检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2025年

作者：李丹刘红梅张鹏贵州医科大学基础医学院生物学教研室组织工程与干细胞实验中心功能核酸生物药研究重点实验室

目的：探索逆转座子LINE-1编码的ORF-1p在维持293T细胞增殖和形态中的作用。方法：利用RNAi技术，构建LINE-1 ORF-1p表达量下调的293T细胞系，通过qPCR和Western blotting验证干扰效率，通过免疫荧光染色检测ORF-1p的表达和定位，通过... 详细信息

目的：探索逆转座子LINE-1编码的ORF-1p在维持293T细胞增殖和形态中的作用。方法：利用RNAi技术，构建LINE-1 ORF-1p表达量下调的293T细胞系，通过qPCR和Western blotting验证干扰效率，通过免疫荧光染色检测ORF-1p的表达和定位，通过细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖能力，通过鬼笔环肽和DAPI染色分析细胞形态。结果：成功构建两种LINE-1敲低的293T细胞系，通过免疫荧光染色观察ORF-1p的表达定位，显示ORF-1p主要分布在细胞质，干扰LINE-1后ORF-1p表达减少。通过细胞计数和集落形成实验，发现下调ORF-1p后细胞的增殖能力和克隆形成能力显著降低（P< 0.05）。通过鬼笔环肽标记细胞骨架，DAPI标记细胞核，使用相差显微镜和共聚焦显微镜观察干扰LINE-1后细胞形态，结果显示下调ORF-1p后shL1-749细胞面积减小，细胞圆润度增加（P< 0.05）。结论：成功构建了LINE-1敲低的293T细胞系，发现下调ORF-1p蛋白能够抑制293T细胞的生长，改变细胞的形态，为进一步了解LINE-1在细胞增殖和调控中的分子机制奠定了基础。

关键词： LINE-1 ORF-1p RNAi 293T 细胞增殖细胞形态

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基于EdU/BrdU双标记法检测细胞周期动力学的方法

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安徽医科大学学报 2024年第12期59卷 2170-2175,2182页

作者：袁月艾立丽张鹏贵州医科大学基础医学院生物学教研室贵阳550004 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心功能核酸生物药研究重点实验室贵阳550004

目的建立一种基于5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)双标记法检测细胞周期S期时间(Ts)和总细胞周期时间(Tc)的方法。方法通过EdU和BrdU双重标记HEK293T细胞后进行免疫荧光染色,利用高内涵细胞成像分析仪采集荧光信... 详细信息

目的建立一种基于5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)双标记法检测细胞周期S期时间(Ts)和总细胞周期时间(Tc)的方法。方法通过EdU和BrdU双重标记HEK293T细胞后进行免疫荧光染色,利用高内涵细胞成像分析仪采集荧光信号,统计整个细胞群中EdU阳性和BrdU阳性细胞个数,基于之前发表文章中的细胞周期计算公式,对其进行改进后,可精准计算出细胞的Ts和Tc时长,并利用建立的方法对人胚胎干细胞细胞周期时长进行计算。结果根据EdU/BrdU双标记的方法计算出人胚胎干细胞的Ts为10.9 h,Tc为15.3 h。结论基于EdU/BrdU双标记法能检测出细胞的Ts和Tc时长,是一种可以精准高效检测细胞周期的方法。

关键词： EdU BrdU 细胞周期免疫荧光人胚胎干细胞

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LRG1抑制小鼠肝巨噬细胞活化从而改善代谢相关脂肪性肝病:基于增强TGF-β1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1164-1171页

作者：徐龙飞韩晶杨喆杨燕平陈金慧吴西军王琪洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学金阳医院检验科贵州贵阳550025 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学干细胞与组织工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织... 详细信息

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织和肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达。将原代肝巨噬细胞分为5组,对照组、脂肪变性肝细胞来源的上清(CM)刺激组、CM+LRG1组、CM+转化生长因子-β1(TGF-β1)组、CM+TGF-β1+LRG1组,各组培养24 h后,Western bot法检测一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平的表达,RT-PCR法检测iNOS、趋化因子1(CXCL-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平的表达。MAFLD小鼠分为4组,1组作为对照(6只),其余3组经尾静脉分别注射LRG1(6只)、TGF-β1(6只)或者TGF-β1+LRG1(6只),收集肝组织,经HE染色观察肝脏病理学变化,免疫组化法观察肝组织中F4/80+细胞的分布,RT-PCR法检测肝组织iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达。结果HFD小鼠肝组织和脂肪变性的肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达显著降低(P<0.05)。脂肪变性肝细胞来源的CM刺激明显促进肝巨噬细胞中iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达,而TGF-β1和LRG1联合刺激时明显抑制这些分子mRNA水平的表达(P<0.05)。小鼠HFD16周后,单独注射LRG1或TGF-β1均可减少肝内脂质沉积以及肝内巨噬细胞的浸润,二者联合上述改变更加明显。同时,TGF-β1和LRG1联合刺激时也明显抑制iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达(P<0.05)。结论LRG1通过增强TGF-β1信号通路抑制肝巨噬细胞浸润,从而缓解非酒精性脂肪肝的炎性反应。

关键词：富亮氨酸α2-糖蛋1 肝巨噬细胞代谢相关脂肪性肝病转化生长因子-β1 脂肪变性

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结核分枝杆菌感染调控丝裂原活化蛋白激酶与胃底静脉曲张的相关性

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中国老年学杂志 2024年第18期44卷 4387-4390页

作者：钟文静胡蓉王明栋苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550001 贵州医科大学转化医学研究中心贵州贵阳550001 贵阳市公共卫生救治中心检验科贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心

目的研究结核分枝杆菌感染调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与胃底静脉曲张的关联性。方法抽取结核分枝杆菌感染伴胃底静脉曲张患者100例(治疗组)和110例感染结核分枝杆菌但没有发生胃底静脉曲张患者(感染组)及身体健康者95例(对照组),3组... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌感染调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与胃底静脉曲张的关联性。方法抽取结核分枝杆菌感染伴胃底静脉曲张患者100例(治疗组)和110例感染结核分枝杆菌但没有发生胃底静脉曲张患者(感染组)及身体健康者95例(对照组),3组性别、年龄和疾病严重程度相匹配,收集早上空腹静脉血和呼吸道分泌物,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定MAPK信号通路及下游炎性因子白细胞介素(IL)-18、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、血管内皮生长因子(VEGF)表达,探讨MAPK信号通路在结核分枝杆菌感染中的作用。结果治疗组血液及气道分泌物中MAPK表达明显高于其他两组(P<0.05),感染组明显高于对照组(P<0.05)。治疗组女性患病中MAPK蛋白含量相较于男性明显增高(P<0.05),对于年龄来说,患者主要集中在65~74岁,且在这个年龄区间患者MAPK蛋白含量明显较高(P<0.05)。治疗组IL-10、IL-18、TNF-α、VEGF表达相较于其他两组明显较高(P<0.05),且感染组显著高于对照组(P<0.05);结论结核分枝杆菌感染伴有胃底静脉曲张患者相较于不伴有胃底静脉曲张者和未感染结核分枝杆菌者来说,MAPK含量、下游炎性因子IL-10、IL-18、TNF-α、VEGF表达水平明显较高,说明对于治疗结核病具有一定作用。

关键词：结核分枝杆菌丝裂原活化蛋白激酶胃底静脉曲张白细胞介素

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CTHRC1对白血病K562细胞生物学功能的影响

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生物技术 2025年

作者：冯小云秦玉凤张鹏贵州医科大学组织工程与干细胞中心贵州医科大学基础医学院生物学教研室贵州医科大学附属口腔医院修复科

[目的]探讨胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）对白血病K562细胞增殖、凋亡和周期的影响。[方法]通过CAMOIP和TARGET数据库分析CTHRC1在AML中的表达情况;通过单细胞数据集GSE116256验证CTHRC1的异质性表达;通过慢病毒包装与感染构建CTHRC1... 详细信息

[目的]探讨胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）对白血病K562细胞增殖、凋亡和周期的影响。[方法]通过CAMOIP和TARGET数据库分析CTHRC1在AML中的表达情况;通过单细胞数据集GSE116256验证CTHRC1的异质性表达;通过慢病毒包装与感染构建CTHRC1干扰和过表达稳转K562细胞系;通过流式细胞术和细胞计数实验检测CTHRC1表达对K562细胞增殖、凋亡和周期的影响。[结果]CAMOIP数据库与TARGET数据库均表明CTHRC1在AML中表达上调（P<0.001）;TARGET数据库生存分析表明CTHRC1高表达患者生存较低表达组差（P=0.006）;Kmplot数据库生存分析结果也表明CTHRC1高表达患者生存较低表达组差（P=0.018）;单细胞分析表明CTHRC1主要在白血病相关B细胞中表达;蛋白检测结果显示CTHRC1干扰组与质粒空载组相比表达明显下调（P=0.005,t=10.39）,过表达组与过表达组空载组相比明显上调（P<0.001,t=15.91）;mRNA水平检测结果显示干扰组与干扰质粒空载组相比明显下调（P<0.001,t=19.05）,过表达组与过表达组空载组相比明显上调（P=0.0014,t=7.893）;细胞增殖结果表明CTHRC1下调抑制K562细胞增殖（P<0.001）,过表达促进K562细胞增殖（P=0.042）;流式细胞术检测细胞凋亡结果表明:与正常组相比,敲低CTHRC1促进K562细胞凋亡（P<0.001,t=36.79）,过表达CTHRC1抑制K562细胞凋亡（P<0.001,t=64.93）;流式细胞术检测细胞周期结果表明:CTHRC1下调后K562细胞周期S期（P<0.001,t=14.78）和G2/M（P=0.008,t=9.074）期被抑制,G0/G1期升高（P<0.001,t=23.57）,CTHRC1过表达后细胞周期S期（P<0.001,t=14.26）和G2/M期（P=0.0207,t=3.705）被抑制,G0/G1期降低（P=0.001,t=23.57）,细胞周期S期比例升高。[结论]CTHRC1为白血病不良预后指标,主要在白血病B细胞中表达,可介导K562细胞增殖、凋亡和周期,这些发现为白血病的治疗提供了理论基础。

关键词：胶原三螺旋重复蛋白1 白血病 K562细胞细胞周期细胞凋亡细胞增殖生存分析单细胞分析

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天然小分子HEP-14抗黑色素瘤细胞SK-Mel-103的作用研究

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陆军军医大学学报 2022年第23期44卷 2392-2400页

作者：刘芳钟沁王贤韦睿然桂黎明贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550004 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 安徽医科大学临床医学院基础医学部合肥230031

目的初步探讨天然小分子HEP-14对黑色素瘤SK-Mel-103细胞的抑制作用及相关机制。方法用不同浓度的HEP-14(2.5~40μmol/L)处理黑色素瘤SK-Mel-103细胞后,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆的形成,流式细胞术检测细胞周期变... 详细信息

目的初步探讨天然小分子HEP-14对黑色素瘤SK-Mel-103细胞的抑制作用及相关机制。方法用不同浓度的HEP-14(2.5~40μmol/L)处理黑色素瘤SK-Mel-103细胞后,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆的形成,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测CD271和STAT3基因水平的表达,Western blot检测CD271、STAT3、p-STAT3蛋白水平的表达,细胞免疫荧光检测进一步证实CD271在细胞内的表达。结果与对照组比较,天然小分子HEP-14能有效抑制SK-Mel-103细胞的生长和克隆的形成(P<0.05),诱导细胞G2/M期阻滞(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05)和抑制细胞的迁移。HEP-14显著抑制SK-Mel-103、SK-Mel-147和SK-Mel-28细胞STAT3的磷酸化(P<0.05),下调CD271的表达(P<0.05)。结论天然小分子HEP-14能有效抑制黑色素瘤细胞生长并诱导其凋亡;可能通过抑制STAT3的激活下调CD271的表达,从而抑制黑色素瘤细胞的迁移。

关键词：天然小分子HEP-14 黑色素瘤 SK-Mel-103细胞信号转导和转录活化因子3 神经生长因子受体

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彗星实验方法的优化及影响因素的分析

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安徽医科大学学报 2024年第2期59卷 219-223页

作者：范南英张鹏贵州医科大学基础医学院生物学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550025

目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂... 详细信息

目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果优化后的实验结果显示,制胶方法由三步法进步为两步法,以PBS为琼脂糖溶剂,0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶,0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶,制胶效果好,操作更简单省时,较好地解决了脱胶问题。裂解1 h,1 V/cm电压电泳,获得了具有代表性的彗星图像,结果易于判读,能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H_(2)O_(2)诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较,成功建立了彗星实验的阳性对照。结论与传统方法相比,优化后的彗星实验方法成本更低,更简单、快速、准确,重复性也更好,能够快速检测细胞中的DNA损伤。

关键词：彗星实验 HL-60 DNA损伤模型

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免疫调节分子 BTN2A2结构及其在肺癌表达的分析

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基因组学与应用生物学 2022年第7期41卷 1550-1566页

作者：杨文江何雪萍黄佑娇胡蓉苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550025 贵州医科大学转化医学中心贵阳550025 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵阳550004

本研究旨在通过生物信息学方法,结合对人体的肿瘤组织切片进行免疫组织化学检测,分析免疫调节分子BTN2A2(butyrophilin subfamily 2 member A2)结构及其在肿瘤组织中的表达,为研究BTN2A2分子的免疫调节功能提供理论和实验支撑。序列分... 详细信息

本研究旨在通过生物信息学方法,结合对人体的肿瘤组织切片进行免疫组织化学检测,分析免疫调节分子BTN2A2(butyrophilin subfamily 2 member A2)结构及其在肿瘤组织中的表达,为研究BTN2A2分子的免疫调节功能提供理论和实验支撑。序列分析表明,BTN2A2具有IgV样结构域,与B7家族分子具有序列同源性和结构相似性。系统发育树分析表明,BTN2A2和已知B7家族分子之间具有亲缘性。通过I-TASSER成功构建BTN2A2蛋白三维晶体结构模型,hBTN2A2配体为Cys,配体结合位点相应氨基酸残基分别为Arg-54、His-56、Ser-111、Val-112和Ala-113。蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)方法表明,存在10个与BTN2A2相关的分子,其中CD4和CD8与T细胞免疫相关。ZDOCK分析表明,BTN2A2确实可以与T细胞表面CD4和CD8分子结合。ClusterProfiler分析表明,BTN2A2和相关分子主要集中在原发性免疫缺陷、抗原加工和呈递、T细胞受体信号通路等免疫调节方面。流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析进一步表明,BTN2A2蛋白与T细胞表面CD4和CD8分子间存在相互作用,且BTN2A2蛋白可抑制CD4^(+)和CD8^(+)T细胞增殖和活化(P<0.001)。免疫组织化学染色显示,hBTN2A2在人肺癌、肝癌、肾癌和食管癌组织中的表达高于正常组织,而在卵巢癌组织未见表达(P<0.05);PrognoScan数据库和Kaplan-Meier曲线进行肺癌患者生存分析表明,hBTN2A2高表达的患者预后良好(P<0.001);TIMER数据库分析表明,肺癌中hBTN2A2表达水平与免疫细胞浸润呈正相关关系;GEPIA数据库分析显示,肺癌中hBTN2A2表达主要与CD8^(+)T细胞、CD3^(+)T细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)、辅助性T细胞(helper T cell,Th)1等免疫细胞浸润有关(P<0.001)。研究结果为免疫调节分子BTN2A2结构和功能性表达的深入研究提供了理论基础。

关键词：生物信息学 BTN2A2 肺癌

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汉防己甲素衍生物HL-49对Bloom DNA解旋酶生物学特性的影响

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中国药理学通报 2022年第2期38卷 209-214页

作者：刘金河张望明晏文涛向天罗维杨凯琳徐泽权刘杰麟贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫教研室贵州贵阳550025 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001 贵州医科大学检验学院贵州贵阳550004

目的汉防己甲素衍生物是一类双苄基异喹啉类化合物,具有明显的抗肿瘤活性。研究汉防己甲素衍生物HL-49对Bloom DNA解旋酶(bloom DNA helicase,BLM)构象和生物学活性的影响对于探索其抗肿瘤作用机制具有重要意义。方法采用紫外光谱扫描... 详细信息

目的汉防己甲素衍生物是一类双苄基异喹啉类化合物,具有明显的抗肿瘤活性。研究汉防己甲素衍生物HL-49对Bloom DNA解旋酶(bloom DNA helicase,BLM)构象和生物学活性的影响对于探索其抗肿瘤作用机制具有重要意义。方法采用紫外光谱扫描研究药物HL-49对BLM DNA解旋酶构象的影响,荧光偏振技术和孔雀绿-磷钼酸铵比色法分析HL-49对BLM解旋酶的DNA结合活性、DNA解链活性、ATPase活性。结果紫外光谱扫描结果显示,HL-49对BLM DNA解旋酶的三维构象影响不明显。荧光偏振法结果显示,HL-49对BLM解旋酶的DNA(dsDNA/ssDNA)结合活性的影响不明显,但随浓度的增加,与DNA相互结合的能力越强(P<0.01)。随着HL-49浓度的增加,BLM DNA解旋酶的DNA解链能力下降,K_(obs)值逐渐降低。孔雀绿-磷钼酸铵比色结果说明,随着HL-49浓度的增加或作用时间延长,HL-49能明显抑制BLM DNA解旋酶的ATPase活性。结论汉防己甲素衍生物HL-49通过与DNA的可逆性结合,抑制BLM DNA解旋酶的ATPase活性和DNA解链活性。

关键词：汉防己甲素衍生物 Bloom解旋酶生化活性构象荧光偏振 ATP酶活性

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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究

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生物技术通报 2022年第10期38卷 90-96页

作者：陈黎卢茜杨红兰张鹏何志旭贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科遵义563000

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 详细信息

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变检测

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