探讨七叶亭(esculetin,Esc)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。采用TNBC细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468为实验模型,通过MTT法、细胞形态学观察、平板克隆形成法评估Esc对TNB...
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探讨七叶亭(esculetin,Esc)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。采用TNBC细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468为实验模型,通过MTT法、细胞形态学观察、平板克隆形成法评估Esc对TNBC细胞增殖的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测Esc对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测七叶亭对细胞凋亡的影响;Western blot法检测Janus激酶-2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路蛋白(JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3)以及凋亡相关蛋白包括天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,Caspase-9)、Caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribosepolymerase,PARP)、Cleaved Caspase-9 、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP的表达。结果表明,与对照组(control,Con)相比,Esc能显著抑制TNBC细胞的增殖和转移(P<0.001);Western blot结果显示,与Con相比,Esc能使JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达显著下调,上调了Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP的蛋白表达(P<0.05);Hoechst染色和流式细胞术结果显示,与Con相比,Esc能显著诱导TNBC细胞发生凋亡,JAK2/STAT3抑制剂(WP1066)与Esc协同作用后,进一步增加了TNBC细胞凋亡(P<0.01)。综上,Esc可能通过抑制JAK2/STAT3通路,进而激活Caspase级联反应诱导TNBC细胞凋亡。
目的:采用UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap高分辨质谱(HRMS)技术建立全面、快速分析隔山消化学成分的方法,为隔山消的药效物质研究提供科学依据。方法:采用Hypersi 1 GOLD色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm),以0.1%甲酸水溶液(A...
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目的:采用UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap高分辨质谱(HRMS)技术建立全面、快速分析隔山消化学成分的方法,为隔山消的药效物质研究提供科学依据。方法:采用Hypersi 1 GOLD色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温40℃。在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据,扫描范围m/z 100~1 500 Da;喷雾电压3.5 kV(+),2.5 kV(-);鞘气流速35 arb;辅助气流速10 arb;毛细管温度320℃;辅助加热器温度350℃。依据HRMS提供的准分子离子峰及碎片离子的精确分子质量信息,结合对照品比对,相关文献报道及m/z Cloud和PUBchem数据库比对二级质谱进行鉴定。结果:从隔山消提取物中共分析出66个化合物,包括C21甾体类34个,有机酸类13个,苯乙酮类5个,香豆素类4个,生物碱类4个和其他类6个化合物,其中18个化合物为首次在隔山消中报道。结论:该方法可对隔山消化学成分进行快速、准确、全面的定性分析,为今后进一步阐明其药效物质基础和质量控制提供科学依据。
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