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基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 252-257页

作者：刘江丽赵雪尚国富于欢彭晓燕王赟周静刘丽娜曾柱胡祖权贵州医科大学贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli... 详细信息

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli)菌株XL1-Blue并鉴定阳性转化子。IPTG诱导H2-AP融合蛋白基因的表达,利用Western blot检测其表达情况,AP显色反应和ELISA鉴定其活性。结果显示成功构建了pDAP2/S-H2原核表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中实现可溶性表达,并保留单链抗体和碱性磷酸酶的活性。因此,H2-AP融合蛋白通过原核表达后可用于发展伏马菌素的快速免疫检测方法。

关键词：伏马菌素单链抗体碱性磷酸酶融合表达

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ROS响应型抗氧化TiO_(2)纳米阵列对树突状细胞免疫学功能调控的研究

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 264-264页

作者：董美玲罗赵雅静吴仪陈红胡祖权陈晋王赟曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院贵州省普通高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

目的材料与组织界面处活性氧(reactive oxygen species,ROS)的过度累积所引起的慢性炎症是导致钛种植体失败的重要原因。为了清除过多的ROS,本研究在钛表面设计了一种具有ROS响应能力的抗氧化功能涂层,并探究其对树突状细胞(dendritic c... 详细信息

目的材料与组织界面处活性氧(reactive oxygen species,ROS)的过度累积所引起的慢性炎症是导致钛种植体失败的重要原因。为了清除过多的ROS,本研究在钛表面设计了一种具有ROS响应能力的抗氧化功能涂层,并探究其对树突状细胞(dendritic cells,DCs)免疫表型及功能的影响。方法采用电化学阳极氧化法在钛表面构建TiO_(2)纳米阵列,并将其植入大鼠胫骨侧软组织,评估植入体-组织界面的炎症细胞浸润和ROS水平。在TiO_(2)纳米管中负载乙酰半胱氨酸(NAcetylcysteine,NAC),通过层层自组装技术在钛表面覆盖明胶/壳聚糖(Gel/Chi)凝胶涂层并接枝NBC分子使其有ROS响应性,获得功能化涂层。构建细胞培养模型,研究钛表面功能化涂层对DCs免疫表型分子的表达和免疫功能的影响。结果钛植入会导致植入体-组织界面处炎性细胞浸润、DCs聚集及ROS水平升高。钛表面功能化涂层具有良好的ROS响应性,可使DCs免疫表型分子CD80、CD86、CD40与MHC-Ⅱ的表达降低,胞内ROS水平下降。在功能化涂层表面黏附后,DCs吞噬抗原的能力下降,且更倾向于促进naive CD4^(+)T细胞向调节性T细胞(Treg)分化。结论钛表面的功能化涂层具有ROS响应性,能够在氧化应激环境中释放NAC清除ROS,促进DCs成为耐受型DCs,从而提供免疫抑制的微环境,利于钛植入的预后。

关键词：炎症细胞浸润组织界面免疫表型树突状细胞乙酰半胱氨酸 CD86 免疫学功能层层自组装技术

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MTT法检测奶牛乳房炎无乳链球菌活菌数的研究

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中国动物传染病学报 2021年第6期29卷 100-104页

作者：马林玉胡家银林煊陈鹤丹谢颖付文莉杨君仪刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心医药生物技术工程研究中心贵阳550025

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法... 详细信息

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法定量检测结果进行了比较。结果显示:MTT法测定无乳链球菌活菌数的最大吸收波长为570 nm,0.5 mg/mL MTT与100μL无乳链球菌菌液反应的最佳反应量为45μL,最适反应时间为3 h,溶解产物的DMSO最佳用量为125μL;无乳链球菌活菌数在1.5×10^(7)~4.73×10^(8 )CFU/mL范围内时,MTT法与平板菌落计数法定量结果具有较好的线性关系(R^(2)>0.99)。结果表明,本研究建立的MTT法可用于无乳链球菌活菌计数。

关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 MTT 活菌计数

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利什曼原虫感染树突状细胞早期基因表达差异分析及关键基因筛选

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中国免疫学杂志 2021年第1期37卷 13-20页

作者：余鹏宋咏刚黄卓闵海黄江涛张世超陈晋胡祖权王赟(指导) 曾柱(指导) 贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵阳市妇幼保健院优生遗传科贵阳550003 贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

目的:分析利什曼原虫感染树突状细胞(DCs)早期的基因表达与信号通路变化,探究DCs感染后应答,寻找利什曼原虫感染后基于DCs的免疫治疗方法。方法:GEO数据库下载利什曼原虫感染前后DCs基因芯片数据,RStudio软件筛选差异表达基因(DEGs),STR... 详细信息

目的:分析利什曼原虫感染树突状细胞(DCs)早期的基因表达与信号通路变化,探究DCs感染后应答,寻找利什曼原虫感染后基于DCs的免疫治疗方法。方法:GEO数据库下载利什曼原虫感染前后DCs基因芯片数据,RStudio软件筛选差异表达基因(DEGs),STRING构建DEGs蛋白质相互作用网络(PPI),Cytoscape筛选差异表达蛋白质的核心模块,RStudio软件对DEGs进行GO和KEGG富集分析。结果:共筛选出DEGs 129个,其中IL12B与CXCL10差异最为显著,GO分析共富集23个过程,主要涉及病毒感染过程相关细胞反应及Ⅰ-IFN相关免疫反应;KEGG分析共富集3条信号通路,分别为甲型流感、麻疹及DNA复制信号通路。结论:利什曼原虫感染DCs前后Ⅰ-IFN信号通路和TLR4/NF-κB信号通路激活,影响IL12表达,提示Ⅰ-IFN/IL12信号通路与TLR4/NF-κB/IL12信号通路可作为利什曼原虫感染治疗的靶点,CXCL10也有望成为潜在的治疗靶点;利什曼原虫感染后,出现类似病毒感染现象,推测抗病毒免疫疗法可能在对抗利什曼原虫感染中具有一定疗效。

关键词：利什曼原虫树突状细胞生物信息学基因芯片

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家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin15的克隆表达及重组蛋白的体外活性分析

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环境昆虫学报 2021年第3期43卷 699-709页

作者：杜敏池骋张涛黄兰英杨慧国果吴建伟尚小丽贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性,本文对家蝇Serpin15基因进行了生物信息学分析和克隆表达,并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究。结果显示:家蝇Serpin15基因ORF框全长为1353 bp,编码450个氨基酸,理论... 详细信息

为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性,本文对家蝇Serpin15基因进行了生物信息学分析和克隆表达,并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究。结果显示:家蝇Serpin15基因ORF框全长为1353 bp,编码450个氨基酸,理论分子量为51076.63 Da,有信号肽和一个标志抑制活性的功能结构域RCL反应环;成功构建原核表达载体pET-28a(+)-Serpin15,经诱导表达和纯化获得家蝇重组Serpin15蛋白;重组蛋白酶特性研究发现,家蝇重组Serpin15蛋白对胰蛋白酶有极显著的抑制作用,此外,将重组Serpin15蛋白经20~60℃热处理15 min,或经pH 6~10过夜处理,或经50℃和pH 8处理后室温存放15~90 min,重组蛋白的胰蛋白酶抑制活性均仍大于70%。研究结果为家蝇Serpin15蛋白的免疫功能研究奠定了重要实验基础,也为有害昆虫杀虫剂的研发提供思路。

关键词：家蝇 Serpin15基因原核表达抑制活性酶稳定性

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渗透压对未成熟树突状细胞生物力学特性和免疫学功能的影响

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医用生物力学 2020年第2期35卷 202-207页

作者：石玉玲胡祖权闵海宋咏刚赵雪王赟邱炜吴宁曾柱贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞... 详细信息

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞电泳迁移率的改变,荧光偏振法检测细胞的膜流动性,实时荧光定量PCR检测免疫相关分子的表达变化,流式细胞仪检测细胞的抗原吞噬能力。结果高、低渗均会改变im DCs的F-actin结构,甚至诱导细胞凋亡。低渗组电泳率显著高于等渗组,高渗组电泳率低于等渗组(P<0.05)。荧光偏振结果显示,高、低渗均会显著降低细胞的膜流动性(P<0.05);q PCR结果发现,高、低渗会显著上调im DCs免疫表型分子CCR7、CD40、CD205、CD11a、CD11c的表达和抗原吞噬能力(P<0.05)。结论高、低渗应激会影响im DCs生物力学特性和免疫表型分子表达,研究结果对深入理解DCs的免疫调节功能具有重要意义。

关键词：树突状细胞渗透压生物力学特性免疫学功能

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树突状细胞分化过程中部分微丝结合蛋白表达差异

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基因组学与应用生物学 2020年第12期39卷 5844-5850页

作者：王佳邱炜叶远浓胡祖权王赟曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状... 详细信息

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)和成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)。利用蛋白免疫印迹法检测MOs、imDCs和m DCs中部分微丝结合蛋白的表达水平,然后联合逐步回归分析和主成分分析在这些微丝结合蛋白中筛选出起关键作用的蛋白。DCs分化过程中,Arp2/3复合体、caldesmon、gelsolin、WASP、WAVE 1、fascin、filamin A、α-actinin和Cap Z的表达水平均发生了不同程度的上调,formin的表达水平发生下调,profilin和VASP的表达水平没有明显变化。联合逐步回归分析和主成分分析发现,在这些微丝结合蛋白中,Cap Z可能在DCs分化过程中起关键作用。DCs分化过程中部分微丝结合蛋白的表达发生了明显变化,可能与其形态和免疫学功能的变化密切相关,这对深入理解DCs的生物学行为来说具有重要意义。

关键词：树突状细胞微丝结合蛋白分化逐步回归分析主成分分析

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家蝇幼虫对两种秸秆的消化及利用研究

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环境昆虫学报 2021年第2期43卷 436-444页

作者：黄兰英胡红元池骋宋儒胜陈霞张昌容尚小丽吴建伟贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025 三峡旅游职业技术学院湖北宜昌443000 贵州省农业科学院植物保护研究所贵阳550006

本文旨在探明家蝇Musca domestic幼虫对高粱秸秆和小麦秸秆营养成分利用和木质纤维素的降解情况,以及不同配比秸秆饲料对家蝇生物学指标的影响,为今后产业化利用家蝇来生物降解秸秆类有机废弃物奠定理论基础。本研究采用70%高粱秸秆粉、... 详细信息

本文旨在探明家蝇Musca domestic幼虫对高粱秸秆和小麦秸秆营养成分利用和木质纤维素的降解情况,以及不同配比秸秆饲料对家蝇生物学指标的影响,为今后产业化利用家蝇来生物降解秸秆类有机废弃物奠定理论基础。本研究采用70%高粱秸秆粉、70%麦秸秆粉和纯麦麸作为饲料,每种饲料各设置对照组、发酵组和家蝇幼虫取食组3种处理,检测并分析3种饲料各处理组中一般营养成分和木质纤维素的含量及变化;同时采用7种配比饲料喂养家蝇,观察各组家蝇不同发育阶段的体长、体重、存活率和发育历期等。结果表明:(1)3种饲料的各处理组中,一般营养成分和木质纤维素的含量均呈现:对照组>发酵组>家蝇取食组的趋势,此外除高粱秸秆组粗蛋白外,其余各组成份均差异显著(P<0.05);(2)小麦秸秆的木质纤维素含量>高粱秸秆>麦麸,且各组间均差异显著(P<0.05);(3)在相同秸秆配比条件下,高粱秸秆饲喂的家蝇其各虫态体长、体重、总存活率和发育历期均要优于麦秸秆喂养,且总存活率和发育历期与麦麸喂养相比差异不显著(P>0.05);(4)纯高粱秸秆喂养下家蝇仍能保持正常的生长发育,而在90%小麦秸秆喂养下,家蝇则无法存活。综上所述,家蝇适合作为生物转化器用于秸秆、尤其是高粱秸秆的降解,且降解效果优于单纯的微生物发酵降解,研究结果为今后规模化利用家蝇降解秸秆类有机废弃物提供了理论依据和科学基础。

关键词：家蝇秸秆生物降解木质纤维素生长发育

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体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达

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安徽医科大学学报 2020年第8期55卷 1157-1160页

作者：陈鹤丹林煊谢颖陈尧杨君仪王赟张世超胡祖权曾柱刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物技术教研室贵阳550025 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550025

目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1... 详细信息

目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA(260)/A(280)为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGE-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。

关键词： MAGE-A3 体外转录mRNA 蛋白表达

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前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测

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安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1968-1971页

作者：尚国富刘江丽于欢唐开义曾柱胡祖权王赟贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025

扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA... 详细信息

扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA检测蛋白的活性。结果显示构建的原核表达体系成功实现TrxA-PSCA和PaFv-AP融合蛋白的可溶性表达,而且PaFv-AP具有与PSCA抗原结合的抗体活性以及AP活性。

关键词：前列腺干细胞抗原单链抗体碱性磷酸酶原核表达免疫学检测

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