检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2023年第19期27卷 2953-2959页

作者：潘杭朱向情何洁杨再玲田川吕冠柯阮光萍叶丽何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室、云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室、昆明市干细胞与再生医学重点实验室、基础医学实验室云南省昆明市650032 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室、细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室、贵州省再生医学重点实验室、省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室、中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院肿瘤医院贵州省贵阳市550004 四川省医学科学院、四川省人民医院四川省成都市610000 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:随着年龄的增长,脾脏的结构和功能发生改变,胸腺在青春期之后逐渐萎缩退化,导致机体发生免疫功能障碍。目的:探讨骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的作用。方法:筛选出平均年龄25岁老年猕猴6只,随机分为老年组和老... 详细信息

背景:随着年龄的增长,脾脏的结构和功能发生改变,胸腺在青春期之后逐渐萎缩退化,导致机体发生免疫功能障碍。目的:探讨骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的作用。方法:筛选出平均年龄25岁老年猕猴6只,随机分为老年组和老年治疗组各3只;老年治疗组猕猴经股静脉输注超顺磁性铁纳米颗粒标记的第4代骨髓间充质干细胞(1×10^(7)个/kg),1次/d,连续输注3 d,老年组猕猴在同一时间输注等体积的生理盐水;猕猴最后一次输注骨髓间充质干细胞5个月后给予安乐死处理,取出胸腺以及脾脏组织;苏木精-伊红染色观察胸腺组织和脾脏组织的结构变化;免疫荧光染色分析胸腺组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;免疫组织化学染色分析脾脏组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;安乐死处理猕猴之前抽取各组猕猴股静脉血5 mL,运用酶联免疫分析外周血血清中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α和白细胞介素1α的分泌水平。结果与结论:①超顺磁性铁纳米颗粒标记的骨髓间充质干细胞经过股静脉输注入猕猴体内能够成功定植在衰老胸腺和脾脏组织中发挥作用;②骨髓间充质干细胞移植治疗后,衰老猕猴中胸腺部分组织出现清晰的皮质与髓质交界,脂肪细胞减少,出现胸腺小体,向正常的胸腺组织结构转变;衰老猕猴中脾脏组织出现清晰的红髓与白髓分界,脾小体的边缘多完整,且巨噬细胞减少,向正常的脾脏组织结构转变;③与老年组相比,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中CD3^(+)、CD4^(+)以及CD8^(+)T细胞的表达量呈现增高的趋势,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中P21蛋白的表达量呈现显著下降趋势;④与老年组相比,老年治疗组外周血中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α以及白细胞介素1α的分泌水平呈现显著下降趋势;⑤上述结果表明,通过骨髓间充质干细胞的移植治疗,能够改善老年猕猴胸腺及脾脏组织的结构和功能。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞猕猴胸腺脾脏抗衰老免疫衰老相关分泌表型

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三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

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贵州医科大学学报 2019年第6期44卷 626-631页

作者：张鹏崔冬冰舒莉萍范安然贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的... 详细信息

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响。结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌。结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响。

关键词：淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体信号肽神经退行性疾病

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Tau蛋白通过外泌体传递到细胞外空间的研究

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贵州医科大学学报 2019年第6期44卷 632-636页

作者：张鹏舒莉萍周艳华范安然贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的:验证HEK293-Tau细胞的外泌体中是否存在Tau蛋白、及Tau蛋白是否能够在细胞间通过外泌体传播。方法:通过经典的超速离心结合超滤法分离HEK293-Tau细胞的外泌体,通过透射电镜分析外泌体形态、采用Western blot鉴定外泌体特异性标记物... 详细信息

目的:验证HEK293-Tau细胞的外泌体中是否存在Tau蛋白、及Tau蛋白是否能够在细胞间通过外泌体传播。方法:通过经典的超速离心结合超滤法分离HEK293-Tau细胞的外泌体,通过透射电镜分析外泌体形态、采用Western blot鉴定外泌体特异性标记物(HSP70、CD63及CD9)及外泌体和细胞培养液中Tau蛋白表达。结果:超速离心结合超滤法成功地分离了HEK293-Tau细胞的外泌体,在透射电镜下观察到外泌体呈现典型的杯状形态,分离的外泌体中检测到HSP70、CD63及CD9等外泌体特异性标记物的表达;在外泌体及细胞培养液中能够检测到Tau蛋白的存在。结论: HEK293-Tau 细胞外泌体中存在Tau蛋白,并且Tau蛋白可以通过外泌体传递到细胞外空间。

关键词： Tau蛋白外泌体阿尔茨海默综合征 HEK293-Tau细胞神经退行性疾病超速离心法超滤法

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miR-26b调控Wnt/β-catenin信号通路促进成肝样分化MSCs迁移研究

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安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1850-1857页

作者：吉杨丹罗红阳王丹王恒杨小燕何志旭刘金河汪显耀赵锦张丽娟张玲敏秦臻许键炜黔南民族医学高等专科学校药理学教研室都匀558013 贵阳市乌当区人民医院贵阳550018 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验贵阳550004 贵州医科大学护理学院贵阳550004 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550004

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成... 详细信息

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunnchamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响。结果随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调。Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布。Transwell及Dunncham-ber实验表明MSCs诱导分化至7d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21d。高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05)。结论miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移。

关键词：间充质干细胞 miR-26b Wnt/β-catenin信号通路成肝样分化趋化迁移

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hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用研究

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安徽医科大学学报 2021年第8期56卷 1226-1231页

作者：陈茂琼向敏宋海良王岚匡梦岚张丽娟熊英何志旭许键炜高鸿秦臻贵州医科大学附属医院新生儿科贵阳550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550000 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验贵阳550004 东莞大朗医院普外科东莞523770 贵州医科大学医学科学研究所贵阳550000 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550000 贵州医科大学护理学院贵阳550000 贵州医科大学基础医学院机能学实验室贵阳550000 贵州医科大学第三附属医院麻醉科都匀558000

目的通过移植人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗缺氧缺血诱导的新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。方法采集足月健康新生儿脐带约10 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,通过感染重组携带绿... 详细信息

目的通过移植人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗缺氧缺血诱导的新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。方法采集足月健康新生儿脐带约10 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,通过感染重组携带绿色荧光蛋白的腺病毒标记细胞;取18只新生健康7d龄SD大鼠,随机均分为对照(假手术)、模型、治疗组,其中模型组及治疗组建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,建模成功24 h后将标记的hUC-MSCs注射入治疗组左侧(损伤侧)侧脑室,各组大鼠hUC-MSCs移植治疗48 h后,检测hUC-MSCs在HIE大鼠大脑内的定植并采用TTC染色观察梗死脑组织,RT-qPCR测定海马组织中Beclin-2、Caspase-3 mRNA水平的变化,Western blot检测海马区细胞Beclin-2、Caspase-3蛋白的表达。结果对照组大鼠大脑没有形成梗死体积,模型组大鼠大脑梗死体积明显,梗死体积比为(41.67±4.17)%;治疗组大鼠经hUC-MSCs移植治疗48 h后,大脑梗死体积减小[(16.65±3.43)%],与模型组比较,差异有统计学意义;HIE建模48 h后,内源性Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达上调。hUC-MSCs移植治疗48 h后,Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达下降。结论hUC-MSCs能减小缺氧缺血损伤大鼠大脑梗死体积,对损伤大鼠有保护作用;hUC-MSCs能够减少大鼠脑细胞凋亡,下调缺氧缺血脑损伤大鼠海马区细胞凋亡相关Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白水平。

关键词：缺氧缺血性脑病人脐带来源的间充质干细胞凋亡 Beclin-2 Caspase-3

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重点实验室在创新型医学本科人才培养中的实践

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基础医学教育 2020年第3期22卷 203-206页

作者：许键炜杨小燕孙小霞王静娴刘金河周艳华贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学附属医院儿科贵州医科大学财务处资金管理科

结合贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心向本科生开放的模式,从高校重点实验室向本科生开放的基础、必要性,对培养学生实践能力和创新思维的意义,开放的方式以及取得的成效等方面探讨高校重点实验室向本科生开放在培养应用创新型医... 详细信息

结合贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心向本科生开放的模式,从高校重点实验室向本科生开放的基础、必要性,对培养学生实践能力和创新思维的意义,开放的方式以及取得的成效等方面探讨高校重点实验室向本科生开放在培养应用创新型医学人才中的作用。

关键词：重点实验室教学改革人才培养

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胎儿血红蛋白的表达调控

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生理科学进展 2022年第1期53卷 63-67页

作者：刘含杨红兰何志旭张鹏贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004

胎儿血红蛋白是胎儿体内主要的血红蛋白类型,是由两条α肽链和两条γ肽链组成的四聚体。出生后胎儿血红蛋白在人体中的表达急剧降低至1%,由两条α肽链和两条β肽链组成的成人血红蛋白取而代之成为主要的血红蛋白类型。β地中海贫血和镰... 详细信息

胎儿血红蛋白是胎儿体内主要的血红蛋白类型,是由两条α肽链和两条γ肽链组成的四聚体。出生后胎儿血红蛋白在人体中的表达急剧降低至1%,由两条α肽链和两条β肽链组成的成人血红蛋白取而代之成为主要的血红蛋白类型。β地中海贫血和镰刀型细胞贫血发病原因均基于β-珠蛋白基因发生突变,致使β-珠蛋白合成不足或异常,进而引起一系列临床症状。诸多实验结果及临床疗效表明,提高患者体内γ-珠蛋白的表达可部分替代异常β-珠蛋白从而有效缓解患者的临床症状。随着基因治疗的发展,如何安全高效的再激活胎儿血红蛋白的表达成为治疗β型地中海贫血和镰刀型细胞贫血患者的重要科学命题。本文重点回顾近年来γ-珠蛋白表达的调控机制,以期对寻找更加有效激活胎儿血红蛋白的方法提供参考。

关键词：胎儿血红蛋白 β-地中海贫血转录因子表观遗传

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甲基结合蛋白1对小鼠胚胎干细胞增殖及克隆形态的影响

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贵州医科大学学报 2019年第6期44卷 621-625页

作者：张鹏杨红兰刘含周艳华杨燕范安然何志旭舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培... 详细信息

目的:研究甲基结合蛋白1(Mbd1)对小鼠胚胎干细胞克隆形态及增殖的影响。方法:设计针对Mbd1转录起始位点的gRNA,将表达有gRNA和Cas9蛋白的质粒使用脂质体转染方法转入小鼠胚胎干细胞(J1);使用抗生素将未转染成功的细胞杀死后,细胞继续培养7d,挑取单克隆细胞,采用PCR法筛选敲除Mbd1的纯合子细胞,观察Mbd1缺失对小鼠胚胎干细胞克隆形态的影响;使用细胞计数法检验Mbd1对胚胎干细胞增殖的影响。结果:通过Cripsr/Cas9成功获得敲除Mbd1的胚胎干细胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干细胞丧失了常规小鼠胚胎干细胞的3D克隆形态,细胞呈现单层扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干细胞增殖速率变慢。结论:Mbd1通过影响小鼠胚胎干细胞克隆形态和增殖而影响胚胎干细胞的多能性。

关键词：甲基结合蛋白胚胎干细胞多能性细胞增殖神经前体细胞基因敲除

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Alexa Fluor 488 NHS Ester染料提高流式细胞周期检测结果的可行性

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贵州医科大学学报 2019年第6期44卷 637-640,646页

作者：张鹏彭涛范安然兰金芝何志旭舒莉萍周艳华贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的:探讨Alexa Fluor 488 NHS Ester染料用于提高流式细胞周期检测结果的可行性。方法:以293细胞作为研究对象,采用两种方案进行细胞周期检测,每种方案设4组;方案一,按照细胞周期检测试剂盒的说明书对4组细胞进行染色;方案二,先对4组... 详细信息

目的:探讨Alexa Fluor 488 NHS Ester染料用于提高流式细胞周期检测结果的可行性。方法:以293细胞作为研究对象,采用两种方案进行细胞周期检测,每种方案设4组;方案一,按照细胞周期检测试剂盒的说明书对4组细胞进行染色;方案二,先对4组细胞用0.0、0.4、2.0及10.0 mg/L的Alexa Fluor 488 NH S Ester染料染色15 min,然后将4组细胞混合在一支试管中再用碘化丙啶(PI)进行染色;将两种染色方案获得的细胞上流式细胞仪检测,分析比较两种方案的4组细胞检测结果。结果:方案一染色的4组细胞,流式细胞仪检测结果不尽一致,个别组间由于细胞密度不同导致染色结果存在差异;方案二经不同浓度Alexa Fluor 488 NHS Ester染色的4组细胞虽然混合于一支试管,检测结果经Flowjo X软件分析时能明显分出4群细胞,对4群细胞分别进行细胞周期分析比较,结果一致。结论:采用不同浓度Alexa Fluor 488 NHS Ester染料预染细胞后混合在一起进行PI染色能够提高细胞周期检测结果的可信度,在神经退行性疾病研究中可节约病人的取样次数及数量。

关键词：细胞周期检测流式细胞术碘化丙啶神经退行性疾病 AlexaFluor488NHSEster染料

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BMSCs通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症反应

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安徽医科大学学报 2023年第12期58卷 2073-2080页

作者：陈茂琼杨萌婷蔡姣匡梦岚吴莎杨山福张芷楠杨小军樊永霞贵州医科大学附属医院新生儿科贵阳550002 细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室成体干细胞转化研究重点实验室(中国医学科学院)贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵阳550000 重庆市大足区中医院药剂科重庆402360 贵州医科大学神奇民族医药学院贵阳550004 贵州医科大学附属白云医院脑科中心贵阳550014 黔南民族医学高等专科学校基础部生理学教研室都匀558000 六盘水市钟山区人民医院ICU 六盘水553000

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响。方法32只SPF级KM小鼠,4周龄,随机分为4组:对照组,LPS组,地塞米松(DEX)治疗组(LPS+DEX),BMSCs移植组(LPS+BMSCs);后3组经气管穿刺法注入LPS建立小... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响。方法32只SPF级KM小鼠,4周龄,随机分为4组:对照组,LPS组,地塞米松(DEX)治疗组(LPS+DEX),BMSCs移植组(LPS+BMSCs);后3组经气管穿刺法注入LPS建立小鼠ALI模型,建模24 h后经尾静脉一次性注射移植同源BMSCs,同时,LPS+DEX组经尾静脉注射DEX,连续3 d;细胞移植后第4天或DEX注射完毕后24 h,记录小鼠存活数量,检测小鼠肺功能,测肺W/D重量比;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,检测血清炎性细胞因子,观察肺组织病理学变化;经绿色荧光蛋白标记染色观察BMSCs在肺组织中的归巢;用RT-PCR及Western blot分别检测肺组织TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白质表达(TLR4、MyD88和NF-κB)。结果与对照组相比,LPS组小鼠肺功能降低,肺W/D重量比、血清中炎症因子、BALF中炎性细胞数量明显增加,肺组织损伤严重;与LPS组比较,LPS+DEX组、LPS+BMSCs组小鼠存活数量增高,肺功能改善,肺组织损伤减轻,肺W/D重量比、血清炎性细胞因子、BALF中炎性细胞数量明显下降,TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白表达降低。结论同源BMSCs移植可以有效缓解LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与调控TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,减轻炎症反应有关,该研究为BMSCs同源移植治疗ALI提供了实验依据。

关键词：急性肺损伤小鼠骨髓间充质干细胞 TLR4/MyD88/NF-κ信号通路炎症反应

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