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细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

贵州医科大学学报 2022年第12期47卷 1390-1395页

作者：赵永龙郭玮钰龙昌兰陆定艳陈帅帅李勇军刘亭贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

关键词：细胞色素P450家族2亚家族E成员1 稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞蛋白免疫印迹法实时荧光定量PCR 转染

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人肠道菌群对荭草花有效组分的体外代谢研究

人肠道菌群对荭草花有效组分的体外代谢研究

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第十二届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会

作者：陈浩郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳 550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳 550004

本文建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-联质飞行时间串谱(UPLC-Q-TOF/MS)方法分析检测肠道菌群代谢产物,分析荭草花有效组分在人肠道菌群中的代谢特征.运用UPLC-Q-TOF/MS研究荭草花中有效组分(没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、... 详细信息

本文建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-联质飞行时间串谱(UPLC-Q-TOF/MS)方法分析检测肠道菌群代谢产物,分析荭草花有效组分在人肠道菌群中的代谢特征.运用UPLC-Q-TOF/MS研究荭草花中有效组分(没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、槲皮素-3-O-( 2″-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖醛酸苷、山柰酚-3-O-( 2″-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖醛酸苷、山奈素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮苷、山奈素-3-O-α-L-鼠李糖苷、N-P-香豆酰酪胺、N-反式-对羟基苯乙基阿魏酰胺、槲皮素、山奈酚)在厌氧条件下经人肠道菌液的孵育得到荭草花有效组分的代谢产物.

关键词：荭草花有效组分代谢肠道菌群 UPLC-Q-TOF/MS

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载阿霉素纳米粒温敏凝胶复合体系的体内缓释性能和抗肿瘤作用及瘤内滞留性能评价

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贵州医科大学学报 2024年第3期49卷 361-367,374页

作者：杜华康陆苑金阳陈玉颖王永林李勇军刘文贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的探讨载阿霉素(DOX)纳米粒温敏凝胶(DOX-NPs-Gel)复合体系的体内缓释性能、抗肿瘤作用及瘤内滞留性能。方法18只SD雄性大鼠随机均分为DOX组、DOX-碘油组(4 g/L DOX溶液1 mL与碘油1 mL混匀现配,5 mL/kg)及DOX-NPs-Gel组(5 mg/kg DOX+2... 详细信息

目的探讨载阿霉素(DOX)纳米粒温敏凝胶(DOX-NPs-Gel)复合体系的体内缓释性能、抗肿瘤作用及瘤内滞留性能。方法18只SD雄性大鼠随机均分为DOX组、DOX-碘油组(4 g/L DOX溶液1 mL与碘油1 mL混匀现配,5 mL/kg)及DOX-NPs-Gel组(5 mg/kg DOX+2 g/L DOX),腹腔注射,分别于给药后不同时间点经眼底静脉丛穿刺取血,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术检测血浆中DOX的浓度,利用WinNonLin 8.1软件拟合主要药代参数[半衰期(t 1/2)、峰浓度(C max)、曲线下面积(AUC)、清除率(CL)、平均驻留时间(MRT)];培养、收集小鼠肝癌细胞株H22细胞制成悬液,单次接种于90只雄性ICR小鼠右腋皮下构建荷瘤模型,分2部分进行实验,第一部分取荷瘤小鼠36只均分为生理盐水组(注射用生理盐水,5 mL/kg)、空白NPs-Gel组(100 mg空白NPs冻干粉分散于1 mL空白Gel,5 mL/kg)、碘油组(碘油,5 mL/kg)、DOX组(2 g/L DOX,5 mL/kg)、DOX-碘油组(4 g/L DOX溶液1 mL与碘油1 mL混匀现配,5 mL/kg)及DOX-NPs-Gel组(2 g/L DOX,5 mL/kg),瘤内注射、给药1次,观测10 d,给药后每2天称体质量1次并计算各组小鼠的体质量变化百分比,称重后同时测量各组小鼠瘤体宽度、长度并计算肿瘤体积(V),观测结束时脱颈处死、剥离肿瘤组织,称取各组小鼠瘤体质量并计算抑瘤率,然后制作切片采用苏木精-伊红(HE)染色观察组织学特征;第二部分取荷瘤小鼠54只均分为DOX组、DOX-碘油组及DOX-NPs-Gel组,给药剂量和途径同前,给药后12、24、48、72、96及120 h时取各组3只小鼠脱颈处死,剥离肿瘤组织,采用UPLC-MS/MS检测瘤体组织中各时间点的DOX瘤内滞留率。结果体内缓释性能研究结果显示,相比于其余组,DOX-NPs-Gel组大鼠t 1/2延长、CL降低(P<0.05);抗肿瘤作用考察结果显示,与其它治疗组相比,DOX-NPs-Gel组小鼠肿瘤组织生长最慢,瘤重降低(P<0.05),抑瘤率最高(76.55%),HE染色显示肿瘤组织出现大范围凋亡和坏死情况;瘤内滞留性能考察结果显示,DOX-NPs-Gel组小鼠第5天时滞留率为(44.14±3.84)%,其余组第4天时滞留率已降至0%。结论与DOX和DOX-碘油相比,DOX-NPs-Gel在动物体内具有更强的缓释性能、抗肿瘤作用及瘤内滞留性能。

关键词：纳米粒温敏凝胶药代动力学抗肿瘤作用缓释作用肝动脉化疗栓塞术

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土一枝蒿药材指纹图谱和含量测定研究

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中国药业 2023年第4期32卷 74-79页

作者：金倩倩刘理燕汪洋蒋良梦孙佳郑林王永林贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心·省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的研究土一枝蒿药材的指纹图谱和相关成分含量测定方法。方法参照2020年版《中国药典(四部)》测定药材样品的水分、总灰分、水溶性浸出物含量;采用高效液相色谱(HPLC)法测定药材样品中3个成分的含量,色谱柱为CAPCELL PAK C18MGⅡ(S-5)... 详细信息

目的研究土一枝蒿药材的指纹图谱和相关成分含量测定方法。方法参照2020年版《中国药典(四部)》测定药材样品的水分、总灰分、水溶性浸出物含量;采用高效液相色谱(HPLC)法测定药材样品中3个成分的含量,色谱柱为CAPCELL PAK C18MGⅡ(S-5)柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.7mL/min,检测波长为365 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。建立10批药材样品的HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年130723版)进行相似度评价,确定共有峰。结果10批药材样品的HPLC图谱有14个共有峰,相似度为0.941~0.997,确认的3个成分分别为异荭草素、异牡荆苷、槲皮素-4′-O-β-D-葡萄糖苷,其质量浓度分别在12.55~200.82μg/mL(r=0.9999)、7.20~115.28μg/mL(r=0.9995)、6.14~98.20μg/mL(r=0.9998)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为97.92%,101.37%,103.92%,RSD分别为1.38%,2.33%,1.26%(n=6)。10批药材样品中上述3个成分的平均含量分别为1.4210,0.4220,0.2834mg/g;水分含量为10.15%~12.23%,总灰分含量为5.24%~13.29%,水溶性浸出物含量为7.37%~11.54%。结论所建标准可用于土一枝蒿药材的质量控制。

关键词：土一枝蒿高效液相色谱法指纹图谱含量测定质量标准

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中药材小血藤质量标准研究

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中国民族民间医药 2021年第8期30卷 45-50页

作者：张静雅刘春花马雪王爱民李勇军王永林孙佳贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立小血藤药材质量标准。方法:采集来自贵州六批次小血藤药材,参考2015版《中国药典》和2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》对小血藤的质量控制方法进行研究,包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱建别、水分检查、总灰分检查... 详细信息

目的:建立小血藤药材质量标准。方法:采集来自贵州六批次小血藤药材,参考2015版《中国药典》和2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》对小血藤的质量控制方法进行研究,包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱建别、水分检查、总灰分检查及浸出物检查。结果:六批小血藤的性状特征相似,显微特征明显;薄层色谱斑点清晰、分离度好、专属性强;水分为8.90%~10.08%,平均值9.52%;总灰分为11.1%~12.7%,平均值11.8%;水溶性浸出物为12.83%~16.55%,平均值14.93%。结论:该方法操作简单,重复性好,可为小血藤质量控制提供实验依据。

关键词：小血藤显微鉴别薄层色谱鉴别质量标准

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思维导图助力贵州省药学人才培养

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中国继续医学教育 2021年第7期13卷 101-106页

作者：杨畅黄静尚乐园李勇军刘亭贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室/贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

随着我国中医药行业协同创新步伐的加快,亟需培养具有创造性思维,能够提出和解决科学问题的药学人才,以支撑贵州区域医药产业发展。在贵州省药学人才培养过程中合理应用思维导图,不仅可以强化学生的信息素养,提高学生获取有效信息的能力... 详细信息

随着我国中医药行业协同创新步伐的加快,亟需培养具有创造性思维,能够提出和解决科学问题的药学人才,以支撑贵州区域医药产业发展。在贵州省药学人才培养过程中合理应用思维导图,不仅可以强化学生的信息素养,提高学生获取有效信息的能力,还能帮助学生掌握知识的总体框架,把握关键问题,加强记忆,构建并管理个人知识信息库,激发学生在“教”与“学”过程中的主动性与积极性。并且在思维导图的绘制过程中,学生发现、分析、解决问题的能力得到了培养,创新能力、逻辑思维能力、想象力、全局观得到了锻炼,有利于药学人才核心竞争力的全面提升。

关键词：思维导图药学人才贵州特色人才培养信息获取信息库的构建教育

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白及主要活性成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的安全性评价

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中国药业 2019年第23期28卷 1-4页

作者：陈浩刘慧郑林李月婷李勇军巩仔鹏黄勇刘丽娜贵州医科大学.贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室.民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

目的探讨白及主要活性成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的影响。方法以受精后小时(hpf)为时间段,将6 hpf的胚胎暴露在不同质量浓度(0.025,0.050,0.100,0.200,0.800,1.600,3.200 g/L) Militarine溶液中,且设置空白对照组,24 h更换1次药液... 详细信息

目的探讨白及主要活性成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的影响。方法以受精后小时(hpf)为时间段,将6 hpf的胚胎暴露在不同质量浓度(0.025,0.050,0.100,0.200,0.800,1.600,3.200 g/L) Militarine溶液中,且设置空白对照组,24 h更换1次药液。分别于24,48,72,96,144 hpf时通过显微镜观察斑马鱼胚胎的发育形态,测定24 hpf胚胎尾部自主抽动频率,48 hpf心率,48,72,96 hpf孵化率,72,96,144 hpf死亡率和畸形率。结果除质量浓度为0.025,0.050,0.100 g/L溶液中孵育的胚胎外,其余质量浓度溶液中孵育的胚胎24 hpf尾部抽动数与空白对照组比较有显著差异(P<0.05),且随着质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的尾部自主抽动次数减少;除质量浓度为0.025 g/L和0.05 g/L溶液中孵育的胚胎外,其余质量浓度孵育的胚胎与空白对照组比较有显著差异(P<0.01),且随着质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的心率变缓;各浓度组胚胎孵化率在不同时间段呈现不同趋势,中间浓度组胚胎的孵化率较高,与空白对照组比较有明显差异(P<0.05);斑马鱼胚胎的死亡率和畸形率均随时间的延长和浓度的增大而逐渐增大。结论初步评价了白及有效成分Militarine对斑马鱼胚胎发育的安全性,为其创新药物研制和临床安全用药提供了参考。

关键词：白及 Militarine 斑马鱼胚胎发育安全性评价

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UHPLC-ESI-Q-TOF-MS快速分析荭草中化学成分

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中国民族民间医药 2022年第10期31卷 23-30页

作者：李容杨淑婷潘洁刘春花陆苑王永林孙佳贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸... 详细信息

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)进行梯度洗脱;以0.25 mL/min流速进行梯度洗脱。使用ESI离子源,正、负离子模式进行质谱检测,电压分别为4 kV、3.5 kV。结果:通过结合对照品、查阅相关文献及相关质谱数据,对荭草提取物中化学成分进行结构分析,初步鉴定了21个化学成分,主要结构多为黄酮类化合物。结论:UHPLC-ESI-Q-TOF-MS可以提高中药民族药的分析效率,有利于化合物结构的分析,可作为荭草药材化学成分的分析方法。

关键词：荭草黄酮类 UHPLC-ESI-Q-TOF-MS

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响应面法优化山慈菇多糖的水提醇沉法工艺

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贵州农业科学 2021年第7期49卷 134-141页

作者：王静肖秋肖肖红琴康宁芳巩仔鹏郑林王爱民李勇军黄勇李月婷贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

【目的】探讨山慈菇多糖提取的最佳工艺,为山慈菇多糖的进一步开发和应用于食品、医药等领域奠定基础。【方法】对山慈菇中的多糖成分进行提取工艺研究,采用水提醇沉法研究固液比(g∶mL,1∶20、1∶30、1∶40、1∶50和1∶60)、提取温度(6... 详细信息

【目的】探讨山慈菇多糖提取的最佳工艺,为山慈菇多糖的进一步开发和应用于食品、医药等领域奠定基础。【方法】对山慈菇中的多糖成分进行提取工艺研究,采用水提醇沉法研究固液比(g∶mL,1∶20、1∶30、1∶40、1∶50和1∶60)、提取温度(60℃、70℃、80℃、90℃和100℃)、提取时间(30 min、60 min、90 min、120 min和150 min)及醇沉浓度(70%、75%、80%、85%和90%)等不同因素对山慈菇多糖提取率的影响,并在此基础上结合响应面法对山慈菇多糖的提取工艺参数进行优化。【结果】山慈菇多糖的最佳提取工艺参数为固液比1∶40、提取温度79℃、提取时间122 min,山慈菇多糖的提取率为7.04%。【结论】在最佳提取工艺下采用水提醇沉法提取,山慈菇多糖的提取率为7.04%,与预测值基本一致。该方法结果可靠,准确,且具有操作简单、方便、经济等优点,适用于山慈菇多糖的提取。

关键词：响应面山慈菇多糖水提醇沉法提取工艺

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玉叶金花质量控制研究

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贵州医科大学学报 2020年第4期45卷 408-414页

作者：秦兰刘亭孙佳陆苑潘洁王永林李勇军林昌虎刘春花贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立玉叶金花的质量控制方法。方法:采集来自贵州和广东的13批次玉叶金花药材,采用显微鉴别方法鉴定玉叶金花叶表面特征和粉末特征,采用薄层色谱法对玉叶金花真实性进行鉴定;按照《中国药典》2015年版通则规定对玉叶金花水分、总... 详细信息

目的:建立玉叶金花的质量控制方法。方法:采集来自贵州和广东的13批次玉叶金花药材,采用显微鉴别方法鉴定玉叶金花叶表面特征和粉末特征,采用薄层色谱法对玉叶金花真实性进行鉴定;按照《中国药典》2015年版通则规定对玉叶金花水分、总灰分及醇溶性浸出物进行研究。结果:玉叶金花的显微特征明显,叶上表皮细胞呈类多角形、垂周壁增厚、气孔少见,叶下表皮细胞不规则形状、垂周壁波状弯曲、气孔为平轴式、非腺毛多见;粉末显微特征中非腺毛众多、表面光滑、导管多为具缘纹孔、偶见螺纹导管,石细胞众多、呈长方形、方形及类圆形;薄层色谱中主斑点清晰、分离好,斑点颜色和位置与对照药材一致;13批次玉叶金花的水分、总灰分及醇溶性浸出物存在差异。结论:本研究建立的玉叶金花的质量控制研究方法专属性强,稳定性和重复性良好,为该药材的真实性鉴定和质量评价提供了参考依据。

关键词：色谱法,薄层质量控制玉叶金花显微特征一般检查醇溶性浸出物

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