检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2022年第3期57卷 429-432,437页

作者：刘江丽李盈盈王佳雯许喻鈞张艳黄江涛胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室/生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550025

目的制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性。方法利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白,通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细... 详细信息

目的制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性。方法利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白,通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株,并鉴定其亚型,腹水法制备mAbs,Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性。结果获得5株能稳定分泌抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为N1~5。通过腹水法制备获得5个mAbs,亚型鉴定结果显示1个为IgG2a*κ型、4个为IgG1*κ型,其效价均达到2×10^(4)以上。Western blot结果表明5个mAbs都能与重组SARS-CoV-2 N蛋白结合。结论通过杂交瘤技术成功制备了5个能特异性识别重组SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs,为开发免疫诊断试剂奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 核衣壳蛋白单克隆抗体免疫学检测

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流体剪切力——树突状细胞免疫反应的负调节因子

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 682-682页

作者：余鹏刘鲜梅曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

基于树突状细胞(dendritic cells,DCs)的肿瘤疫苗免疫疗法被认为是克服癌症最有前景的免疫疗法之一,其临床效果与过继回输途径有关。临床研究发现,DCs疫苗静脉回输后的疗效低于肿瘤原位注射和引流淋巴结注射,其潜在机制尚不清楚。从生... 详细信息

基于树突状细胞(dendritic cells,DCs)的肿瘤疫苗免疫疗法被认为是克服癌症最有前景的免疫疗法之一,其临床效果与过继回输途径有关。临床研究发现,DCs疫苗静脉回输后的疗效低于肿瘤原位注射和引流淋巴结注射,其潜在机制尚不清楚。从生物力学的角度看,DCs疫苗静脉回输前后力学环境的转变(由静息状态向流体剪切状态转变)可能是潜在的影响因素。在本研究中,利用锥版剪切系统施加流体剪切力(fluid shear stress,FSS)处理,分析FSS对DCs力学表型和免疫表型的影响,并探究其潜在力-化耦合分子机制。结果发现,FSS显著重塑了DCs的力学表型和免疫表型,降低了其抗原吞噬作用和迁移能力,并抑制其抗原提呈,表现为抑制T细胞增殖、诱导T细胞凋亡的状态。体内实验证实,FSS处理后的DCs能在体内介导抑炎作用,使得炎性肠病模型小鼠的症状得到显著改善。机制上,DCs通过G蛋白偶联受体(GPCRs)-Src-Rho A/ROCK/LIMK/Cofilin信号通路感知FSS刺激,并抑制了转录因子NFκB的表达。综上认为,FSS可能是DCs免疫反应的负调节因子,在维持免疫稳态中发挥重要作用,这对于进一步理解DCs的免疫调节功能和提高基于DCs免疫治疗的临床疗效具有重要意义。

关键词：负调节因子静脉回输炎性肠病流体剪切力免疫疗法树突状细胞免疫反应免疫调节功能

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不同物理形貌对树突状细胞伪足小体及细胞骨架分布的影响

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 297-297页

作者：龙世棋吴翠芳曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州省感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550000

目的在生物体内,细胞无时无刻与细胞外基质发生接触,细胞外基质的物理形貌可通过机械传导影响细胞的生物学功能。作为重要的固有免疫细胞,树突状细胞可在体内不停巡逻、识别抗原并加工提呈给T细胞,进而启动适应性免疫应答。目前,尚不清... 详细信息

目的在生物体内,细胞无时无刻与细胞外基质发生接触,细胞外基质的物理形貌可通过机械传导影响细胞的生物学功能。作为重要的固有免疫细胞,树突状细胞可在体内不停巡逻、识别抗原并加工提呈给T细胞,进而启动适应性免疫应答。目前,尚不清楚树突状细胞巡逻过程中面对不同的物理形貌会有怎样的感知及反应。本研究通过构建平面基底和圆柱型凹槽基底探讨不同物理形貌对树突状细胞伪足小体形成及细胞骨架分布的影响。方法通过光刻和微加工技术制备圆柱型凹槽微结构;活细胞观测细胞自由迁移情况;免疫荧光技术检测细胞骨架相关蛋白F-actin、tubulin和伪足小体相关蛋白vinculin的表达及空间定位情况。结果活细胞观测显示,相较于平面基底,树突状细胞在圆柱形凹槽基底中表现出绕圈迁移的特点。免疫荧光结果显示,在平面基底中树突状细胞F-actin主要位于细胞周围,tubulin主要位于细胞内部,vinculin主要位于细胞与平面基底接触部位。而在圆柱形凹槽基底中,树突状细胞F-actin、vinculin在凹槽侧壁有更为明显的聚集,tubulin则在细胞内部均匀分布。结论不同的物理形貌可以影响树突状细胞微丝及伪足小体的分布。目前的研究为进一步探讨不同的物理形貌对树突状细胞迁移及吞噬功能的影响奠定基础。

关键词：树突状细胞细胞外基质细胞骨架免疫荧光技术空间定位微加工技术圆柱形吞噬功能

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前列腺癌干细胞的分离及鉴定

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基因组学与应用生物学 2021年第3期40卷 1361-1366页

作者：周静韦坤丽胡文慧何水先彭仕雄沈文秀贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所... 详细信息

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所分离细胞的增殖能力,结果显示前列腺癌DU145细胞在普通培养基中呈长梭形贴壁生长,无血清培养基培养72 h形成大量细胞球聚集体,细胞3D培养分离的细胞球的透明度和形态比2D培养分离的细胞好,3D培养分离细胞的增殖能力和划痕修复能力明显强于2D培养分离细胞。因此,细胞3D培养技术联合无血清培养基有利于前列腺癌干细胞的分离。

关键词：前列腺癌肿瘤干细胞无血清培养 2D培养 3D培养

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AGR2和ANO6在乳腺癌中的作用及其机制研究

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 414-414页

作者：唐福州张世超刘芹曾柱贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵阳550000 贵州医科大学基础医学院贵阳550000 贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550000 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

开发新的个体化免疫治疗标记物对改善乳腺癌免疫治疗效果来说具有重要意义,AGR2和ANO6作为潜在的力调控基因,能否作为乳腺癌个体化免疫治疗的生物标记物仍然不清楚。因此,本研究通过生物信息学分析方法和细胞实验分别探讨了AGR2和ANO6... 详细信息

开发新的个体化免疫治疗标记物对改善乳腺癌免疫治疗效果来说具有重要意义,AGR2和ANO6作为潜在的力调控基因,能否作为乳腺癌个体化免疫治疗的生物标记物仍然不清楚。因此,本研究通过生物信息学分析方法和细胞实验分别探讨了AGR2和ANO6在乳腺癌肿瘤微环境中的作用及其潜在机制。本研究发现,AGR2在泛癌中的表达与多种癌症的预后密切相关。在乳腺癌中AGR2启动子甲基化水平随其表达的增加而降低。AGR2低表达患者表现出免疫“热”和免疫抑制表型,其特征是肿瘤免疫细胞浸润丰度高,TGF-β和EMT途径富集评分增加,而AGR2高表达患者表现出相反的免疫特征,缺乏免疫细胞浸润,提示免疫“冷”表型。单细胞分析进一步揭示了AGR2在恶性细胞中通过协调细胞趋化因子信号和免疫浸润改变细胞与细胞间的相互作用。在两个免疫治疗队列中,AGR2和AGR2共表达基因的表达可以作为乳腺癌患者生存的预后指标。ANO6高表达与乳腺癌患者较差的预后密切相关。ANO6可促进乳腺癌中巨噬细胞的浸润。通过细胞实验研究发现他们的沉默可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭、抗凋亡能力以及体内成瘤能力。此外,AGR2可通过激活Akt和ERK通路促进乳腺癌进程。总之,本研究为基于AGR2及ANO6开发个体化免疫治疗策略提供了一定理论基础和实验依据。

关键词：恶性细胞启动子甲基化细胞实验肿瘤微环境 ERK通路免疫治疗生物标记物单细胞分析

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瘤内注射OVA mRNA治疗小鼠结肠癌的研究

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免疫学杂志 2021年第12期37卷 1065-1070页

作者：谢颖张瑾宬刘雨周雪杨君仪刘鲜梅刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/医药生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的研究瘤内注射OVA mRNA对小鼠CT26结肠癌的治疗效果,为以OVA为基础的肿瘤治疗提供新的思路。方法建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,将OVA mRNA直接注射至结肠癌荷瘤小鼠皮下肿瘤内,观察肿瘤生长和小鼠存活情况;实时荧光定量PCR检测小... 详细信息

目的研究瘤内注射OVA mRNA对小鼠CT26结肠癌的治疗效果,为以OVA为基础的肿瘤治疗提供新的思路。方法建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,将OVA mRNA直接注射至结肠癌荷瘤小鼠皮下肿瘤内,观察肿瘤生长和小鼠存活情况;实时荧光定量PCR检测小鼠肿瘤组织中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-6、TGF-β的表达;免疫荧光染色检测肿瘤组织中CD8^(+)T细胞的浸润情况;TUNEL试剂盒检测肿瘤组织的细胞凋亡。结果每只小鼠皮下接种5×10^(5)个CT26细胞成功建立了小鼠结肠癌皮下肿瘤模型。荷瘤小鼠瘤内注射OVA mRNA能显著抑制结肠癌皮下肿瘤生长和延长小鼠的存活时间,并且上调肿瘤组织内细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达以及增加肿瘤浸润CD8+T细胞的数量和促进肿瘤组织的细胞凋亡。结论瘤内注射OVA mRNA通过促进肿瘤细胞凋亡和抗肿瘤免疫应答,以治疗小鼠CT26结肠癌。

关键词：结肠癌瘤内免疫治疗卵清蛋白 mRNA治疗

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单链抗体融合蛋白FvCA4-218-AP原核表达条件优化及活性检测

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基因组学与应用生物学 2021年第9期40卷 3277-3282页

作者：赵雪李淑琴李世美于欢尚国富彭晓燕黄江涛曾柱胡祖权贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025

为实现抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP在大肠杆菌中可溶性高效表达,本研究在不同诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件下培养重组大肠杆菌XL1-Blue[pDAP2/S-(Fv CA4-218-AP)],收集诱导培养的菌液,经过超声波破碎处理... 详细信息

为实现抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP在大肠杆菌中可溶性高效表达,本研究在不同诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件下培养重组大肠杆菌XL1-Blue[pDAP2/S-(Fv CA4-218-AP)],收集诱导培养的菌液,经过超声波破碎处理后离心收集总蛋白,并通过碱性磷酸酶直接显色法、Western blot和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量、可溶性和活性等表达情况。结果显示在重组大肠杆菌培养至OD600为0.5时加入0.5 mmol/L IPTG,在25℃诱导表达6~8 h可获得较高表达量和活性的可溶性融合蛋白。因此,通过优化原核表达的诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件,可以显著提高抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP的表达水平,为发展快速免疫检测方法提供了实验基础。

关键词：镰刀菌融合蛋白碱性磷酶酶免疫检测原核表达条件

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不同射线剂量对鼻咽癌细胞蛋白表达谱的影响

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基因组学与应用生物学 2021年第5期40卷 2397-2404页

作者：崔忠慧曾宪琳胡祖权张世超王赟龙金华曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 附属肿瘤医院头颈肿瘤科贵阳550025

探讨不同的射线剂量对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞蛋白表达谱的影响,以期从放射免疫学的角度深入理解NPC的临床治疗模式。利用固相p H梯度双向凝胶电泳研究5-8F NPC经不同射线剂量照射不同时间后的蛋白质表达谱,MALDI-TOF... 详细信息

探讨不同的射线剂量对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞蛋白表达谱的影响,以期从放射免疫学的角度深入理解NPC的临床治疗模式。利用固相p H梯度双向凝胶电泳研究5-8F NPC经不同射线剂量照射不同时间后的蛋白质表达谱,MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达蛋白并用RT-qPCR和Western blot进行验证。发现不同射线对NPC细胞的蛋白表达谱有影响,并鉴定出24个差异表达的蛋白质,涉及抗原处理、抗原提呈、蛋白酶体泛素化和内质网应激等过程,其中热休克蛋白70A1A,蛋白酶体α、β等的表达水平呈射线剂量依赖性,可能是NPC细胞的肿瘤相关抗原。

关键词：鼻咽癌射线照射蛋白表达谱肿瘤抗原

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抗伏马菌素单链抗体与碱性磷酸酶的融合表达及活性鉴定

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基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 252-257页

作者：刘江丽赵雪尚国富于欢彭晓燕王赟周静刘丽娜曾柱胡祖权贵州医科大学贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli... 详细信息

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli)菌株XL1-Blue并鉴定阳性转化子。IPTG诱导H2-AP融合蛋白基因的表达,利用Western blot检测其表达情况,AP显色反应和ELISA鉴定其活性。结果显示成功构建了pDAP2/S-H2原核表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中实现可溶性表达,并保留单链抗体和碱性磷酸酶的活性。因此,H2-AP融合蛋白通过原核表达后可用于发展伏马菌素的快速免疫检测方法。

关键词：伏马菌素单链抗体碱性磷酸酶融合表达

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ROS响应型抗氧化TiO_(2)纳米阵列对树突状细胞免疫学功能调控的研究

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 264-264页

作者：董美玲罗赵雅静吴仪陈红胡祖权陈晋王赟曾柱贵州医科大学基础医学院贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院贵州省普通高等学校免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550000

目的材料与组织界面处活性氧(reactive oxygen species,ROS)的过度累积所引起的慢性炎症是导致钛种植体失败的重要原因。为了清除过多的ROS,本研究在钛表面设计了一种具有ROS响应能力的抗氧化功能涂层,并探究其对树突状细胞(dendritic c... 详细信息

目的材料与组织界面处活性氧(reactive oxygen species,ROS)的过度累积所引起的慢性炎症是导致钛种植体失败的重要原因。为了清除过多的ROS,本研究在钛表面设计了一种具有ROS响应能力的抗氧化功能涂层,并探究其对树突状细胞(dendritic cells,DCs)免疫表型及功能的影响。方法采用电化学阳极氧化法在钛表面构建TiO_(2)纳米阵列,并将其植入大鼠胫骨侧软组织,评估植入体-组织界面的炎症细胞浸润和ROS水平。在TiO_(2)纳米管中负载乙酰半胱氨酸(NAcetylcysteine,NAC),通过层层自组装技术在钛表面覆盖明胶/壳聚糖(Gel/Chi)凝胶涂层并接枝NBC分子使其有ROS响应性,获得功能化涂层。构建细胞培养模型,研究钛表面功能化涂层对DCs免疫表型分子的表达和免疫功能的影响。结果钛植入会导致植入体-组织界面处炎性细胞浸润、DCs聚集及ROS水平升高。钛表面功能化涂层具有良好的ROS响应性,可使DCs免疫表型分子CD80、CD86、CD40与MHC-Ⅱ的表达降低,胞内ROS水平下降。在功能化涂层表面黏附后,DCs吞噬抗原的能力下降,且更倾向于促进naive CD4^(+)T细胞向调节性T细胞(Treg)分化。结论钛表面的功能化涂层具有ROS响应性,能够在氧化应激环境中释放NAC清除ROS,促进DCs成为耐受型DCs,从而提供免疫抑制的微环境,利于钛植入的预后。

关键词：炎症细胞浸润组织界面免疫表型树突状细胞乙酰半胱氨酸 CD86 免疫学功能层层自组装技术

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