检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第6期35卷 527-535页

作者：程金芝刘鉴翟慧吕清巧颜凤商正玲吴家红贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室现代病原生物学实验室贵阳550025 贵州医科大学微生物与生化药学工程中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550025

目的筛选并鉴定埃及伊蚊(Aedes aegypti)全基因组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织中的表达谱。方法运用生物信息学方法在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并... 详细信息

目的筛选并鉴定埃及伊蚊(Aedes aegypti)全基因组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织中的表达谱。方法运用生物信息学方法在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊serpin基因家族,利用Vector NTI11.0软件进行同源性比对、保守性分析,采用MEGA7.0软件构建系统进化树。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测埃及伊蚊不同发育时期(卵、Ⅰ~Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和未吸血雌蚊),以及未吸血雌蚊不同组织(唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)的serpin基因表达变化。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列。生物信息学分析结果显示,19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性。进化分析表明,埃及伊蚊serpin基因家族被分为A、B和C分支,B分支分为4组,每分支均具有同源性,且不同成员间在进化上相对保守。qRT-PCR结果显示,Aa SRPN25在雌蚊中特异性表达,相对表达量为0.074±0.015(P<0.01);Aa SRPN19~22在雄蚊中丰富表达;Aa SRPN23在Ⅰ龄幼虫时期特异性高表达,而且在唾液腺中也特异性高表达,相对表达量分别为22.9±5.28和4.24±1.39(P<0.01);Aa SRPN25在唾液腺中特异性高表达,相对表达量为74.44±25.76(P<0.01),Aa SRPN6、Aa SRPN14在中肠中的表达量最高,相对表达量分别为1.80±0.33、0.703±0.501;Aa SRPN17、Aa SRPN20在脂肪体中的表达量最高,相对表达量分别为0.34±0.09、0.15±0.03。结论从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列,其中19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性的作用。

关键词：埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂实时荧光定量PCR 时空表达谱

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***内含子编码蛋白反转录结构域关键催化位点分析及功能验证

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微生物学报 2019年第12期59卷 2357-2366页

作者：陈相好张峥嵘刘芳陈峥宏洪伟綦廷娜谷俊莹崔古贞贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【目的】筛选影响***内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后... 详细信息

【目的】筛选影响***内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后,对筛选获得的关键催化位点进行定点突变,同时以Targetron载体为模板,构建无反转录功能的突变型Targetron打靶系统;最后,以大肠杆菌lacZ基因为例,体内验证IEP突变体的功能及其对Ⅱ型内含子"归巢"效率的影响。【结果】筛选到C164和G214两个位点是影响内含子编码蛋白反转录功能的关键氨基酸残基,并获得C164K和G214W两个突变体。体内功能分析表明,此两个位点突变完全失活了Ⅱ型内含子的"归巢"功能。【结论】筛选并获得了失活反转录功能的***内含子编码蛋白突变体,为深入研究Ⅱ型内含子的结构和"归巢"机理奠定了基础。

关键词： Ll.LtrB Ⅱ型内含子内含子编码蛋白反转录 Targetron

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显微注射法制备转基因家蝇技术的建立

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生物工程学报 2021年第2期37卷 655-662页

作者：王蓝晨杨阳尚小丽王兵袁林朱贵明贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院生物技术工程研究中心贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025

旨在利用显微注射法对早期家蝇(Musca domestica L.)卵注射含有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的转座子载体,实现活体基因稳定表达并对其进行验证,为开展家蝇基因功能的研究奠定基础。文中自制适用... 详细信息

旨在利用显微注射法对早期家蝇(Musca domestica L.)卵注射含有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的转座子载体,实现活体基因稳定表达并对其进行验证,为开展家蝇基因功能的研究奠定基础。文中自制适用于显微注射家蝇卵的硼硅酸盐玻璃微量注射针,摸索出家蝇卵壳的软化处理条件,以NanojectⅢ高精度微量注射器为主体构建适用于家蝇的显微注射技术平台;将含有眼部特异表达的3×P3启动子、EGFP的重组质粒PiggyBac-[3×P3]-EGFP与稳定遗传表达辅助质粒pHA3pig helper显微注射到处理过的家蝇卵中,待羽化观察眼部发光情况,检测EGFP的表达及转录水平。结果表明,将家蝇卵在漂白水中漂洗35 s时卵的正常孵化率为55%,处理35 s的卵壳其硬度适宜注射且注射针头不易破碎;羽化后的家蝇眼部带有绿色荧光的占比约为3%,通过分子检测,家蝇的DNA和RNA中均扩增出EGFP特异片段,大小为750 bp。通过该技术平台,能够便捷、有效地实现报告基因在家蝇中的稳定表达,建立以家蝇为主体的生物反应器,为后续家蝇基因功能的研究提供一定参考价值。

关键词：显微注射家蝇受精卵增强型绿色荧光蛋白转基因

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家蝇几丁质酶基因MDcht2的原核表达及其表达产物的酶学性质分析

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基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 72-80页

作者：苏佩佩赵欣宇马慧玲李妍杨隆兵国果贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550000

几丁质酶是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。本研究旨在利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统获得高纯度的MDCht2重组蛋白,并从几丁质酶活性及抗菌活性两方面来初步探讨MDCht2的生物学功能。MDCht2的cDNA序列设计包含酶切位点Ec... 详细信息

几丁质酶是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。本研究旨在利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统获得高纯度的MDCht2重组蛋白,并从几丁质酶活性及抗菌活性两方面来初步探讨MDCht2的生物学功能。MDCht2的cDNA序列设计包含酶切位点Eco RⅠ、HindⅢ和6×His标签的引物,以家蝇3龄幼虫的cDNA为模板进行PCR扩增,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,并转化到大肠杆菌Transetta (DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,利用Ni离子亲和层析技术纯化MDCht2重组蛋白,Western Blot技术及质谱分析鉴定纯化蛋白。以4MU-(GlcNAc)3为底物,测定重组蛋白的酶活性;采用微量液体稀释法分析重组蛋白对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白假丝酵母菌的抗菌活性。成功克隆MDCht2基因,构建了具有正确序列的原核重组表达质粒,将重组质粒导入Transetta(DE3)中,经镍柱纯化获得带His标签的重组MDCht2蛋白,质谱分析显示重组蛋白与MDCht2蛋白序列一致。酶活分析表明,不同浓度的MDCht2重组酶均有几丁质酶活性,呈现一定的量效关系;该重组蛋白的最适pH值为4.0,在pH=8.0时稳定性最好;最适温度为35℃;金属离子和Tris对MDCht2酶活均有抑制作用。抗菌活性结果显示,MDCht2蛋白对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌均无抑菌效果,但对白假丝酵母菌有抑制作用,MIC值为225μg/m L,MBC(Minimum bactericidal concentration)值为450μg/mL。本研究成功获得了MDCht 2重组蛋白,体外检测有较强的几丁质酶活性和抗真菌活性,为进一步研究该酶的功能奠定一定基础。

关键词：家蝇(Musca domestica) MDCht2 原核表达抗菌活性酶特性

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高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统的构建

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生物技术通报 2019年第6期35卷 213-220页

作者：陈相好谷俊莹崔古贞刘芳王彩霞陈峥宏洪伟蔡梦迪张峥嵘綦廷娜廖永慧贵州医科大学医学检验学院贵州医科大学基础医学院贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学附属医院

构建高效严谨型大肠杆菌Targetron 基因打靶系统。将来源于pET28a 的T7-lac 操纵子与来源于pSY6 的II 型内含子组装构建大肠杆菌IPTG 诱导型Targetron 质粒系统。以lacZ 基因为例,选择lacZ-635s 和lacZ-1063a 两个位点为靶位点,利用构建... 详细信息

构建高效严谨型大肠杆菌Targetron 基因打靶系统。将来源于pET28a 的T7-lac 操纵子与来源于pSY6 的II 型内含子组装构建大肠杆菌IPTG 诱导型Targetron 质粒系统。以lacZ 基因为例,选择lacZ-635s 和lacZ-1063a 两个位点为靶位点,利用构建的IPTG 诱导型Targetron 系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后II 型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG 诱导型Targetron 系统严谨性和打靶效率。最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron 基因打靶系统。在没有IPTG 诱导时,II 型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG 诱导45 min 时,其在lacZ-635s 位点的打靶效率提高到90.8±5.5%,在lacZ-1063a 位点的打靶效率提高到92.6±2.4%。成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron 基因打靶系统,旨为II 型内含子的机理研究及应用奠定基础。

关键词： Targetron II 型内含子诱导系统大肠杆菌 lacZ

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抗菌肽Cec4杂合肽的设计及其抗菌相关活性探究

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基因组学与应用生物学 2020年第10期39卷 4828-4833页

作者：彭建赵行行朱贵明尚小丽叶远浓贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学大健康学院贵阳550025

结合不同抗菌肽的优点与抗菌肽Cec4杂合,以提高其抗菌能力。通过杂合肽进行序列比对、3级结构预测、相关抗菌效果等参数分析,设计出可能具有更强抗菌能力的杂合肽6条。进而采用微量稀释法,检测杂合肽对大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡... 详细信息

结合不同抗菌肽的优点与抗菌肽Cec4杂合,以提高其抗菌能力。通过杂合肽进行序列比对、3级结构预测、相关抗菌效果等参数分析,设计出可能具有更强抗菌能力的杂合肽6条。进而采用微量稀释法,检测杂合肽对大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、及各类鲍曼不动杆菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。杂合肽Cec4-1-1、Cec4-4-2与母肽Cec4对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)的抑菌效果相当,Cec4-2-1对大肠杆菌的MIC值为2μg/mL,其抑菌效果优于母肽Cec4。杂合肽和母肽Cec4对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)、真菌(白色念珠菌)均无抑菌效果。杂合肽Cec4-1-1、Cec4-2-2、Cec4-4-2与母肽Cec4对各类鲍曼不动杆菌的抑菌效果相当,Cec4-2-1对标准鲍曼不动杆菌的MIC值为0.5μg/mL,其抑菌效果优于母肽Cec4。综上,杂合肽Cec4-1-1、Cec4-2-1、Cec4-2-2、Cec4-4-2对各类鲍曼不动杆菌均有较强抑菌活性且对人红细胞无溶血反应。

关键词：杂合肽家蝇抗菌肽 MIC 鲍曼不动杆菌体外溶血

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家蝇新型抗菌肽抗肿瘤活性研究

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中国临床药理学杂志 2022年第11期38卷 1207-1210页

作者：田竺青杨隆兵朱丽娟孙朝琴黄明娇彭建刘鉴国果贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州医科大学转化医学研究中心

目的研究家蝇抗菌肽17（AMP-17）和家蝇天蚕素18（C18）抗菌肽对肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。方法将人白血病细胞（K562、Hel）、人结肠癌细胞（DLD-1、Caco2）、人肝癌细胞（HepG2）、人喉癌细胞（HEP-2）、人肺癌细胞（A549）分为正... 详细信息

目的研究家蝇抗菌肽17（AMP-17）和家蝇天蚕素18（C18）抗菌肽对肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。方法将人白血病细胞（K562、Hel）、人结肠癌细胞（DLD-1、Caco2）、人肝癌细胞（HepG2）、人喉癌细胞（HEP-2）、人肺癌细胞（A549）分为正常组（只加完全培养基）、阳性对照组(9.38,18.75,37.50,75.00和150.00μg·mL-1盐酸阿霉素)、AMP-17实验组(60,80,100,120和140μg·mL-1AMP-17)和C18实验组(10,20,40,60和80μg·mL-1C18)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定肿瘤细胞增殖的抑制能力，计算半抑制浓度(IC50);用CCK-8法检测AMP-17和C18对人正常单核细胞（THP-1）的细胞毒性；用微量分光光度法测定AMP-17和C18对小鼠红细胞的半数溶血值(HC50)。结果 AMP-17、C18均可抑制肿瘤细胞增殖，AMP-17对肿瘤细胞K562、Hel、DLD-1、Caco-2、HEP-2、HepG2和A549的IC50值分别为（58.91±3.57）,（80.81±1.16）,（98.37±4.25）,（88.16±3.46）,（64.56±2.05）,（70.03±1.78）和>150μg·mL-1;C18对上述肿瘤细胞的IC50值分别为（26.80±0.20）,（14.17±2.42）,（13.59±2.48）,（54.64±3.48）,（36.30±0.23）,（72.15±5.08）和（28.82±1.11）μg·mL-1。AMP-17、C18和阳性药盐酸阿霉素对THP-1的IC50值分别为（60.90±1.55）,（32.60±1.21）和（8.51±0.81）μg·mL-1。AMP-17和C18对红细胞的HC50分别为>80和（44.41±5.45）μg·mL-1。结论 AMP-17、C18具有抗肿瘤活性，但C18溶血性较强。

关键词：家蝇抗菌肽17 家蝇天蚕素18 抗肿瘤活性细胞毒性溶血性

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抗菌肽AMP-17对黄曲霉抑制作用的初步研究

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食品与发酵工业 2022年第20期48卷 64-69页

作者：朱丽娟国果田竺青孙朝琴杨隆兵黄明娇刘鉴彭建石帮慧贵州医科大学基础医学院现代病原生物学重点特色实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵州贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院环境污染监测与疾病控制重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生与健康学院贵州贵阳550025

探讨抗菌肽AMP-17对食源性微生物黄曲霉孢子萌发、菌丝生长、产毒等的影响。通过微量液体稀释法测定AMP-17对黄曲霉最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)并绘制生长曲线。血球计数板及干重法计算经AMP-17作用后,黄曲霉... 详细信息

探讨抗菌肽AMP-17对食源性微生物黄曲霉孢子萌发、菌丝生长、产毒等的影响。通过微量液体稀释法测定AMP-17对黄曲霉最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)并绘制生长曲线。血球计数板及干重法计算经AMP-17作用后,黄曲霉的孢子萌发率、菌丝生长抑制率。酶联免疫吸附法分析AMP-17对黄曲霉毒素产量的影响。扫描电镜观察AMP-17作用后黄曲霉孢子及菌丝体的形态结构变化。结果显示,AMP-17对黄曲霉的MIC为50μg/mL;生长曲线显示其能显著抑制黄曲霉的生长;50μg/mL AMP-17作用后黄曲霉孢子萌发率为8%,菌丝抑制率可达72.5%;低浓度的AMP-17即可显著降低黄曲霉毒素的合成;经AMP-17干预后,黄曲霉孢子及菌丝形态结构均遭到明显破坏。因此AMP-17对黄曲霉的生长及产毒具有显著抑制作用。该研究结果为AMP-17应用于食品防腐提供了实验依据,可进一步丰富食物防腐剂种类。

关键词：抗菌肽 AMP-17 黄曲霉抑制作用

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伊蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白促进DENV-2早期感染BHK-21细胞作用研究

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中国病原生物学杂志 2019年第5期14卷 530-533,538页

作者：徐倩田炎珅朱亚妮赵久刚李永念吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学微生物与生化药学工程中心

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞的粘附作用以及兔抗rAlb-34k2抗体的阻断效应。结果1)免疫荧光法检测结果显示,热灭活rAlb-34k2蛋白处理组感染比值为0.40±0.023,未灭活组0.54±0.029,差异有统计学意义(P=0.001 1)。2)Western blot和免疫荧光法检测显示rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞均可发生粘附,且与BHK-21细胞的粘附具有剂量依赖性;特异性抗体不能阻断rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2细胞的粘附效应。结论rAlb-34k2蛋白可与BHK-21等DENV多种靶细胞发生粘附作用,具有介导DENV-2吸附细胞,促进病毒入侵宿主的潜能。

关键词：白纹伊蚊蚊唾液蛋白宿主细胞虫媒病毒粘附作用

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埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第4期24卷 230-235页

作者：翟慧王政艳吕清巧程金芝李世琪杨茜商正玲吴家红贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵州医科大学现代病原生物学实验室贵州医科大学基础医学院贵阳550025

埃及伊蚊serpin23(丝氨酸蛋白抑制剂23)在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一。本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a(+)-serpin23并测序验证... 详细信息

埃及伊蚊serpin23(丝氨酸蛋白抑制剂23)在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一。本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a(+)-serpin23并测序验证。经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白;制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体。结果显示:获得serpin23成熟肽序列,全长1 197bp,编码399个氨基酸。等电点pI为6.13,具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域。pET-28a(+)-serpin23重组质粒可表达了大小约为47 kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白。Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应,约47 kDa处产生特异性条带。本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体,为后续功能研究奠定基础。

关键词：埃及伊蚊丝氨酸蛋白抑制剂克隆表达 WesternBlot

来源：评论

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