检索结果-内蒙古大学图书馆

ralb34k2-1刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞对蛋白质PTM代谢物修饰及DENV-2易感性的影响

贵州医科大学学报 2024年第9期49卷 1259-1268页

作者：代薇露胡欢覃燕春吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室贵州贵阳550025

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化的... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化的泛特异性抗体,通过免疫印迹法(Western blot)检测ralb34k2-1蛋白刺激后不同时相的RAW264.7细胞蛋白质翻译后代谢物修饰的情况,酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞内外的乳酸含量;用2 mg/L ralb34k2-1预处理RAW264.7细胞24 h后、继续培养2 d、再用DENV-2感染细胞,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测感染18 h和36 h后的病毒核酸变化,分析ralb34k2-1预处理后对病毒易感性的影响;检测感染前后胞内白细胞介素1β-(IL-1β)、白细胞介素10-(IL-10)、肿瘤坏死因子β-(TGF-β)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)mRNA的相对表达情况,分析ralb34k2-1预处理对细胞免疫状态及细胞极化的影响。结果胞内不同的代谢物对蛋白质的修饰程度主要表现为乳酰化修饰>乙酰化修饰>琥珀酰化修饰;在时相上,除琥珀酰修饰外,随时间的延长其余代谢物对蛋白质的修饰有增多的趋势,其中以6 h乳酰化修饰最多;ralb34k2-1刺激对细胞的乳酸产生无明显影响;经ralb34k2-1预处理后胞内DENV-E相对表达量较对照组高5倍以上,IL-10 mRNA的相对表达在感染前后均保持高水平(6~8倍);在感染前iNOS/Arg比值为3.46±1.59,但受ralb34k2蛋白预处理的细胞在感染后表现iNOS表达下调的趋势。结论蚊唾液ralb34k2蛋白可能通过调控PTM代谢物修饰的方式,改变细胞的免疫状态从而增强登革病毒的易感性。

关键词：白纹伊蚊蚊唾液蛋白34k2-1 巨噬细胞 RAW264.7细胞蛋白翻译后修饰 2型登革病毒免疫调控

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不同饮食对WB株埃及伊蚊雌蚊体内沃尔巴克氏体密度的影响

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第3期33卷 331-335,355页

作者：石梦婷何珊李威仪肖秋秋程金芝吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550025

目的了解不同饮食对WB株埃及伊蚊雌蚊卵巢、脂肪体和其他剩余组织沃尔巴克氏体(Wolbachia)密度的影响。方法WB株埃及伊蚊羽化后,分为葡萄糖组、白糖组和血餐组。葡萄糖组和白糖组分别喂食葡萄糖和白糖,血餐组在第3天时喂食血餐2 h,分别... 详细信息

目的了解不同饮食对WB株埃及伊蚊雌蚊卵巢、脂肪体和其他剩余组织沃尔巴克氏体(Wolbachia)密度的影响。方法WB株埃及伊蚊羽化后,分为葡萄糖组、白糖组和血餐组。葡萄糖组和白糖组分别喂食葡萄糖和白糖,血餐组在第3天时喂食血餐2 h,分别收集各处理组4、4.5、5和6 d的蚊虫,解剖获取各蚊虫卵巢、脂肪体和其他剩余组织,分别提取DNA,实时荧光定量PCR法检测各组织沃尔巴克氏体密度。采用SPSS 20.0软件作数据分析,Kruskal-Wallis H检验分析不同饮食条件和不同日龄时蚊虫沃尔巴克氏体密度变化的差异。结果4.5 d时,在葡萄糖、白糖和血餐条件下,埃及伊蚊雌蚊卵巢沃尔巴克氏体密度分别为2.149、2.773和0.761,血餐组与其他2组密度差异有统计学意义(H=40.754,P<0.001);而蚊虫脂肪体和其他剩余组织沃尔巴克氏体密度在葡萄糖、白糖和血餐条件下分别为0.859、1.189、1.298和0.505、0.405、1.012,均以血餐组最高(H=1.631,P=0.442;H=6.306,P=0.043)。同一日龄3种饮食条件下,蚊虫卵巢沃尔巴克氏体密度在4、5、6 d时血餐组较低,且在4和6 d时白糖组最高(H=14.335,P=0.001;H=22.049,P<0.001;H=4.963,P=0.084)。蚊虫脂肪体4和6 d时的沃尔巴克氏体密度以及其他剩余组织4、5、6 d的沃尔巴克氏体密度,均为血餐组>白糖组>葡萄糖组(H=7.186,P=0.028;H=10.504,P=0.005;H=16.338,P<0.001;H=14.083,P=0.001;H=4.266,P=0.118)。不同日龄同一饮食条件下,葡萄糖组蚊虫卵巢、脂肪体和其他剩余组织沃尔巴克氏体密度随日龄变化差异无统计学意义(H=4.683,P=0.096;H=2.451,P=0.294;H=0.293,P=0.864);白糖饮食条件下,蚊虫卵巢和脂肪体沃尔巴克氏体密度随日龄增加有增加趋势,但差异无统计学意义(H=4.731,P=0.094;H=0.390,P=0.823);血餐条件下,蚊虫卵巢和脂肪体沃尔巴克氏体密度均随日龄先降低后上升(H=20.572,P<0.001;H=9.675,P=0.008)。结论血餐降低WB株埃及伊蚊生殖组织沃尔巴克氏体密度,可增加非生殖组织内沃尔巴克氏体密度。在实验室条件下,可用白糖饲养蚊虫以增加沃尔巴克氏体密度。

关键词：埃及伊蚊沃尔巴克氏体饮食密度

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埃及伊蚊黄蛋白c基因的克隆、表达及其体外抗凝血作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第2期40卷 153-158,167页

作者：张霞颜凤牟小会林紫敏聂映程金芝商正玲吴家红贵州医科大学寄生虫学教研室贵安550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵安550025 遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)检验科遵义563099 贵州医科大学免疫学教研室贵安550025

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序... 详细信息

目的克隆表达埃及伊蚊黄蛋白c(Aael-yellow-c)基因,并探讨rAael-yellow-c蛋白体外抗凝血作用。方法RT-PCR扩增Aael-yellow-c成熟肽基因,纯化后的片段与pEASY-E1载体连接,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。0.1 mol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达后,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。比浊法观察不同浓度rAael-yellow-c蛋白对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集活性影响。手工法检测不同浓度rAael-yellow-c蛋白对人血浆凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)的影响。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,组间差异比较采用t检验。结果Aael-yellow-c基因CDS区为1287 bp,含27个氨基酸组成的信号肽,成熟肽序列长1200 bp,编码399个氨基酸。RT-PCR扩增获得Aael-yellow-c基因片段,大小约为1200 bp。菌液PCR、双酶切和测序鉴定显示,pEASYE1-Aael-yellow-c质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体形式表达;镍柱亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。Western blotting结果显示,该蛋白可被His-tag抗体和抗rAael-yellow-c蛋白的兔血清多克隆抗体识别。血小板聚集抑制实验结果显示,2083.30、416.66、83.33、16.67和3.33 nmol/L rAael-yellow-c蛋白可抑制由ADP诱导的血小板聚集,差异具有统计学意义(t=7.09、10.39、5.39、10.54和8.93,P<0.01),其中3.33 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集抑制作用最强,抑制率为(59.27±11.90)%;0.67、0.13和0.02 nmol/L的重组蛋白对ADP诱导的血小板聚集作用无影响(t=2.10、1.33和0.00,P>0.05)。内外源凝血实验结果显示,与阴性对照组相比,0.12、1.20和12.00μmol/L rAael-yellow-c分别作用于人血浆时,PT分别为13.63~14.10、13.32~14.38和13.55~16.01 s,差异无统计学意义(t=1.33、0.63和1.00,P>0.05);APTT分别为32.76~38.46、31.94~41.78和33.34~39.29 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.06和0.24,P>0.05);TT分别为19.12~21.20、19.7~23.12和21.85~25.30 s,差异无统计学意义(t=0.47、0.24和1.60,P>0.05)。结论获得的r Aael-yellow-c蛋白主要通过抑制ADP诱导的血小板聚集作用帮助蚊虫吸血。

关键词：埃及伊蚊 yellow-c基因血小板聚集抗凝血

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微小膜壳绦虫感染对ICR小鼠小肠LY6A(Sca-1)及IFN-γ、STAT1表达的影响

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中国人兽共患病学报 2021年第7期37卷 611-617页

作者：赵敬杨汉蕾陈素素牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025

目的探讨微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠组织中LY6A及IFN-γ、STAT1的表达情况。方法采集微小膜壳绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将ICR小鼠随机分为对照组和实验组,实验组以定量1 000个/只虫卵灌胃感染,于感染后第2 d和第8 d按照编号... 详细信息

目的探讨微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠组织中LY6A及IFN-γ、STAT1的表达情况。方法采集微小膜壳绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将ICR小鼠随机分为对照组和实验组,实验组以定量1 000个/只虫卵灌胃感染,于感染后第2 d和第8 d按照编号处死小鼠获取小肠组织。采用HE染色进行小肠组织病理学观察,RT-PCR技术检测LY6A、IFN-γ和STAT1的mRNA相对表达量,免疫组织化学技术检测小肠中LY6A蛋白阳性细胞的表达,并用PRM技术对LY6A蛋白和STAT1蛋白进行相对丰度定量。结果 HE染色结果显示感染后第8 d在肠腔内发现成虫节片,并且虫体寄生处出现急性炎症反应。RT-PCR检测显示感染第2 d实验组LY6A(t=12.57,P<0.001)和STAT1(t=12.13,P<0.001)的mRNA相对表达量低于对照组,而IFN-γ的mRNA相对表达量高于对照组(t=7.78,P<0.01);感染后第8 d实验组LY6A(t=10.01,P<0.001)和STAT1(t=11.19,P<0.001)的mRNA相对表达量高于对照组;而IFN-γ的mRNA相对表达量低于对照组(t=26.47,P<0.001)。免疫组化结果显示感染后第2 d实验组LY6A阳性细胞百分比高于对照组(t=4.26,P<0.01),感染后第8 d实验组LY6A蛋白阳性细胞百分比高于对照组(t=8.18,P<0.001)。PRM检测结果显示感染后第2 d实验组LY6A蛋白相对表达量低于对照组(t=6.55,P<0.05),实验组STAT1蛋白与对照组相比无统计学差异,感染后第8 d实验组LY6A蛋白(t=4.95,P<0.05)和STAT1(t=2.91,P<0.05)蛋白的相对表达量均高于对照组。结论微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠后LY6A(Sca-1)的mRNA水平和蛋白水平在幼虫侵入早期呈低表达,成虫期呈高表达;IFN-γ对LY6A的表达不起主导作用,而STAT1可能对LY6A(Sca-1)的表达起诱导作用。

关键词：微小膜壳绦虫 LY6A/Sca-1 ICR小鼠 IFN-γ STAT1

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人呼吸道合胞病毒感染致小鼠急性肺损伤动物模型的建立

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中国病原生物学杂志 2022年第9期17卷 993-998,1004页

作者：杨筱萌罗语思郭名扬陈芳沈胡艳牟荣沈祥春张科李金福贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院急诊科贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心

目的筛选人呼吸道合胞病毒高毒株并经下呼吸道感染BALB/c小鼠,建立小鼠急性肺损伤动物模型。方法将呼吸道合胞病毒野生株HRSV-A-GZ08-0在8月龄BALB/c雌鼠中进行连续传代,筛选得到高毒株R96-5。分别经下呼吸道攻毒野生株HRSV-A-GZ08-0和... 详细信息

目的筛选人呼吸道合胞病毒高毒株并经下呼吸道感染BALB/c小鼠,建立小鼠急性肺损伤动物模型。方法将呼吸道合胞病毒野生株HRSV-A-GZ08-0在8月龄BALB/c雌鼠中进行连续传代,筛选得到高毒株R96-5。分别经下呼吸道攻毒野生株HRSV-A-GZ08-0和高毒株R96-5感染BALB/c小鼠,建立急性肺损伤动物模型,通过对小鼠体重变化、存活情况、肺灌洗液病毒滴度、肺切片免疫荧光检测,以及肺组织病理损伤、炎性反应和肺气血屏障损伤等方面对模型进行评价。结果与野生株HRSV-A-GZ08-0感染组小鼠比较,同等剂量高毒株R96-5感染组小鼠存活率显著下降,攻毒后6日R96-5感染组小鼠存活率降至0,而野生株HRSV-A-GZ08-0感染组存活率为100%,且R96-5感染组肺灌洗液中病毒滴度显著升高,在感染后第2、3天病毒基因拷贝数显著升高,且肺切片免疫荧光检测同样验证此结果,hRSV F蛋白平均荧光强度明显增高。高毒株R96-5感染组小鼠炎症反应显著,TNF-α、IFN-γ和CCL-3相对表达水平均有所升高,肺气血屏障破坏明显,白蛋白浓度及肺指数均升高,肺组织病理损伤显著。结论高毒株R96-5感染小鼠具有典型的重症呼吸道病毒感染致急性肺损伤病理特征,重症呼吸道病毒感染致急性肺损伤动物模型构建成功,此模型可用于该类型感染致急性肺损伤进展为急性呼吸窘迫综合征的病理生理机制及药物干预研究。

关键词：人呼吸道合胞病毒急性肺损伤高毒株动物模型急性呼吸窘迫综合征

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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白对C6/36细胞内的DENV2早期抑制作用

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中国病原生物学杂志 2021年第2期16卷 167-170,176页

作者：朱亚妮金芮代薇露李莹陈玲玲赵久刚吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室

目的探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用。方法采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6 h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western blot分别检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞膜蛋白结合的差异。结果rAlb-34k2蛋白作用6 h后,C6/36细胞内DENV2 NS1 RNA的相对表达被抑制,其中10、25、100μg/ml浓度组NS1 RNA的相对表达(2^(-ΔΔCT))值分别为(0.6778±0.04827)、(0.5972±0.06369)和(0.4704±0.05297),差异有统计学意义(P<0.05);rAlb-34k2蛋白作用60 h后,各蛋白组间差异无统计学意义。Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白(71、118.3、177.5μg/ml)可与DENV2病毒颗粒结合。间接ELISA检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞疏水性膜蛋白和亲水性膜蛋白结合的A值分别为(1.1±0.26)和(3.1±0.047),差异有统计学意义(P=0.0016),Western blot检测亲水性膜蛋白的阳性结合条带数显著多于疏水性膜蛋白。结论白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白体外能与DENV2病毒颗粒及C6/36细胞膜蛋白结合,并抑制DENV2病毒早期在C6/36细胞中增殖。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34k2蛋白 DENV2 亲水性膜蛋白

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病毒感染对细胞凋亡影响的研究进展

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热带病与寄生虫学 2022年第5期20卷 284-289页

作者：杨筱萌罗语思张科贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学附属医院急诊科

病毒感染与宿主细胞凋亡之间存在着密切的关系。宿主细胞主动性凋亡引起被感染细胞死亡，同时达到清除病毒的效果，在机体防御病毒感染中起重要作用；病毒亦主动诱导或抑制宿主细胞凋亡，从而达到在机体内复制产生更多子代病毒并完成生... 详细信息

病毒感染与宿主细胞凋亡之间存在着密切的关系。宿主细胞主动性凋亡引起被感染细胞死亡，同时达到清除病毒的效果，在机体防御病毒感染中起重要作用；病毒亦主动诱导或抑制宿主细胞凋亡，从而达到在机体内复制产生更多子代病毒并完成生活周期的目的，并造成持续性感染或肿瘤发生。本文对细胞凋亡与病毒感染关系相关研究进行综述，为病毒感染性疾病的发病机制、治疗和抗病毒制剂研究提供新思路。

关键词：细胞凋亡病毒感染诱导凋亡抑制凋亡

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埃及伊蚊体内wAlbB株沃尔巴克氏体感染的时空分布

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中国病原生物学杂志 2021年第1期16卷 71-75页

作者：陈玲玲王政艳胡蓉石梦婷蓝静程金芝吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州省黔西南州疾病预防控制中心贵州医科大学公共与卫生学院贵州医科大学医学生物技术教研室

目的了解沃尔巴克氏体(Wolbachia)在WB株埃及伊蚊体内不同时间和空间的分布状况。方法采用实时荧光定量PCR测定埃及伊蚊体内不同发育时期、不同日龄和不同组织的Wolbachia密度。结果埃及伊蚊卵和成虫期Wolbachia密度均高于其幼虫和蛹期(... 详细信息

目的了解沃尔巴克氏体(Wolbachia)在WB株埃及伊蚊体内不同时间和空间的分布状况。方法采用实时荧光定量PCR测定埃及伊蚊体内不同发育时期、不同日龄和不同组织的Wolbachia密度。结果埃及伊蚊卵和成虫期Wolbachia密度均高于其幼虫和蛹期(P<0.01);不同日龄雌、雄成蚊体内Wolbachia密度均随日龄增大而上升(P<0.05);同一日龄雌、雄成蚊体内Wolbachia密度随着日龄增长雌蚊显著高于雄蚊(P<0.01);雌蚊卵巢中Wolbachia密度显著高于脂肪体和中肠,但是与唾液腺之间的差异不具统计学意义(P>0.05)。结论wAlbB株Wolbachia密度受埃及伊蚊发育状态和日龄的影响,随日龄升高密度显著升高。这为进一步揭示Wolbachia与宿主之间的互作关系提供了基础数据。

关键词：埃及伊蚊 wAlbB株沃尔巴克氏体时空分布感染密度实时荧光PCR

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贵州白纹伊蚊感染沃尔巴克氏体以及WO噬菌体的初步调查

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中国病原生物学杂志 2020年第1期15卷 69-73,77页

作者：王政艳梁秋果杨茜陈玲玲张霞胡容程金芝吴家红贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室贵州医科大学公共与卫生学院

目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基... 详细信息

目的了解贵州白纹伊蚊种群中沃尔巴克氏体(Wolbachia)以及WO噬菌体的感染情况。方法于2017年在贵州省贵阳市、都匀市、铜仁市、凯里市、遵义市、兴义市、贵安新区、毕节市采用勺舀法采集白纹伊蚊幼虫标本,实验室饲养至成蚊。提取雌蚊基因组DNA,PCR扩增沃尔巴克氏体表面蛋白基因(Wolbachia surface protein,wsp)和WO噬菌体衣壳蛋白的核糖体S7基因(Ribosomal S7 gene,orf7)。分别从8个地区的阳性检测标本中随机选取10个样品进行测序,使用DNAStar 7.0软件分析基因的基本特征;采用MEGA 4.0软件对所获基因序列进行分析比对,并构建系统进化树;采用SPSS 20.0软件对WO噬菌体侵染wAlbA、wAlbB株沃尔巴克氏体的检测结果进行关联性分析。结果贵州省8个地区的白纹伊蚊wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染率为84.30%(322/382),wAlbA株、wAlbB株沃尔巴克氏体单感染率分别为4.97%(19/382)和3.66%(14/382),WO噬菌体的感染率为76.44%(292/382)。通过测序获得沃尔巴克氏体的wsp序列,其中wAlbA株(379 bp)80条,wAlbB株(501 bp)78条;获得WO噬菌体的orf7序列(263 bp)73条。比对分析显示贵州省8个地区获得所有wAlbA株、wAlbB株的wsp序列、orf7序列的同源性均为100%。确切概率法分析WO噬菌体侵染与wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体超感染有关联性(P<0.05)。结论贵州白纹伊蚊种群普遍感染WO噬菌体和沃尔巴克氏体,且以超感染wAlbA和wAlbB株沃尔巴克氏体为主。WO噬菌体主要侵染的对象是超感染wAlbA和wAlbB株的沃尔巴克氏体。

关键词：白纹伊蚊沃尔巴克氏体 WO噬菌体

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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白诱导小鼠皮肤补体固有成分及CRIg的变化

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中国病原生物学杂志 2020年第5期15卷 551-555,579页

作者：金芮田炎珅朱亚妮代薇露卢涛徐昊朱俐兰朱家洪吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学微生物与生化药学工程中心

目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDN... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDNA后经实时荧光定量PCR方法检测刺激后不同时间各组标本中补体C3、C1q、CfB、CRIg的mRNA变化。结果rAlb-34k2诱导CfB、C3、C1q的mRNA表达上调,且皮肤组织上调幅度高于RAW264.7细胞,其中以CfB mRNA的上调幅度及持续更为显著,在诱导24h时各组(5μg、20μg)2-△△CT值分别是23.90±8.38、8.50±1.64(P<0.05);但刺激12-24h时高剂量组与低剂量组比较上调幅度差异无统计学意义(P>0.05)。在RAW264.7细胞,以刺激6h各种补体固有分成CfB、C3、C1q表达上调,但随时间延长均恢复至正常水平,各剂量组间差异不明显。在局部皮肤组织,rAlb-34k2刺激24h后CRIg表达上调,且呈浓度和时间依赖趋势;48h时,各组rAlb-34k2(5μg、20μg)2-△△CT值达到高峰,分别为8.67±2.44和32.98±9.74,有统计学差异(P<0.05)。在Raw264.7细胞,刺激6h时CRIg有上调表达趋势,但随时间延长而下调,各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白参与调控巨噬细胞及皮肤补体重要成分的表达变化,在组织中尤为显著,且显著上调定居组织的巨噬细胞特异性膜受体CRIg。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34k2 皮肤局部补体 CRIg 巨噬细胞

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