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miR-26b调控Wnt/β-catenin信号通路促进成肝样分化MSCs迁移研究

安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1850-1857页

作者：吉杨丹罗红阳王丹王恒杨小燕何志旭刘金河汪显耀赵锦张丽娟张玲敏秦臻许键炜黔南民族医学高等专科学校药理学教研室都匀558013 贵阳市乌当区人民医院贵阳550018 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验贵阳550004 贵州医科大学护理学院贵阳550004 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550004

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成... 详细信息

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunnchamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响。结果随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调。Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布。Transwell及Dunncham-ber实验表明MSCs诱导分化至7d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21d。高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05)。结论miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移。

关键词：间充质干细胞 miR-26b Wnt/β-catenin信号通路成肝样分化趋化迁移

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猕猴从幼年到老年的卵巢组织学变化

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实验动物科学 2020年第6期37卷 37-43页

作者：田川杨再玲朱向情李晔吕冠柯王金祥赵晶蔡学敏潘兴华贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 解放军联勤保障部队第920医院基础医学实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室昆明650032

目的观察猕猴的卵巢组织从幼年到老年的变化情况,探索猕猴的卵巢随着年龄增长发生变化的机制,为卵巢衰老的研究提供组织学参考。方法(1)筛选幼年猕猴3只,青年猕猴3只,老年猕猴3只。(2)安乐死处理猕猴,取卵巢组织,电子天平称质量并拍照,... 详细信息

目的观察猕猴的卵巢组织从幼年到老年的变化情况,探索猕猴的卵巢随着年龄增长发生变化的机制,为卵巢衰老的研究提供组织学参考。方法(1)筛选幼年猕猴3只,青年猕猴3只,老年猕猴3只。(2)安乐死处理猕猴,取卵巢组织,电子天平称质量并拍照,横向切成4份,置于4%多聚甲醛固定。(3)HE染色观察卵巢组织各级卵泡与结构变化;Masson染色观察卵巢组织纤维化程度;Tunel染色统计分析卵巢细胞的凋亡率;免疫组织化学染色统计血管个数。结果(1)幼年猕猴的卵巢脏器指数与青年猕猴的无显著差异,都高于老年猕猴的卵巢脏器指数。(2)幼年与青年猕猴的卵巢组织中可见原始、初级、次级,成熟卵泡;老年猕猴的卵巢局部只见闭锁卵泡,大部分被脂肪组织填充。(3)幼年猕猴的卵巢纤维化程度高于青年猕猴,老年猕猴纤维化程度最高。(4)幼年猕猴卵巢细胞凋亡率与青年猕猴的无显著差异,都显著低于老年猕猴。(5)幼年猕猴血管个数最多,青年猕猴多于高于老年猕猴。结论随着年龄增长,猕猴卵巢组织中卵泡数量逐渐减少、髓质被大量脂肪组织填充、间质排列散乱,这一生物学过程与卵巢纤维化程度增强、卵巢细胞凋亡率增加、血管个数减少相关。

关键词：猕猴卵巢衰老卵泡纤维化卵巢细胞凋亡

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斑马鱼白血病模型的研究进展

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医学综述 2020年第2期26卷 263-268页

作者：向文碧何志旭舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 贵州医科大学儿科学教研室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563004

斑马鱼是一种脊椎动物有机体,因具有保守的造血过程和独特的实验优势,尤其适合用于研究人类白血病。目前,研究斑马鱼的最新技术包括转基因技术、基因组编辑技术和移植技术,通过这些技术现已构建了许多白血病模型。斑马鱼的通体透明与先... 详细信息

斑马鱼是一种脊椎动物有机体,因具有保守的造血过程和独特的实验优势,尤其适合用于研究人类白血病。目前,研究斑马鱼的最新技术包括转基因技术、基因组编辑技术和移植技术,通过这些技术现已构建了许多白血病模型。斑马鱼的通体透明与先进的谱系追踪和成像技术相结合,揭示了白血病发生、发展的许多细节。凭借这些优势,斑马鱼成为白血病研究中具有独特优势的模式生物之一,此外,基于斑马鱼的高通量药物筛选的进步有望加速新型白血病疗法的开发。

关键词：白血病斑马鱼动物模型

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重点实验室在创新型医学本科人才培养中的实践

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基础医学教育 2020年第3期22卷 203-206页

作者：许键炜杨小燕孙小霞王静娴刘金河周艳华贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学附属医院儿科贵州医科大学财务处资金管理科

结合贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心向本科生开放的模式,从高校重点实验室向本科生开放的基础、必要性,对培养学生实践能力和创新思维的意义,开放的方式以及取得的成效等方面探讨高校重点实验室向本科生开放在培养应用创新型医... 详细信息

结合贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心向本科生开放的模式,从高校重点实验室向本科生开放的基础、必要性,对培养学生实践能力和创新思维的意义,开放的方式以及取得的成效等方面探讨高校重点实验室向本科生开放在培养应用创新型医学人才中的作用。

关键词：重点实验室教学改革人才培养

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二氢杨梅素对Bloom解旋酶结构和生物学活性的影响

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中国药理学通报 2019年第10期35卷 1453-1460页

作者：刘金河张望明晏文涛许键炜葛章文贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省人民医院检验科贵州贵阳550002 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检... 详细信息

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检测等方法和技术研究DMY对BLM解旋酶的生物学活性的影响。结果圆二色谱和紫外光谱结果显示,DMY能与BLM解旋酶结合,且有1个结合位点;在0~25μmol·L^-1浓度范围内,DMY对BLM解旋酶的二级结构的干扰能力成正相关,在25~75μmol·L^-1浓度范围内则相反。荧光偏振和自由磷检测实验显示,DMY能结合在BLM解旋酶上,进而抑制BLM解旋酶的解链活性。结论DMY能够竞争性结合于BLM解旋酶的DNA结合位点上,改变BLM解旋酶的空间结构,从而抑制BLM解旋酶与DNA的结合,进而抑制BLM解旋酶的生物学活性。

关键词：二氢杨梅素 Bloom解旋酶生化活性构象二级结构圆二色谱荧光偏振

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聚乳酸-羟基乙酸共聚物负载人骨髓间充质干细胞构建组织工程骨

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中国组织工程研究 2019年第26期23卷 4109-4114页

作者：陈娇舒莉萍李轩泽刘琴吴颖刘印王伟宇刘鋆叶川马敏先贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属口腔医院口腔修复科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省贵阳市550004 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:聚乳酸-羟基乙酸共聚物是被批准用于实验及临床的少数生物材料之一,其具有良好的生物相容性和生物降解性及优异的机械性能,是一种良好的组织工程支架载体。目的:验证聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米三维多孔支架材料与人骨髓间充质干细... 详细信息

背景:聚乳酸-羟基乙酸共聚物是被批准用于实验及临床的少数生物材料之一,其具有良好的生物相容性和生物降解性及优异的机械性能,是一种良好的组织工程支架载体。目的:验证聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米三维多孔支架材料与人骨髓间充质干细胞的体外生物相容性及体内异位成骨能力。方法:(1)运用静电纺丝技术将150 g/L的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液电纺成纳米纤维膜,将第3代人骨髓间充质干细胞(人骨髓标本获取已经获得贵州医科大学附属医院伦理委员会批准)种植于聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米纤维支架上,采用成骨诱导液培养7 d,DAPI荧光染色、吖啶橙荧光染色及扫描电镜观察细胞-支架复合物的生长情况;(2)将第3代人骨髓间充质干细胞种植于聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米纤维支架上,使用成骨诱导液诱导培养的作为实验组,不使用成骨诱导液诱导培养的作为对照组,两组培养14 d后分别植入裸鼠皮下,术后12周取出植入材料标本,行苏木精-伊红染色、茜素红染色、碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色观察植入物体内异位成骨情况。动物实验获得贵州医科大学实验动物伦理委员会批准,批准号:NO1759999。结果与结论:(1)DAPI荧光染色与吖啶橙荧光染色显示细胞黏附于聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米纤维支架上,生长良好;(2)扫描电镜显示,成骨诱导培养的人骨髓间充质干细胞在聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米纤维支架上生长良好,细胞产生丰富的细胞外基质并覆盖于纳米纤维支架表面;(3)植入12周后,两组茜素红染色、碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原染色呈阳性,其中实验组各染色阳性表达强于对照组;苏木精-伊红染色显示实验组有较多成骨细胞和典型的骨陷窝,对照组仅有少量骨组织形成;(4)研究表明,聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米纤维膜具有良好的生物相容性及体内异位成骨能力,可作为骨组织工程支架材料。

关键词：聚乳酸-羟基乙酸共聚物 PLGA 纳米纤维膜静电纺丝支架人骨髓间充干细胞生物相容性组织工程异位成骨

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藻酸盐-羟基磷灰石-聚乙二醇复合水凝胶支架的制备及其生物相容性

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中国组织工程研究 2019年第26期23卷 4230-4236页

作者：李轩泽舒莉萍陈娇孙宇邹强王伟宇刘鋆杨龙马敏先叶川贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院骨科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省贵阳市550004 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属口腔医院口腔修复科贵州省贵阳市550004

背景:聚乙二醇作为医用高分子共聚材料被广泛用于药物缓释,若将其制备成复合水凝胶,可作为具备一定力学性能且生物相容性良好的支架材料。目的:探索藻酸盐-羟基磷灰石-聚乙二醇藻酸盐-羟基磷灰石-聚乙二醇(sodiumalginate-hydroxyapatit... 详细信息

背景:聚乙二醇作为医用高分子共聚材料被广泛用于药物缓释,若将其制备成复合水凝胶,可作为具备一定力学性能且生物相容性良好的支架材料。目的:探索藻酸盐-羟基磷灰石-聚乙二醇藻酸盐-羟基磷灰石-聚乙二醇(sodiumalginate-hydroxyapatitepolyethylene glycol,SA-HA-PEG)复合水凝胶支架材料的理化性能及生物相容性。方法:超声混匀水凝胶后,加入2价阳离子溶液交联,分别得到海藻酸-羟基磷灰石(A组)、SA-HA-3%PEG(B组)、SA-HA-5%PEG(C组)、SA-HA-8%PEG(D组)4组支架,后3组支架中PEG的质量浓度分别为30,50,80g/L,利用动态机械分析仪分析凝胶支架的压缩应力和弹性模量;将支架置于溶菌酶溶液中,测定其体外降解率;真空冷冻干燥后,采用扫描电镜观察凝胶支架的三维结构。将4组水凝胶支架分别与骨髓间充质干细胞混匀交联后,CCK-8检测培养1,3,5,7d后的细胞增殖情况,Live/Dead荧光染色观察培养7d后的细胞活性。结果与结论:(1)B、C、D组支架的压缩应力与弹性模量高于A组(P <0.05),C、D组支架的压缩应力与弹性模量高于B组(P <0.05),C、D组压缩应力与弹性模量比较差异无显著性意义(P> 0.05);(2)C、D组支架降解率低于A、B组(P <0.05),B组支架降解率低于A组(P <0.05),C、D组支架降解率比较差异无显著性意义(P> 0.05);(3)扫描电镜显示,C组支架呈现孔隙率高、孔径大小一致的生物凝胶结构,A、B、D组支架的孔径大小不规则、孔隙率低;(4)B、C、D组培养3-7 d的细胞增殖速率快于A组(P <0.05),前3组间比较差异无显著性意义(P>0.05);(5)复合培养7d后,B、C、D组细胞存活率高于A组(P <0.05),C组高于B、D组(P <0.05);(6)结果表明,SA-HA-PEG复合水凝胶支架具有良好的力学性能与生物相容性。

关键词：生物材料 SA-HA-PEG 藻酸盐羟基磷灰石聚乙二醇水凝胶组织工程支架复合水凝胶支架

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心血管发育相关基因mpx在斑马鱼早期胚胎发育中的表达

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贵州医科大学学报 2020年第5期45卷 526-530,615页

作者：向文碧周栋珍李志操周艳华张鹏崔冬冰何志旭舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学儿科学教研室贵州贵阳550004 贵州大学贵州贵阳550025 贵州省贵阳市妇幼保健院贵阳市儿童医院贵州贵阳550003 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的:探讨斑马鱼体内髓样特异性过氧化物酶(mpx)在胚胎发育过程中的表达模式。方法:按Trizol法提取斑马鱼总RNA后逆转录成cDNA,再以cDNA为模板RT-PCR扩增mpx基因片段;用基因重组技术构建pCS2^+-mpx重组质粒后将质粒酶切线性化,T3聚合酶... 详细信息

目的:探讨斑马鱼体内髓样特异性过氧化物酶(mpx)在胚胎发育过程中的表达模式。方法:按Trizol法提取斑马鱼总RNA后逆转录成cDNA,再以cDNA为模板RT-PCR扩增mpx基因片段;用基因重组技术构建pCS2^+-mpx重组质粒后将质粒酶切线性化,T3聚合酶制备mpx反义RNA探针,用全胚胎原位杂交检测mpx基因的表达。结果:成功构建了pCS2^+-mpx重组质粒,原位杂交结果显示在24 hpf,mpx基因在斑马鱼胚胎中间细胞团表达;从24 hpf开始,mpx基因在斑马鱼胚胎卵黄囊表面、心脏和轴向脉管系统中高表达,一直持续到72 hpf;尤其是在72 hpf,mpx基因在整个胚胎头部、卵黄囊表面、尾部中弥散表达。结论:mpx基因在斑马鱼心血管系统发育的时间和部位中都有表达,mpx基因可能参与调控斑马鱼心血管系统发育。

关键词：斑马鱼心血管疾病早期胚胎发育 mpx基因全胚胎原位杂交心血管

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红系祖细胞在造血缺陷斑马鱼体内的移植

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中国比较医学杂志 2019年第5期29卷 84-89页

作者：李志操黄波向文碧孙琮杰吴西军周艳华何志旭舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心临床医学院儿科学教研室贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563003

目的评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^(-/-)突变体斑马鱼体内的移植效果。方法收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,利用显微注射... 详细信息

目的评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^(-/-)突变体斑马鱼体内的移植效果。方法收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,利用显微注射技术将gata1^+细胞移植到42hpf的cloche^(-/-)突变体斑马鱼心脏中,采用体视荧光显微镜追踪观察移植后的红系祖细胞在cloche^(-/-)突变体斑马鱼中的表达情况。结果成功分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,并在移植后2 h可观察到携带绿色荧光的gata1^+细胞逐渐增殖扩散且16 h持续有绿色荧光表达。结论红系祖细胞有重建造血的潜力,为进一步研究红系祖细胞移植后的功能鉴定提供实验依据。

关键词：红系祖细胞斑马鱼移植 cloche^-/-突变

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吉祥草水提物对小鼠慢性阻塞性肺疾病的作用和机制

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贵州医科大学学报 2020年第12期45卷 1412-1416页

作者：陈剑波张丽娟邱念念匡梦岚田永昌张观学罗桂林崔燕王涛许键炜沿河土家族自治县人民医院贵州沿河565300 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室&组织工程与干细胞实验中心&贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学护理学院贵州贵阳550004 贵州中医药大学第一附属医院呼吸内科贵州贵阳550001 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵州贵阳550004

目的:探讨吉祥草水提物对小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用及机制。方法:采用随机数字表法将昆明种小鼠其分为正常对照组(n=20)、模型组(n=30)和治疗组(n=20),模型组与治疗组小鼠通过过滤嘴香烟烟熏法建立COPD模型,治疗组在过滤嘴香烟... 详细信息

目的:探讨吉祥草水提物对小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用及机制。方法:采用随机数字表法将昆明种小鼠其分为正常对照组(n=20)、模型组(n=30)和治疗组(n=20),模型组与治疗组小鼠通过过滤嘴香烟烟熏法建立COPD模型,治疗组在过滤嘴香烟烟熏8周后,予小鼠吉祥草水提物灌胃治疗15 d,模型组和正常对照组予以同剂量纯水灌胃;于灌胃15 d后,采用FlexiVent肺功能仪检测小鼠气道阻力(Rrs)、气道弹性阻力(Ers)、动态顺应性(Crs)、主气道阻力(P-3Rn),ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)和基质金属蛋白酶-9(MMP9)等炎症相关因子的含量,肺组织HE染色观察小鼠肺组织病理学变化。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠呼吸系统Rrs增加、Ers增加、Crs降低以及P-3Rn增加(P<0.05或P<0.01),且血清中IL-1β、IL-6、COX-2、PGE2和MMP9升高(P<0.05),说明小鼠COPD模型造模成功;与模型组比较,治疗组小鼠Rrs降低、Ers降低、Crs升高以及P-3Rn降低,并且血清中IL-1β、IL-6、COX-2、PGE2以及MMP9表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);肺脏HE染色显示,与模型组比较,治疗组小鼠气道结构未见明显异常,炎性细胞浸润减少,肺泡结构更完整,大小趋于正常。结论:吉祥草水提物可有效治疗烟熏所致的小鼠COPD症状,其机制可能与抑制炎症因子的表达、修复COPD小鼠肺脏病理损害有关。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性小鼠气道阻力白细胞介素吉祥草水提物

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