实验”为例

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第2期35卷 180-183,216页

作者：陈晓军周莎邱竞帆陈琳徐志鹏季旻珺郭静张戎南京医科大学基础医学院病原生物学系、江苏省现代病原生物学重点实验室江苏南京211166 南京医科大学人事处江苏南京211166 南京医科大学基础医学院基础医学实验教学中心江苏南京211166

“新医科”背景下,信息技术已成为推动高等教育发展的重要驱动力之一。南京医科大学基础医学实验教学中心联合基础医学院病原生物学系将信息技术与实验教学相融合,设计和构建了“虚实结合”实验教学新模式,并应用于《人体寄生虫学》教学... 详细信息

“新医科”背景下,信息技术已成为推动高等教育发展的重要驱动力之一。南京医科大学基础医学实验教学中心联合基础医学院病原生物学系将信息技术与实验教学相融合,设计和构建了“虚实结合”实验教学新模式,并应用于《人体寄生虫学》教学,取得了良好的教学效果。该模式有助于学生加深对人体寄生虫学基础知识的理解,锻炼实践操作技能,培养医学生道德素养和综合能力。本文以“血吸虫综合实验”为例,对教学方案和实施、教学效果和评价、教学体会等进行了总结。

关键词：人体寄生虫学血吸虫虚实结合实验教学混合式教学

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黔南州和贵阳市幽门螺杆菌临床菌株的耐药性、基因多样性及其与疾病的关系

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中国人兽共患病学报 2024年第1期40卷 46-55页

作者：张远远潘科糜孟衡管玉祝陆秋丹郑娟张晋王天姝刘琦陈峥宏贵州医科大学附属医院消化内科贵阳550004 贵州医科大学基础医学院微生物教研室/贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵阳561113 黔南州人民医院黔南558000

目的了解贵州省贵阳市和黔南州少数民族地区幽门螺杆菌的耐药性、基因多样性及其与临床疾病的关系。方法通过内窥镜采集样本分离培养幽门螺杆菌,测定耐药性和基因型特征,比较不同地区、疾病类型的差异,分析幽门螺杆菌结构特点及黔南州... 详细信息

目的了解贵州省贵阳市和黔南州少数民族地区幽门螺杆菌的耐药性、基因多样性及其与临床疾病的关系。方法通过内窥镜采集样本分离培养幽门螺杆菌,测定耐药性和基因型特征,比较不同地区、疾病类型的差异,分析幽门螺杆菌结构特点及黔南州幽门螺杆菌不同菌型混合感染情况。结果两地区cagA可变区EPYIA分型构成比差异有统计学意义(P=0.012),vacA基因型构成比差异有统计学意义(P=0.000);MLST方法得到两地区幽门螺杆菌菌株94.6%(53/56)新的序列型。黔南州幽门螺杆菌不同菌型菌株混合感染率为44.4%,不同临床疾病的幽门螺杆菌不同菌型混合感染构成比差异无统计学意义(P=0.349)。结论黔南州和贵阳市两地区幽门螺杆菌cagA可变区EPIYA分型和vacA基因型构成比存在差异。

关键词：幽门螺杆菌黔南州贵阳市基因多态性混合感染

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白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体

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白纹伊蚊自噬基因ATG8蛋白多克隆抗体的制备及应用

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中国病原生物学杂志 2023年第7期18卷 787-792页

作者：何珊肖秋秋石梦婷李威仪彭哲慧程金芝吴家红贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室安顺市人民医院检验科

目的通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,并验证抗体的实用性。方法从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段,然后与载体pET30a连接,构建原核表达载体pET30a-AaATG8... 详细信息

目的通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,并验证抗体的实用性。方法从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段,然后与载体pET30a连接,构建原核表达载体pET30a-AaATG8并转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,挑取单克隆进行PCR鉴定,提取质粒进行测序鉴定。再将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白rAa-ATG8,纯化透析后免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体效价,并以该抗体为一抗采用Western blot检测不同物种ATG8蛋白的表达。结果成功构建原核表达载体PET30a-AaATG8并在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白。重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其血清抗体效价为1∶640000;Western blot显示rAa-ATG8多克隆抗体可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,反应条带位于18、16或14 ku处。结论成功获得高效价的rAa-ATG8多克隆抗体,该抗体不仅可用于检测白纹伊蚊ATG8蛋白,还可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,为研究自噬在蚊虫以及其他物种中的作用奠定了基础。

关键词：白纹伊蚊自噬相关蛋白8/ATG8 原核表达抗体制备

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