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基因组学与应用生物学 2024年第3期43卷 504-521页

作者：熊华毅余鹏刘鲜梅宋咏刚胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025

本研究旨在研究树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cell and cytokine-induced killer cell,DC-CIK)免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的临床疗效。本研究从PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、WanFang Data、SinoMed和VIP等数据库中,收集2000年1月至2023年2月发表的符合要求的随机对照研究,应用RevMan 5.4.1软件进行Meta分析。共纳入15篇文献,894例患者,包括686例骨髓瘤患者和208例白血病患者,其中DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗组共451例,设置为联合治疗组,而单纯化疗组共443例,设置为化疗(对照)组。分析结果显示,联合治疗组在临床疗效、预后情况、生活质量及各项免疫指标(T淋巴细胞亚群分布和细胞因子分泌水平)等方面均优于化疗组,且不会给患者带来特异性的副作用。研究结果表明,DC-CIK免疫治疗联合化疗能够改善恶性血液肿瘤患者的免疫功能,增强机体的抗肿瘤能力,从而显著提高临床治疗的效果。

关键词：树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞联合治疗血液恶性肿瘤 Meta分析

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失巢凋亡相关基因对子宫内膜癌患者预后状况的预测价值

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基因组学与应用生物学 2024年第4期43卷 697-707页

作者：刘凯凤韦现鹏欧阳燕胡祖权岳萍曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

子宫内膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma,UCEC)是最常见的女性生殖系统肿瘤,肿瘤发生远端转移的患者预后极差。失巢凋亡(anoikis)是一种特殊的程序性细胞死亡形式,在肿瘤的侵袭和转移中起着关键作用,分析失巢凋亡相关基因与U... 详细信息

子宫内膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma,UCEC)是最常见的女性生殖系统肿瘤,肿瘤发生远端转移的患者预后极差。失巢凋亡(anoikis)是一种特殊的程序性细胞死亡形式,在肿瘤的侵袭和转移中起着关键作用,分析失巢凋亡相关基因与UCEC患者预后之间的关系将为临床治疗提供指导。本研究采用非监督一致性聚类算法对数据集进行分组,分析患者的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)与临床特征的差异。同时,筛选预后相关的失巢凋亡基因,构建风险评分模型,评估UCEC患者的风险评分与临床特征、TME和药物治疗反应之间的关系。在分析失巢凋亡相关基因表达差异的基础上确定两个明确的聚类(A簇和B簇),与A簇UCEC患者相比,B簇UCEC患者的总生存期较短、免疫浸润水平较低。构建的风险评分模型可量化失巢凋亡相关基因的调控模式,高风险评分组表现为预后不良且免疫细胞浸润水平低,而低风险评分组则相反。药物敏感性分析结果表明,高风险评分的人群可能从靶向有丝分裂和DNA修复通路的药物中获得更佳疗效。本研究揭示了失巢凋亡相关基因与临床特征、TME和药物治疗反应之间的潜在关系,并阐明了其在UCEC治疗中的价值。

关键词：子宫内膜癌肿瘤微环境失巢凋亡风险评分模型预后价值

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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达

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中国动物传染病学报 2023年

作者：周雪高磊张瑾宬袁思凌操蓉刘丽娜贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）刺突蛋白受体结合结构域（RBD）的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞2... 详细信息

为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）刺突蛋白受体结合结构域（RBD）的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞293T后，Western blot检测重组蛋白RBD的表达；以表达RBD的重组质粒为模板，PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板，之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA，添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化，纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中，利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示，编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白，体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译，表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应，具有免疫反应原性，为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 刺突蛋白受体结合结构域体外转录真核表达

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DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的Meta分析

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基因组学与应用生物学 2023年

作者：熊华毅余鹏刘鲜梅宋咏刚胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院)贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室

本研究旨在研究树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cell and cytokine-induced killer cell，DC-CIK）免疫治疗联合化疗治疗血液恶性肿瘤的临床疗效。本研究从PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、WanFang Data、SinoMed和VIP等数据库中，收集2000年1月至2023年2月发表的符合要求的随机对照研究，应用RevMan 5.4.1软件进行Meta分析。共纳入15篇文献，894例患者，包括686例骨髓瘤患者和208例白血病患者，其中DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗组共451例，设置为联合治疗组，而单纯化疗组共443例，设置为对照组。分析结果显示，联合治疗组在临床疗效、预后情况、生活质量及各项免疫指标（T淋巴细胞亚群分布和细胞因子分泌水平）等方面均优于单纯化疗治疗组，且不会给患者带来特异性的副作用。研究结果表明，DC-CIK免疫治疗联合化疗能够改善恶性血液肿瘤患者的免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力，从而显著提高临床治疗的效率。

关键词：树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞联合治疗血液恶性肿瘤 Meta分析

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微丝骨架结合蛋白在未成熟树突状细胞抗原吞噬过程中的差异表达分析

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医用生物力学 2024年第5期39卷 814-822页

作者：李道红罗代琴曾宪琳张帅徐朴吴翠芳王赟叶远浓胡祖权龙金华曾柱贵州医科大学基础医学院、贵州省细胞免疫治疗工程技术中心/贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院、贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室)贵阳550025 贵州医科大学附属医院介入科贵阳550004 贵州医科大学大健康学院医学信息学教研室生物信息学与生物医学大数据智能挖掘实验室贵阳550025 贵州医科大学附属肿瘤医院头颈肿瘤科贵阳550000

目的探讨未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)发挥抗原吞噬功能时关键微丝骨架结合蛋白(microfilament cytoskeleton-binding proteins,MCBPs)的差异表达情况。方法从健康人外周血中分离单核细胞(monocytes,MOs),经重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)、重组人白介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导培养6天获得imDCs;将imDCs与低分子量(40 kDa)和高分子量(150 kDa)的右旋糖酐分别孵育1、3和6 h,流式细胞仪检测imDCs吞噬右旋糖酐的比率及免疫表型分子的表达;免疫荧光检测丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)及PFN1、WASP、α-actinin在细胞中的定位情况;qPCR和Western blotting分别检测MCBPs在mRNA和蛋白水平的表达差异;最后,基于系统生物学算法中的逐步回归和主成分分析方法筛选成分系数最大的MCBPs。结果在吞噬抗原的过程中,imDCs对低分子量抗原的吞噬速度更快,吞噬时长可维持约3 h,其细胞表型和细胞形态逐渐向mDCs分化,且F-actin发生明显的重塑,PFN1、CDM、WASP、CAPZB、Filamin A、α-actinin等MCBPs的表达下调,WAVE1、Arp2/3复合体、Fascin的表达上调;信号蛋白Rac1的mRNA表达上调,CDC42和RhoA的mRNA表达下调;免疫荧光结果显示,PFN1、WASP、α-actinin在imDCs吞噬抗原过程中发生转位;逐步回归和主成分分析结果显示PFN1的成分系数最大。结论PFN1可能是imDCs吞噬抗原过程中的关键MCBPs,这对于深入理解imDCs细胞骨架结构变化与免疫学功能之间的关系具有重要意义。

关键词：未成熟树突状细胞吞噬微丝骨架微丝骨架结合蛋白系统生物学

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基于抗体融合荧光蛋白的镰刀菌免疫检测技术

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基因组学与应用生物学 2024年第11期43卷 1850-1858页

作者：闫瑜雪尚国富陈绍美喻艳琴胡祖权艾民彭晓燕贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550000 贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

镰刀菌(Fusarium)是一类重要的植物病原菌和临床上常见的致病真菌,为实现镰刀菌的快速灵敏检测,本研究通过基因工程操作技术将编码抗镰刀菌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)FvSG7的基因与mNenoGreen(mNG)绿色荧光蛋白和Na... 详细信息

镰刀菌(Fusarium)是一类重要的植物病原菌和临床上常见的致病真菌,为实现镰刀菌的快速灵敏检测,本研究通过基因工程操作技术将编码抗镰刀菌单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)FvSG7的基因与mNenoGreen(mNG)绿色荧光蛋白和NanoLuc(NLuc)荧光素酶基因构建融合表达载体,优化原核表达条件后进行大量表达纯化;利用SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白FvSG7-mNG-NL的表达情况;利用免疫荧光分析融合蛋白与镰刀菌菌丝的结合特性;利用酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析融合蛋白与镰刀菌抗原的结合能力。结果显示,融合荧光蛋白FvSG7-mNG-NL的原核表达载体构建成功,并实现可溶性高效表达。FvSG7-mNG-NL保留单链抗体、荧光素酶以及荧光蛋白的活性,可通过生物发光共振能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)增强发光成像。本研究为发展镰刀菌的灵敏快速免疫检测技术奠定了实验基础。

关键词：镰刀菌单链抗体荧光素酶融合蛋白免疫学检测

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结直肠癌血液外泌体ceRNA网络的构建及生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2022年第3期41卷 682-690页

作者：闵海熊宇余鹏王赟张世超黄江涛刘鲜梅胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025

为构建结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血液外泌体circRNA/lncRNA-miRNA-mRNA的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)网络,预测差异表达基因(differentially expressed genes,DEGenes)之间的潜在调控机制,我们从exoRBase数据库下载健康人(Homo sapiens)及CRC患者血液外泌体中信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)的基因数据,并进行差异筛选,共发现120个差异mRNAs,52个差异lncRNAs和81个差异circRNAs。利用多个数据库预测与lncRNA、circRNA和mRNA结合的miRNA,进而成功构建lncRNA/circRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。基因本体(gene ontology,GO)分析表明,ceRNA网络中的DEGenes主要涉及细胞高尔基体的生物学调控及结构维持、细胞黏附连接及酶的催化活性。京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of gene and genomes,KEGG)分析共富集到14条信号通路,主要涉及志贺氏菌(Shigella)病和MAPK信号通路。因此,本研究成功构建了CRC患者血液外泌体ceRNA网络,为探究CRC的发病机制奠定了基础。

关键词：结直肠癌生物信息学 ceRNA 外泌体

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非靶向脂质组学分析伏马菌素B1对未成熟树突状细胞脂质代谢的影响

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基因组学与应用生物学 2023年第3期42卷 327-336页

作者：唐开义于欢喻艳琴欧沙王赟曾柱胡祖权贵州医科大学基础医学院贵州省高等学校感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025

伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)是一种具有免疫抑制作用的真菌毒素。本研究利用FB1处理未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs),通过非靶向脂质组学分析FB1对imDCs脂质代谢的影响。运用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱... 详细信息

伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)是一种具有免疫抑制作用的真菌毒素。本研究利用FB1处理未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs),通过非靶向脂质组学分析FB1对imDCs脂质代谢的影响。运用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术采集质谱数据,通过主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘法判别分析(partial least-squares discrimination analysis,PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)进行多维统计分析,比较FB1处理组和对照组之间脂质代谢谱的差异,并以OPLS-DA模型的变量权重值(variable importance for the projection,VIP)>1和P<0.05为标准筛选差异脂质分子。脂质组学分析结果显示,从imDCs中共检测到36个脂质亚类,1845个脂质分子。从FB1处理的imDCs中筛选出30个显著性差异脂质分子,其中神经酰胺(ceramide,Cer)、磷酸神经酰胺(ceramide phosphate,CerP)、单半乳糖甘油二酯(monogalactosyldiacylglycerol,MGDG)、磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、鞘氨醇(sphingosine,So)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)和鞘磷脂(sphingomyelin,SM)等亚类的含量显著下降(VIP>1,P<0.05),而甘油二酯(diacylglycerol,DG)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)的含量显著升高(VIP>1,P<0.05)。研究结果说明FB1可能通过干扰imDCs的正常脂质代谢来发挥其免疫抑制作用。

关键词：伏马菌素B1 树突状细胞脂质组学脂质代谢物鞘脂代谢

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基于荧光图像的水凝胶几何网格重建及其力学性能有限元的模拟

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贵州医科大学学报 2024年第11期49卷 1577-1586页

作者：吴少东朱思勉曾柱贵州医科大学生物与工程学院&贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室&贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州贵阳550025 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室&贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨通过荧光图像重建水凝胶的几何网络及其用于有限元模拟的可行性。方法取冷水鱼皮的明胶水溶液,分别与28.2、56.5、113.0、141.0 mg戊二醛交联16 h,制备明胶水凝胶;采用动态热机械分析技术测量各组明胶水凝胶的力学性能,并计算... 详细信息

目的探讨通过荧光图像重建水凝胶的几何网络及其用于有限元模拟的可行性。方法取冷水鱼皮的明胶水溶液,分别与28.2、56.5、113.0、141.0 mg戊二醛交联16 h,制备明胶水凝胶;采用动态热机械分析技术测量各组明胶水凝胶的力学性能,并计算压缩模量(Emeas),用激光共聚焦显微镜和图像分割程序分析观测各组明胶水凝胶的孔隙结构;采用图像分割及行进立方体算法进行各组水凝胶支架几何模型的三维重建,对水凝胶荧光图像进行预处理、分割、重建及优化;采用ANSYS Workbench计算有限元,使用静态结构分析模拟各组水凝胶的压缩试验,计算模拟得到模型的压缩模量(Esim)以及水凝胶结构的负载情况。结果动态热机械分析获得水凝胶的应力应变数据,计算得到Emeas分别为(457.0±30.8)、(942.7±260.5)、(2053.3±115.0)及(2133.3±125.8)Pa;观测到经戊二醛交联的水凝胶孔隙发生变化,且戊二醛浓度越高,水凝胶的孔径越小、孔数量越多;三维重建程序生成了可用于有限元体网格划分的水凝胶几何模型;有限元模拟计算得到的Esim与Emeas一致,分别为447.2、829.9、1987.7及2181.6 Pa;有限元模拟结果显示,水凝胶结构承担的载荷增加,与基体相比,纤维网络承担主要载荷且载荷增加量更大;当基体弹性模量增加,纤维网络与基体界面处的应力分布的不均匀性降低,与纤维网络相比,基体共享负载增加。结论利用三维重建方法构建了水凝胶几何模型,模拟的有限元模型可反映明胶水凝胶的力学性能。

关键词：有限元分析水凝胶生物力学现象图像分割三维重建力学分析

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黄曲霉毒素B1对肝癌细胞HepG2生物物理学特性及细胞骨架结构的影响

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安徽医科大学学报 2023年第1期58卷 10-14页

作者：于欢喻艳琴钱天宝刘清玉王赟曾柱胡祖权贵州医科大学生物与工程学院贵州省高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室/贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550025

目的研究黄曲霉毒素B1(AFB1)对人肝癌细胞(HCCs)生物物理学特性及细胞骨架结构的影响。方法利用0、0.01、0.1、1、5、10μmol/L AFB1分别处理HepG2细胞24 h和48 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。在此基础上,分析10μmol/L AFB1对细胞渗... 详细信息

目的研究黄曲霉毒素B1(AFB1)对人肝癌细胞(HCCs)生物物理学特性及细胞骨架结构的影响。方法利用0、0.01、0.1、1、5、10μmol/L AFB1分别处理HepG2细胞24 h和48 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。在此基础上,分析10μmol/L AFB1对细胞渗透脆性、膜流动性、细胞电泳率和F-actin骨架结构的影响。随后,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR检测12种主要细胞骨架结合蛋白的转录水平变化。结果AFB1处理48 h时HepG2细胞的活力呈剂量依赖性增强。10μmol/L AFB1处理能够增强HepG2细胞抗低渗能力及细胞电泳率,细胞骨架F-actin含量明显增加,主要细胞骨架结合蛋白的mRNA表达发生改变。结论AFB1能够影响HepG2细胞的生物物理学特性、细胞骨架结构及其结合蛋白,这可能与其毒性作用直接相关。

关键词：黄曲霉毒素肝癌细胞生物物理学特性细胞骨架

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