检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2020年第3期47卷 843-851页

作者：赵欣宇国果苏佩佩杨隆兵朱丽娟田竺青付萍彭建贵州医科大学基础医学院现代病原生物学重点实验室寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学食品科学学院贵州贵阳550025

【背景】AMP-17是从微生物诱导的家蝇转录组数据库筛选到的一条特异性高表达基因,采用原核表达体系获得其重组蛋白并证实了具有显著的抗菌效果,特别是对白色念珠菌具有较强的抗菌活性。【目的】研究抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制... 详细信息

【背景】AMP-17是从微生物诱导的家蝇转录组数据库筛选到的一条特异性高表达基因,采用原核表达体系获得其重组蛋白并证实了具有显著的抗菌效果,特别是对白色念珠菌具有较强的抗菌活性。【目的】研究抗菌肽AMP-17对白色念珠菌菌丝的抑制作用。【方法】采用微量液体稀释法测定AMP-17对11株白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);根据对AMP-17的敏感程度选取3株绘制生长曲线;通过光学显微镜观察并计数经AMP-17作用后白色念珠菌芽生孢子生成率及芽管形成率;倒置荧光显微镜观察白色念珠菌酵母相向菌丝相转化及以菌丝相为起点AMP-17促进菌丝相转化为酵母相的情况。【结果】AMP-17对支气管肺泡灌洗液分离株16105的MIC为10μg/mL,对粪便分离株16214的MIC为40μg/mL,对其余9株白色念珠菌的MIC均为20μg/mL;白色念珠菌经不同浓度的AMP-17作用后,各时间点的芽生孢子生成率均显著低于对照组,尤其是40μg/mL的AMP-17组,芽生孢子生成率仅15%,显著低于阳性药物氟康唑;各实验组芽管形成率显著低于对照组,且芽管形成缓慢,培养6 h后芽管形成率仅为6%,形成的芽管长度较短,仅为菌体的1?2倍。镜下观察低浓度的AMP-17即可以完全抑制白色念珠菌菌丝的生长,并且对已经形成的菌丝有一定的生长抑制作用,高浓度的AMP-17则可使已形成的部分菌丝向酵母相转化。【结论】家蝇抗菌肽AMP-17可抑制白色念珠菌菌丝生长。

关键词：白色念珠菌抗菌肽菌丝

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白纹伊蚊胰岛素样肽基因的鉴定和时空表达分析

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年第2期34卷 204-211页

作者：肖秋秋李威仪何珊程金芝彭哲慧吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室/寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550025

目的筛选并鉴定白纹伊蚊全基因组中的胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILP)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法基于埃及伊蚊ILPs家族成员序列,在Vectorbase网站上的白纹伊蚊全基因组数据库做同源搜索,Sig... 详细信息

目的筛选并鉴定白纹伊蚊全基因组中的胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILP)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法基于埃及伊蚊ILPs家族成员序列,在Vectorbase网站上的白纹伊蚊全基因组数据库做同源搜索,SignalP 6.0进行信号肽预测,MEGA 11.0软件包对ILPs基因结构特点进行分析,最大似然法构建系统进化树。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同发育时期(卵、4龄幼虫、蛹、成蚊),以及吸血前后雌蚊不同组织(头部、脂肪体、中肠、胸部、卵巢)的白纹伊蚊胰岛素样肽(insulin-like peptides of Aedes albopictus,AalbILPs)基因表达变化。采用SPSS 20.0软件做数据统计分析,Tukey’s HSD检验和t检验分析不同发育时期和吸血前后不同组织中AalbILPs基因的表达差异。结果在白纹伊蚊全基因组中获得7条ILPs开放阅读框序列。7条AalbILPs序列均具有胰岛素超家族的保守特征,由连续的信号肽、B、C和A链组成前肽。其中AalbILP6具有截短的C链和羧基末端延伸,类似脊椎动物的胰岛素生长因子。系统进化树显示,AalbILP1、2、3和5在蚊虫中最为保守,AalbILP6其次,而AalbILP4、7为伊蚊所特有。qRT-PCR结果显示,AalbILP1、2、3和5在不同发育阶段均有表达。AalbILP5在雄蚊中相对表达量为1.3583±0.5769,与其他发育阶段和雌蚊相比最高(q_(卵)=6.572,q_(幼虫)=5.771,q_(蛹)=5.409,q_(雌蚊)=3.115,均P<0.05)。AalbILP3和4在成蚊头部特异性表达,AalbILP6主要在雌蚊卵巢表达;AalbILP7为假基因,未转录。与未吸血蚊虫相比,吸血诱导AalbILP3和4在雌蚊头部的表达分别上调2.60和1.68倍(t_(AalbILP3-头部)=9.596,P_(AalbILP3-头部)<0.001;t_(AalbILP4-头部)=4.524,P_(AalbILP4-头部)=0.001);AalbILP1在头部、脂肪体以及中肠的表达分别上调10.33、6.07和3.79倍(t_(头部)=4.255,P_(头部)=0.001;t_(脂肪体)=4.305,P_(脂肪体)=0.001;t_(中肠)=10.480,P_(中肠)<0.001),胸部和卵巢的表达分别下调4.24和2.17倍(t_(胸部)=7.922,P_(胸部)<0.001;t_(卵巢)=3.752,P_(卵巢)=0.003);AalbILP6在雌蚊中肠和卵巢的相对表达量分别上调11.91和2.16倍(t_(中肠)=5.799,P_(中肠)<0.001;t_(卵巢)=9.074,P_(卵巢)<0.001)。结论在白纹伊蚊全基因组中共获得6条ILPs序列,并成功构建其时空表达谱。

关键词：白纹伊蚊胰岛素样肽时空表达血餐

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“虚实结合”实验教学新模式在《人体寄生虫学》教学中的应用——以“血吸虫综合实验”为例

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第2期35卷 180-183,216页

作者：陈晓军周莎邱竞帆陈琳徐志鹏季旻珺郭静张戎南京医科大学基础医学院病原生物学系、江苏省现代病原生物学重点实验室江苏南京211166 南京医科大学人事处江苏南京211166 南京医科大学基础医学院基础医学实验教学中心江苏南京211166

“新医科”背景下,信息技术已成为推动高等教育发展的重要驱动力之一。南京医科大学基础医学实验教学中心联合基础医学院病原生物学系将信息技术与实验教学相融合,设计和构建了“虚实结合”实验教学新模式,并应用于《人体寄生虫学》教学... 详细信息

“新医科”背景下,信息技术已成为推动高等教育发展的重要驱动力之一。南京医科大学基础医学实验教学中心联合基础医学院病原生物学系将信息技术与实验教学相融合,设计和构建了“虚实结合”实验教学新模式,并应用于《人体寄生虫学》教学,取得了良好的教学效果。该模式有助于学生加深对人体寄生虫学基础知识的理解,锻炼实践操作技能,培养医学生道德素养和综合能力。本文以“血吸虫综合实验”为例,对教学方案和实施、教学效果和评价、教学体会等进行了总结。

关键词：人体寄生虫学血吸虫虚实结合实验教学混合式教学

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家蝇抗菌肽MAF-1A的串联表达与抗白念珠菌体外活性检测

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中国人兽共患病学报 2018年第5期34卷 429-433页

作者：马晓琳朱志翠张迎春吴建伟王涛贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550025

目的构建家蝇抗菌肽MAF-1A基因原核串联表达体系,在大肠杆菌中表达具有抗菌活性的MAF-1A。方法根据大肠杆菌密码子的偏嗜性进行密码子优化,设计并合成含有5个拷贝的MAF-1A串联基因序列;将合成的串联基因序列克隆到表达载体pET28a并转化... 详细信息

目的构建家蝇抗菌肽MAF-1A基因原核串联表达体系,在大肠杆菌中表达具有抗菌活性的MAF-1A。方法根据大肠杆菌密码子的偏嗜性进行密码子优化,设计并合成含有5个拷贝的MAF-1A串联基因序列;将合成的串联基因序列克隆到表达载体pET28a并转化大肠杆菌Roseeta(DE3),应用IPTG诱导表达5×MAF-1A串联重组蛋白;通过SDS-PAGE电泳、Western Blot对表达产物进行分析;用肠激酶专一性切割经Ni-NTA纯化后的5×MAF-1A重组串联蛋白,得到MAF-1A单体;采用微量稀释法检测MAF-1A单体对白念珠菌的体外抗菌活性。结果 5×MAF-1A蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,28℃、0.8mmol/L IPTG诱导12h可达最大表达量;酶切后的抗菌肽MAF-1A单体对白念珠菌的MIC和MBC分别为0.5mg/mL、1.0mg/mL。结论成功构建MAF-1A原核串联表达系统,重组表达的MAF-1A对白念珠菌具有较高的抑杀活性。

关键词：抗菌肽 MAF-1A 串联表达白念珠菌抗菌活性

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埃及伊蚊体内wAlbB株沃尔巴克氏体感染的时空分布

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中国病原生物学杂志 2021年第1期16卷 71-75页

作者：陈玲玲王政艳胡蓉石梦婷蓝静程金芝吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州省黔西南州疾病预防控制中心贵州医科大学公共与卫生学院贵州医科大学医学生物技术教研室

目的了解沃尔巴克氏体(Wolbachia)在WB株埃及伊蚊体内不同时间和空间的分布状况。方法采用实时荧光定量PCR测定埃及伊蚊体内不同发育时期、不同日龄和不同组织的Wolbachia密度。结果埃及伊蚊卵和成虫期Wolbachia密度均高于其幼虫和蛹期(... 详细信息

目的了解沃尔巴克氏体(Wolbachia)在WB株埃及伊蚊体内不同时间和空间的分布状况。方法采用实时荧光定量PCR测定埃及伊蚊体内不同发育时期、不同日龄和不同组织的Wolbachia密度。结果埃及伊蚊卵和成虫期Wolbachia密度均高于其幼虫和蛹期(P<0.01);不同日龄雌、雄成蚊体内Wolbachia密度均随日龄增大而上升(P<0.05);同一日龄雌、雄成蚊体内Wolbachia密度随着日龄增长雌蚊显著高于雄蚊(P<0.01);雌蚊卵巢中Wolbachia密度显著高于脂肪体和中肠,但是与唾液腺之间的差异不具统计学意义(P>0.05)。结论wAlbB株Wolbachia密度受埃及伊蚊发育状态和日龄的影响,随日龄升高密度显著升高。这为进一步揭示Wolbachia与宿主之间的互作关系提供了基础数据。

关键词：埃及伊蚊 wAlbB株沃尔巴克氏体时空分布感染密度实时荧光PCR

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香茅醇自乳化递送系统的制备及其体外抗肿瘤活性评价

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中草药 2020年第5期51卷 1196-1204页

作者：杨佳佳韦世权张科陈妍姜丰周雪肖婷彭剑青沈祥春陶玲贵州医科大学贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心(贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室)药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳550025

目的考察香茅醇(citronellol,CT)对人喉癌上皮细胞HEp-2和人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响,并制备CT自乳化递送系统(self-emulsified drug delivery system,SMs),对HEp-2体外抗肿瘤活性和细胞摄取能力进行评价。方法采用MTT法考察CT对H... 详细信息

目的考察香茅醇(citronellol,CT)对人喉癌上皮细胞HEp-2和人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响,并制备CT自乳化递送系统(self-emulsified drug delivery system,SMs),对HEp-2体外抗肿瘤活性和细胞摄取能力进行评价。方法采用MTT法考察CT对HEp-2和MCF-7细胞增殖能力的影响;通过伪三元相图法优化香茅醇自乳化递送系统(CT-SMs)处方,进行外观形态、粒径和Zeta电位表征。采用MTT法检测CT-SMs对HEp-2细胞增殖能力的影响;荧光倒置显微镜定性和流式细胞仪定量考察HEp-2细胞对CT-SMs的摄取情况。结果经一定质量浓度CT处理后,MCF-7细胞增殖未受影响,差异无统计学意义(与对照组相比,P>0.05),而HEp-2细胞的增殖能力受到明显抑制(与对照组相比,P<0.05),呈剂量-时间依赖性;CT-SMs最佳处方是K_m(乳化剂与助乳化剂比例)为Kolliphor~?HS15-无水乙醇7∶3,CT-Km为3∶7。制备的微乳平均粒径为(354.0±9.5)nm,外观圆整呈类球形,分布均匀,Zeta电位为(-13.4±0.3)m V。细胞摄取实验结果表明,相同质量浓度的CT-SMs和CT处理HEp-2细胞后,CT-SMs较CT摄取量更多,分别为545.70±11.56、230.00±17.76。结论。采用滴加水法成功制备了CT-SMs,其处方工艺可行,制得的自微乳质量稳定可控。CT-SMs可明显抑制HEp-2细胞的增殖。

关键词：香茅醇自乳化递送系统抗肿瘤人喉癌上皮细胞乳腺癌细胞细胞摄取细胞增殖 MTT法伪三元相图

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吡喹酮对日本血吸虫急性感染小鼠肾脏功能损伤的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第2期39卷 200-209页

作者：赵成思秦敏谭明娟缪婷婷邵天业刘新建王勇南京医科大学病基础医学院原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京211166 南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)检验科南京210006

目的研究日本血吸虫感染急性期小鼠肾脏炎症的发生、发展进程,评价吡喹酮对急性期感染小鼠肾脏功能损伤的治疗效果。方法取55只C57BL/6J雌性小鼠,随机分为健康对照组(20只)、健康对照给吡喹酮组(5只)、感染组(20只)、感染给吡喹酮组(5只... 详细信息

目的研究日本血吸虫感染急性期小鼠肾脏炎症的发生、发展进程,评价吡喹酮对急性期感染小鼠肾脏功能损伤的治疗效果。方法取55只C57BL/6J雌性小鼠,随机分为健康对照组(20只)、健康对照给吡喹酮组(5只)、感染组(20只)、感染给吡喹酮组(5只)和吡喹酮杀虫组(5只)等5组,其中后3组每只小鼠均经腹部皮肤感染(14±2)条日本血吸虫尾蚴。感染后第6周开始给予吡喹酮治疗,健康对照给吡喹酮组和感染给吡喹酮组给药剂量为300 mg/kg,每12小时给一次药,连续给药2周;吡喹酮杀虫组给药剂量为250mg/kg,连续给药3天。健康对照组和感染组小鼠在感染后第1、3、6和8周各剖杀5只,健康对照给吡喹酮组、感染给吡喹酮组和吡喹酮杀虫组在感染后第8周剖杀,收集各组各时间点小鼠的尿样和血样,检测尿蛋白和血清肌酐水平,以评价肾功能变化。取小鼠肾脏,制备病理切片,经HE染色后,观察各组小鼠肾脏组织病理学改变;经F4/80免疫组化染色,观察各组小鼠肾脏中巨噬细胞浸润情况。分别用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测各组小鼠肾脏炎症相关因子(TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6)和巨噬细胞趋化因子(CCL2)的mRNA相对转录水平和蛋白表达水平。结果感染后第1、3、6和8周,感染组小鼠的尿蛋白含量分别为(1.67±0.52)、(2.17±0.41)、(3.00±0.89)和(4.00±0.63) g/L,均高于健康对照组小鼠(P<0.01);感染组小鼠的血清肌酐水平分别为(10.01±1.45)、(13.00±2.12)、(14.33±1.21)和(19.00±2.54)μmol/L,均高于健康对照组小鼠(P>0.05或P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示,感染组小鼠的炎症因子TNF-αmRNA相对转录水平分别为2.47±0.51、3.14±1.43、1.83±0.31和7.48±5.54, TGF-βm RNA相对转录水平分别为0.94±0.24、2.80±1.07、2.72±0.88和3.03±0.36, IL-1βmRNA相对转录水平分别为1.49±0.28、4.32±1.85、2.08±0.69和2.81±0.73, IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.96±0.31、1.48±0.35、2.38±1.17和2.85±1.32,均高于对应时间点的健康对照组小鼠(P<0.05或P<0.01)。Western blotting分析结果显示,感染组小鼠的TNF-α和IL-1β蛋白表达水平均较健康对照组升高。感染组小鼠的巨噬细胞趋化因子CCL2 mRNA相对转录水平为1.84±0.17、3.42±0.85、3.03±1.00和2.63±0.43,均高于健康对照组小鼠(P<0.01)。肾脏病理切片HE染色结果显示,感染组小鼠肾脏组织中大量炎性细胞浸润,肾小球增大,肾小球系膜细胞增生。免疫组化分析结果显示,感染组小鼠肾脏F4/80阳性区域面积为(1.99±0.49)%、(4.27±0.90)%、(6.71±1.38)%和(9.83±1.91)%,均高于健康对照组(P<0.01)。经吡喹酮2周疗程治疗后,感染给吡喹酮组小鼠的肾脏组织损伤减轻,肾小球系膜细胞增生缓解。与感染组比较,感染给吡喹酮组小鼠的尿蛋白含量[(2.67±0.52) g/L]减少,血清肌酐水平[(14.17±2.88)μmol/L]下降,F4/80阳性区域面积[(5.92±1.81)%]减少,TGF-β(0.99±0.23)和IL-6(1.24±0.53)m RNA相对转录水平下降(P<0.05或P<0.01), TNF-α和IL-1β的蛋白表达减少;而吡喹酮杀虫组与感染组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与感染组(5.29±2.98、2.81±0.73、2.63±0.43)比较,感染给吡喹酮组(0.98±0.36、0.95±0.33、0.80±0.27)和吡喹酮杀虫组的TNF-α(1.56±0.66)、IL-1β(1.76±0.76)和CCL2mRNA(1.41±0.48)相对转录水平均下降(P<0.05或P<0.01)。结论日本血吸虫感染小鼠在感染初期和急性期发生肾脏炎症,肾脏组织中伴有巨噬细胞浸润,肾小球和肾功能损伤。吡喹酮2周疗程治疗可明显改善急性日本血吸虫感染小鼠的肾脏炎症和肾功能。

关键词：日本血吸虫肾损伤炎症吡喹酮巨噬细胞

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白纹伊蚊自噬基因ATG8蛋白多克隆抗体的制备及应用

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中国病原生物学杂志 2023年第7期18卷 787-792页

作者：何珊肖秋秋石梦婷李威仪彭哲慧程金芝吴家红贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室安顺市人民医院检验科

目的通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,并验证抗体的实用性。方法从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段,然后与载体pET30a连接,构建原核表达载体pET30a-AaATG8... 详细信息

目的通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,并验证抗体的实用性。方法从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段,然后与载体pET30a连接,构建原核表达载体pET30a-AaATG8并转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,挑取单克隆进行PCR鉴定,提取质粒进行测序鉴定。再将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白rAa-ATG8,纯化透析后免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体效价,并以该抗体为一抗采用Western blot检测不同物种ATG8蛋白的表达。结果成功构建原核表达载体PET30a-AaATG8并在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白。重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其血清抗体效价为1∶640000;Western blot显示rAa-ATG8多克隆抗体可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,反应条带位于18、16或14 ku处。结论成功获得高效价的rAa-ATG8多克隆抗体,该抗体不仅可用于检测白纹伊蚊ATG8蛋白,还可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白,为研究自噬在蚊虫以及其他物种中的作用奠定了基础。

关键词：白纹伊蚊自噬相关蛋白8/ATG8 原核表达抗体制备

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2014-2016年贵州省市(州)级疟疾实验室检测能力的评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第5期35卷 466-471页

作者：佘丹娅吴家红卢丽丹黄雨婷耿燕张念恒贵州医科大学基础医学院现代病原生物学省级特色重点实验室贵阳550000 贵州省疾病预防控制中心贵阳550000

目的贵州省级疟疾参比实验室对市(州)级疟疾实验室上送的血涂片和滤纸血样进行复核,评价市(州)级疟疾实验室的检测能力。方法2014-2016年,贵州省疟疾参比实验室通过镜检和巢式PCR分别对市(州)级疟疾实验室上送的血涂片和滤纸血样进行复... 详细信息

目的贵州省级疟疾参比实验室对市(州)级疟疾实验室上送的血涂片和滤纸血样进行复核,评价市(州)级疟疾实验室的检测能力。方法2014-2016年,贵州省疟疾参比实验室通过镜检和巢式PCR分别对市(州)级疟疾实验室上送的血涂片和滤纸血样进行复核,评价上送的血涂片制作质量。以省级疟疾参比实验室镜检结果为标准,分析市(州)级疟疾实验室镜检的疟原虫阳性、阴性和虫种符合情况。分析省级疟疾参比实验室镜检和巢式PCR结果。结果 2014-2016年,市(州)级疟疾实验室共上送至省级疟疾参比实验室血涂片163份,经市(州)级疟疾实验室镜检,阳性84份,阴性79份,滤纸血样159份,上送率分别为100%(163/163)和97.6%(159/163)。血涂片制作、染色、清洁度及综合判定的合格率分别为58.9%(96/163)、75.5%(123/163)、72.4%(118/163)和69.9%(114/163),2016年血涂片制作和综合判定的合格率(71.3%、95.0%)均高于2014年(46.4%、46.4%)和2015年(48.1%、44.4%)(P<0.05)。2014-2016年,省级疟疾参比实验室与市(州)级疟疾实验室血涂片的镜检总符合率分别为67.9%(38/56)、66.7%(18/27)和88.8%(71/80),2016年总符合率高于2014年和2015年,差异有统计学意义(P<0.05);阳性符合率分别为81.3%(26/32)、70.0%(14/20)和96.9%(31/32),3年间差异无统计学意义(P>0.05);虫种符合率分别为46.9%(15/32)、65.0%(13/20)和81.3%(26/32),2014年虫种符合率与2016年比较,差异有统计学意义(P<0.05);阴性符合率分别为95.8%(23/24)、5/7和93.8%(45/48),3年间差异无统计学意义(P>0.05)。省级疟疾参比实验室镜检与巢式PCR检测结果均为阳性且虫种一致的占44.0%(70/159),均为阴性的占48.4%(77/159),结果不一致的占7.6%(12/159)。结论2016年市(州)级疟疾实验室血涂片综合判定合格率和镜检总符合率均高于2014和2015年,说明市(州)级疟疾实验室检测能力有提升。

关键词：疟疾实验室镜检巢式PcR

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埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第2期40卷 153-158,167页

作者：张霞颜凤牟小会林紫敏聂映程金芝商正玲吴家红贵州医科大学寄生虫学教研室贵安550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵安550025 遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)检验科遵义563099 贵州医科大学免疫学教研室贵安550025

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序... 详细信息

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度rAael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度rAael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1287 bp,含27个氨基酸组成的信号肽,成熟肽序列长1200 bp,编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c基因片段,大小约为1200 bp。菌液PCR、双酶切和测序鉴定显示,pEASYE1-Aael-yellow-c质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体形式表达;镍柱亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。Western blotting结果显示,该蛋白可被His-tag抗体和抗rAael-yellow-c蛋白的兔血清多克隆抗体识别。血小板聚集抑制实验结果显示,2083.30、416.66、83.33、16.67和3.33 nmol/L rAael-yellow-c蛋白可抑制由ADP诱导的血小板聚集,差异具有统计学意义(t=7.09、10.39、5.39、10.54和8.93,P<0.01),其中3.33 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集抑制作用最强,抑制率为(59.27±11.90)%;0.67、0.13和0.02 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集作用无影响(t=2.10、1.33和0.00,P>0.05)。内外源凝血实验结果显示,与阴性对照组相比,0.12、1.20和12.00μmol/L rAael-yellow-c分别作用于人血浆时,PT分别为13.63~14.10、13.32~14.38和13.55~16.01 s,差异无统计学意义(t=1.33、0.63和1.00,P>0.05);APTT分别为32.76~38.46、31.94~41.78和33.34~39.29 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.06和0.24,P>0.05);TT分别为19.12~21.20、19.7~23.12和21.85~25.30 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.24和1.60,P>0.05)。结论获得的r Aael-yellow-c蛋白主要通过抑制ADP诱导的血小板聚集作用帮助蚊虫吸血。

关键词：埃及伊蚊 yellow-c基因血小板聚集抗凝血

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