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基因组学与应用生物学 2024年第4期43卷 697-707页

作者：刘凯凤韦现鹏欧阳燕胡祖权岳萍曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

子宫内膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma,UCEC)是最常见的女性生殖系统肿瘤,肿瘤发生远端转移的患者预后极差。失巢凋亡(anoikis)是一种特殊的程序性细胞死亡形式,在肿瘤的侵袭和转移中起着关键作用,分析失巢凋亡相关基因与U... 详细信息

子宫内膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma,UCEC)是最常见的女性生殖系统肿瘤,肿瘤发生远端转移的患者预后极差。失巢凋亡(anoikis)是一种特殊的程序性细胞死亡形式,在肿瘤的侵袭和转移中起着关键作用,分析失巢凋亡相关基因与UCEC患者预后之间的关系将为临床治疗提供指导。本研究采用非监督一致性聚类算法对数据集进行分组,分析患者的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)与临床特征的差异。同时,筛选预后相关的失巢凋亡基因,构建风险评分模型,评估UCEC患者的风险评分与临床特征、TME和药物治疗反应之间的关系。在分析失巢凋亡相关基因表达差异的基础上确定两个明确的聚类(A簇和B簇),与A簇UCEC患者相比,B簇UCEC患者的总生存期较短、免疫浸润水平较低。构建的风险评分模型可量化失巢凋亡相关基因的调控模式,高风险评分组表现为预后不良且免疫细胞浸润水平低,而低风险评分组则相反。药物敏感性分析结果表明,高风险评分的人群可能从靶向有丝分裂和DNA修复通路的药物中获得更佳疗效。本研究揭示了失巢凋亡相关基因与临床特征、TME和药物治疗反应之间的潜在关系,并阐明了其在UCEC治疗中的价值。

关键词：子宫内膜癌肿瘤微环境失巢凋亡风险评分模型预后价值

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DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的安全性和有效性分析

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基因组学与应用生物学 2024年第3期43卷 504-521页

作者：熊华毅余鹏刘鲜梅宋咏刚胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025

本研究旨在研究树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cell and cytokine-induced killer cell,DC-CIK)免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的临床疗效。本研究从PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、WanFang Data、SinoMed和VIP等数据库中,收集2000年1月至2023年2月发表的符合要求的随机对照研究,应用RevMan 5.4.1软件进行Meta分析。共纳入15篇文献,894例患者,包括686例骨髓瘤患者和208例白血病患者,其中DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗组共451例,设置为联合治疗组,而单纯化疗组共443例,设置为化疗(对照)组。分析结果显示,联合治疗组在临床疗效、预后情况、生活质量及各项免疫指标(T淋巴细胞亚群分布和细胞因子分泌水平)等方面均优于化疗组,且不会给患者带来特异性的副作用。研究结果表明,DC-CIK免疫治疗联合化疗能够改善恶性血液肿瘤患者的免疫功能,增强机体的抗肿瘤能力,从而显著提高临床治疗的效果。

关键词：树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞联合治疗血液恶性肿瘤 Meta分析

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DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的Meta分析

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基因组学与应用生物学 2023年

作者：熊华毅余鹏刘鲜梅宋咏刚胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院)贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室

本研究旨在研究树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cell and cytokine-induced killer cell，DC-CIK）免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的临床疗效。本研究从PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、WanFang Data、SinoMed和VIP等数据库中，收集2000年1月至2023年2月发表的符合要求的随机对照研究，应用RevMan 5.4.1软件进行Meta分析。共纳入15篇文献，894例患者，包括686例骨髓瘤患者和208例白血病患者，其中DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗组共451例，设置为联合治疗组，而单纯化疗组共443例，设置为对照组。分析结果显示，联合治疗组在临床疗效、预后情况、生活质量及各项免疫指标（T淋巴细胞亚群分布和细胞因子分泌水平）等方面均优于单纯化疗治疗组，且不会给患者带来特异性的副作用。研究结果表明，DC-CIK免疫治疗联合化疗能够改善恶性血液肿瘤患者的免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力，从而显著提高临床治疗的效率。

关键词：树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞联合治疗血液恶性肿瘤 Meta分析

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非靶向脂质组学分析伏马菌素B1对未成熟树突状细胞脂质代谢的影响

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基因组学与应用生物学 2023年第3期42卷 327-336页

作者：唐开义于欢喻艳琴欧沙王赟曾柱胡祖权贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025

伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)是一种具有免疫抑制作用的真菌毒素。本研究利用FB1处理未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs),通过非靶向脂质组学分析FB1对imDCs脂质代谢的影响。运用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱... 详细信息

伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)是一种具有免疫抑制作用的真菌毒素。本研究利用FB1处理未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs),通过非靶向脂质组学分析FB1对imDCs脂质代谢的影响。运用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术采集质谱数据,通过主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘法判别分析(partial least-squares discrimination analysis,PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)进行多维统计分析,比较FB1处理组和对照组之间脂质代谢谱的差异,并以OPLS-DA模型的变量权重值(variable importance for the projection,VIP)>1和P<0.05为标准筛选差异脂质分子。脂质组学分析结果显示,从imDCs中共检测到36个脂质亚类,1845个脂质分子。从FB1处理的imDCs中筛选出30个显著性差异脂质分子,其中神经酰胺(ceramide,Cer)、磷酸神经酰胺(ceramide phosphate,CerP)、单半乳糖甘油二酯(monogalactosyldiacylglycerol,MGDG)、磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、鞘氨醇(sphingosine,So)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)和鞘磷脂(sphingomyelin,SM)等亚类的含量显著下降(VIP>1,P<0.05),而甘油二酯(diacylglycerol,DG)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)的含量显著升高(VIP>1,P<0.05)。研究结果说明FB1可能通过干扰imDCs的正常脂质代谢来发挥其免疫抑制作用。

关键词：伏马菌素B1 树突状细胞脂质组学脂质代谢物鞘脂代谢

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微丝骨架结合蛋白在未成熟树突状细胞抗原吞噬过程中的差异表达分析

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医用生物力学 2024年第5期39卷 814-822页

作者：李道红罗代琴曾宪琳张帅徐朴吴翠芳王赟叶远浓胡祖权龙金华曾柱贵州医科大学基础医学院、贵州省细胞免疫治疗工程技术中心/贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院、贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室)贵阳550025 贵州医科大学附属医院介入科贵阳550004 贵州医科大学大健康学院医学信息学教研室生物信息学与生物医学大数据智能挖掘实验室贵阳550025 贵州医科大学附属肿瘤医院头颈肿瘤科贵阳550000

目的探讨未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)发挥抗原吞噬功能时关键微丝骨架结合蛋白(microfilament cytoskeleton-binding proteins,MCBPs)的差异表达情况。方法从健康人外周血中分离单核细胞(monocytes,MOs),经重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)、重组人白介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导培养6天获得imDCs;将imDCs与低分子量(40 kDa)和高分子量(150 kDa)的右旋糖酐分别孵育1、3和6 h,流式细胞仪检测imDCs吞噬右旋糖酐的比率及免疫表型分子的表达;免疫荧光检测丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)及PFN1、WASP、α-actinin在细胞中的定位情况;qPCR和Western blotting分别检测MCBPs在mRNA和蛋白水平的表达差异;最后,基于系统生物学算法中的逐步回归和主成分分析方法筛选成分系数最大的MCBPs。结果在吞噬抗原的过程中,imDCs对低分子量抗原的吞噬速度更快,吞噬时长可维持约3 h,其细胞表型和细胞形态逐渐向mDCs分化,且F-actin发生明显的重塑,PFN1、CDM、WASP、CAPZB、Filamin A、α-actinin等MCBPs的表达下调,WAVE1、Arp2/3复合体、Fascin的表达上调;信号蛋白Rac1的mRNA表达上调,CDC42和RhoA的mRNA表达下调;免疫荧光结果显示,PFN1、WASP、α-actinin在imDCs吞噬抗原过程中发生转位;逐步回归和主成分分析结果显示PFN1的成分系数最大。结论PFN1可能是imDCs吞噬抗原过程中的关键MCBPs,这对于深入理解imDCs细胞骨架结构变化与免疫学功能之间的关系具有重要意义。

关键词：未成熟树突状细胞吞噬微丝骨架微丝骨架结合蛋白系统生物学

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重楼中一株产纤维素酶内生真菌的分离及鉴定

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生物技术通报 2022年第2期38卷 95-104页

作者：张功友王一涵郭敏张婷婷王兵刘红美贵州医科大学医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州省高校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌。采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利... 详细信息

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌。采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利用平板法检测该株菌产其他胞外水解酶的活性。从3个来源的重楼中分离出41株内生真菌,通过平板检测发现AS-5、AS-7、AS-9和AS-18菌株能产生纤维素酶,其中AS-9菌株活性最强;通过形态学观察和ITS、LSU序列分析将AS-9菌株鉴定为Setophoma terrestris;该菌在pH值为7.0和温度为28℃时表现出最大纤维素酶活性,紫外线照射对产纤维素酶活性无明显作用;检测发现AS-9菌株同时具有产酪蛋白酶、脂肪酶、天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶和脲酶活性。首次在重楼中发现内生真菌Setophoma terrestris,且具有较好的产纤维素酶能力,值得深入研究。

关键词：纤维素酶重楼分离鉴定 Setophoma terrestris 胞外水解酶

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瘤内注射OVA mRNA治疗小鼠结肠癌的研究

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免疫学杂志 2021年第12期37卷 1065-1070页

作者：谢颖张瑾宬刘雨周雪杨君仪刘鲜梅刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的研究瘤内注射OVA mRNA对小鼠CT26结肠癌的治疗效果,为以OVA为基础的肿瘤治疗提供新的思路。方法建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,将OVA mRNA直接注射至结肠癌荷瘤小鼠皮下肿瘤内,观察肿瘤生长和小鼠存活情况;实时荧光定量PCR检测小... 详细信息

目的研究瘤内注射OVA mRNA对小鼠CT26结肠癌的治疗效果,为以OVA为基础的肿瘤治疗提供新的思路。方法建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,将OVA mRNA直接注射至结肠癌荷瘤小鼠皮下肿瘤内,观察肿瘤生长和小鼠存活情况;实时荧光定量PCR检测小鼠肿瘤组织中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-6、TGF-β的表达;免疫荧光染色检测肿瘤组织中CD8^(+)T细胞的浸润情况;TUNEL试剂盒检测肿瘤组织的细胞凋亡。结果每只小鼠皮下接种5×10^(5)个CT26细胞成功建立了小鼠结肠癌皮下肿瘤模型。荷瘤小鼠瘤内注射OVA mRNA能显著抑制结肠癌皮下肿瘤生长和延长小鼠的存活时间,并且上调肿瘤组织内细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达以及增加肿瘤浸润CD8+T细胞的数量和促进肿瘤组织的细胞凋亡。结论瘤内注射OVA mRNA通过促进肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤免疫应答,以治疗小鼠CT26结肠癌。

关键词：结肠癌瘤内免疫治疗卵清蛋白 mRNA治疗

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MTT法检测奶牛乳房炎无乳链球菌活菌数的研究

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中国动物传染病学报 2021年第6期29卷 100-104页

作者：马林玉胡家银林煊陈鹤丹谢颖付文莉杨君仪刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心医药生物技术工程研究中心贵阳550025

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法... 详细信息

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法定量检测结果进行了比较。结果显示:MTT法测定无乳链球菌活菌数的最大吸收波长为570 nm,0.5 mg/mL MTT与100μL无乳链球菌菌液反应的最佳反应量为45μL,最适反应时间为3 h,溶解产物的DMSO最佳用量为125μL;无乳链球菌活菌数在1.5×10^(7)~4.73×10^(8 )CFU/mL范围内时,MTT法与平板菌落计数法定量结果具有较好的线性关系(R^(2)>0.99)。结果表明,本研究建立的MTT法可用于无乳链球菌活菌计数。

关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 MTT 活菌计数

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AGR2和ANO6在乳腺癌中的作用及其机制研究

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 414-414页

作者：唐福州张世超刘芹曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵阳550000 贵州医科大学基础医学院贵阳550000 贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550000 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

开发新的个体化免疫治疗标记物对改善乳腺癌免疫治疗效果来说具有重要意义,AGR2和ANO6作为潜在的力调控基因,能否作为乳腺癌个体化免疫治疗的生物标记物仍然不清楚。因此,本研究通过生物信息学分析方法和细胞实验分别探讨了AGR2和ANO6... 详细信息

开发新的个体化免疫治疗标记物对改善乳腺癌免疫治疗效果来说具有重要意义,AGR2和ANO6作为潜在的力调控基因,能否作为乳腺癌个体化免疫治疗的生物标记物仍然不清楚。因此,本研究通过生物信息学分析方法和细胞实验分别探讨了AGR2和ANO6在乳腺癌肿瘤微环境中的作用及其潜在机制。本研究发现,AGR2在泛癌中的表达与多种癌症的预后密切相关。在乳腺癌中AGR2启动子甲基化水平随其表达的增加而降低。AGR2低表达患者表现出免疫“热”和免疫抑制表型,其特征是肿瘤免疫细胞浸润丰度高,TGF-β和EMT途径富集评分增加,而AGR2高表达患者表现出相反的免疫特征,缺乏免疫细胞浸润,提示免疫“冷”表型。单细胞分析进一步揭示了AGR2在恶性细胞中通过协调细胞趋化因子信号和免疫浸润改变细胞与细胞间的相互作用。在两个免疫治疗队列中,AGR2和AGR2共表达基因的表达可以作为乳腺癌患者生存的预后指标。ANO6高表达与乳腺癌患者较差的预后密切相关。ANO6可促进乳腺癌中巨噬细胞的浸润。通过细胞实验研究发现他们的沉默可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭、抗凋亡能力以及体内成瘤能力。此外,AGR2可通过激活Akt和ERK通路促进乳腺癌进程。总之,本研究为基于AGR2及ANO6开发个体化免疫治疗策略提供了一定理论基础和实验依据。

关键词：恶性细胞启动子甲基化细胞实验肿瘤微环境 ERK通路免疫治疗生物标记物单细胞分析

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体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达

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安徽医科大学学报 2020年第8期55卷 1157-1160页

作者：陈鹤丹林煊谢颖陈尧杨君仪王赟张世超胡祖权曾柱刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物技术教研室贵阳550025 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550025

目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1... 详细信息

目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA(260)/A(280)为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGE-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。

关键词： MAGE-A3 体外转录mRNA 蛋白表达

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