检索结果-内蒙古大学图书馆

贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 18-23页

作者：张乙进杨雁竹罗红莫大双舒莉萍江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室&细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室&贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收... 详细信息

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收集不同发育时相的野生斑马鱼胚胎进行全胚胎原位杂交,观察斑马鱼早期胚胎中snx8a的空间表达情况、使用RT-qPCR检测斑马鱼早期发育不同时期snx8a基因的表达情况。结果氨基酸序列比对结果显示斑马鱼Snx8a较Snx8b与人的SNX8同源性更高;对构建的原位杂交探针质粒双酶切鉴定及测序结果显示,构建的探针质粒序列正确、质粒可用;全胚胎原位杂交结果显示,斑马鱼snx8a基因在胚胎一细胞期就开始表达,之后特异表达于斑马鱼头部及尾部造血区;RT-qPCR结果显示,snx8a基因表达逐渐升高,在胚胎12 hpf时达到峰值(P<0.05)。结论斑马鱼snx8a基因为母源性基因,其可能与斑马鱼神经发育和造血发育相关。

关键词：斑马鱼 snx8a基因生物信息学分析全胚胎原位杂交胚胎发育

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CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响

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第三军医大学学报 2021年第8期43卷 683-691页

作者：彭涛周唯君刘含赵砚驰李化张鹏周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室基础医学院免疫学教研室贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因,探讨rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响。方法针对斑马鱼rpl15基因设计并制备gRNA(guide RNA),将gRNA与Cas9蛋白的混合物显微注射到单细胞期斑马鱼受精卵中,提取72 h胚胎基因组DNA,PCR... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因,探讨rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响。方法针对斑马鱼rpl15基因设计并制备gRNA(guide RNA),将gRNA与Cas9蛋白的混合物显微注射到单细胞期斑马鱼受精卵中,提取72 h胚胎基因组DNA,PCR扩增出目的片段,T7E1限制性酶切法检测基因打靶情况,随后进行测序分析确定编辑效果。通过O-dianisidine染色分析血红蛋白合成情况,中性粒细胞染色分析中性粒细胞生成情况,利用Real-time PCR检测p53、mdm2、hsp70和造血相关转录因子基因的表达变化。结果成功制备了rpl15 gRNA,并筛选得到rpl15突变体。rpl15基因敲除的幼鱼出现体长缩短、尾部弯曲、头部和眼睛较小及心包水肿的表型;造血相关谱系染色结果显示rpl15突变体血红蛋白合成明显减少,但中性粒细胞生成未受影响;rpl15突变体p53和mdm2的mRNA表达均显著升高(P<0.01,P<0.05,),α-globin、gata1和hsp70的mRNA表达均显著下调(P<0.01,P<0.05,P<0.05),除红系外的造血相关转录因子的mRNA表达与对照组相比均无明显差异。结论利用CRISPR/Cas9技术成功编辑了斑马鱼rpl15基因,突变体产生了类似先天性纯红细胞再生障碍性贫血疾病的表型。同时表明p53与hsp70可能参与调控突变体表型的形成。

关键词： CRISPR/Cas9 rpl15基因 DBA 斑马鱼

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Wnt7a/β-连环蛋白/自身免疫调节因子信号通路参与1型糖尿病的发生

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解剖学报 2022年第4期53卷 453-460页

作者：李远迪马静怡余佳珊何可可文廷浩高杰李红苏敏胡蓉贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵阳550025

目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组... 详细信息

目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组及16周发病组,每组20只;非空腹血糖值连续2次≥11.1 mmol/L视为发生T1D。胰腺HE染色观察胰岛炎发生情况,抗Ins、CD45免疫组织化学染色显示胰岛β细胞或浸润炎性细胞;Western blotting和Real-time PCR检测胸腺Wnt7a、β-catenin、AIRE、Ins、GAD67蛋白水平和mRNA表达;流式细胞术分析胸腺T细胞比例。结果1.随着T1D发生,胰岛组织结构破坏,大量淋巴细胞浸润,残存胰岛细胞减少;Ins^(+)胰岛β细胞周围见大量CD45^(+)细胞聚集。2.随年龄的增加,胸腺Wnt7a、β-连环蛋白(catenin)、AIRE、Ins和GAD67蛋白水平和mRNA表达降低;同周龄发病组小鼠与未发病组小鼠相比,胸腺Ins表达下降。3.与3周组相比,16周未发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例降低;16周发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例升高,CD4、CD8双阳性T细胞比例降低。结论Wnt7a/β-catenin信号通路可能通过调控AIRE表达,下调T1D相关TSAs表达,参与T1D发生发展。

关键词： 1型糖尿病自身免疫调节因子 Wnt信号通路免疫印迹法实时定量聚合酶链反应 NOD/Ltj小鼠

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KLHL40基因变异致双胎同患杆状体肌病8型并文献复习

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中华围产医学杂志 2023年第12期26卷 1007-1014页

作者：赵珣蔡姣吴莎马丽胡扬吴倩熊伟王榜珍杨萌婷许键炜冯占辉陈晓霞陈茂琼贵州医科大学附属医院新生儿科贵阳550004 细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室成体干细胞转化研究重点实验室(中国医学科学院)贵阳550000 贵州医科大学附属医院科研处贵阳550004

目的探讨KLHL40基因变异致杆状体肌病8型(nemaline myopathy type 8,NEM8)的临床、遗传学和病理学特点。方法回顾性分析2022年7月贵州医科大学附属医院收治的双胎NEM8患儿的临床资料、家系基因测序及骨骼肌病理学资料。以“杆状体肌病8... 详细信息

目的探讨KLHL40基因变异致杆状体肌病8型(nemaline myopathy type 8,NEM8)的临床、遗传学和病理学特点。方法回顾性分析2022年7月贵州医科大学附属医院收治的双胎NEM8患儿的临床资料、家系基因测序及骨骼肌病理学资料。以“杆状体肌病8型”“线状体肌病8型”和“KLHL40”为关键词检索中国知网、维普中文期刊数据库、万方数据库和中华医学期刊全文数据库,并以“nemaline myopathy 8”和“KLHL40”为关键词检索PubMed、Embase和Web of Science数据库。检索时间为2007年1月至2023年2月。连同本单位收治的病例,分析所获病例的临床、遗传学及骨骼肌病理特点。对数据资料采用描述性统计分析。结果(1)病例资料:本单位收治的患儿(Ⅳ-2和Ⅳ-3)系异卵双胎,第2胎第2产。患儿母亲为体外受精-胚胎移植术受孕,分娩胎龄37周+1。患儿外祖母有唇、腭裂。第1胎(Ⅳ-1)左侧耳廓缺如,双手指末节挛缩,双足“马蹄”内翻足,因呼吸衰竭,于生后2 h死亡。2例胎儿期存在水肿,胎动延迟,其中一胎右足内翻;均有产时窒息;临床表现均为全身肌无力、呼吸衰竭、吞咽困难、多发关节挛缩及骨折。患儿生后以呼吸机维持生命53 d,家属放弃治疗,患儿死亡。全外显子组测序发现2例患儿为KLHL40基因c.1779G>T(p.W593C)纯合变异,其父母亲为KLHL40基因c.1779G>T(p.W593C)杂合变异,均为未报道位点。骨骼肌病理提示肌纤维纤细而圆,呈胎儿型,未见杆状体。(2)文献复习:检索到文献15篇、病例27例,连同本单位的2例,共29例NEM8病例,其中21例活产,8例引产;7例(24.1%)有阳性家族史;19例(65.5%)胎儿期存在异常,包括胎动障碍、羊水增多、关节挛缩及胎儿水肿。活产的21例患儿中,20例出生时窒息,21例生后发生呼吸衰竭,20例全身肌无力,19例吞咽困难。29例中,17例(58.6%)为KLHL40基因纯合变异,12例(41.4%)为复合杂合变异。c.1516A>C(***506Pro)变异检出频率最高[21例次(72.4%)],c.602G>A(***201*)次之[5例次(17.2%)]。29例中的15例进行了骨骼肌病理检查,均提示肌纤维大小及形态异常,未见正常肌纤维;其中10例可见杆状体。结论对于胎儿期出现胎动异常、羊水增多、关节畸形、胎儿水肿,出生时不能建立呼吸,生后全身肌无力、呼吸衰竭、吞咽不能、多关节挛缩及骨折的患儿,需警惕NEM8,尽早完善基因检测。若KLHL40基因纯合或复合杂合变异,骨骼肌病理显示肌纤维大小及形态异常,不论是否存在杆状体,均可明确诊断。

关键词：肌病,杆状体肌蛋白质类遗传变异双生

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下调rpl15基因的表达抑制斑马鱼早期造血的发育

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第三军医大学学报 2021年第17期43卷 1611-1618页

作者：周唯君周栋珍彭涛杨懿琛周艳华李化舒莉萍何志旭贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室基础医学院免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rp... 详细信息

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rpl15的表达,通过qRT-PCR和Western blot技术验证下调rpl15基因表达的有效性。使用体式显微镜分别观察注射rpl15 MO(MO)组与野生型(WT)组的发育情况。O-dianisidine染色检测血红蛋白表达的情况,qRT-PCR检测红系特异性转录因子hbae3、hbbe1的表达变化。全胚原位杂交和qRT-PCR检测红系特异性转录因子gata1、髓系转录因子pu.1、粒系转录因子mpo、定向造血标志转录因子runx1和c-myb、原始祖细胞造血标志物scl和lmo2等早期造血发育过程的关键转录因子的表达变化。TUNEL实验检测造血组细胞的凋亡变化。结果显微注射rpl15 MO能显著下调斑马鱼rpl15的表达,与WT组相比,MO组表现出体节弯曲、发育迟缓、心包水肿等异常表型。MO组血红蛋白合成量与hbae3、hbbe1的表达量相较于WT组明显减少(P<0.05)。原位杂交及qRT-PCR结果表明,gata1的表达明显减少(P<0.05),pu.1、mpo、runx1、c-myb的表达无明显变化,scl的表达明显减少(P<0.01),lmo2的表达无明显变化。TUNEL实验显示造血祖细胞的凋亡无明显变化。结论下调rpl15的表达抑制了斑马鱼早期的造血发育,并可能与gata1和scl表达明显降低有关。

关键词： rpl15 造血发育斑马鱼吗啉代反义寡核苷酸

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二氢杨梅素对Bloom解旋酶结构和生物学活性的影响

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中国药理学通报 2019年第10期35卷 1453-1460页

作者：刘金河张望明晏文涛许键炜葛章文贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省人民医院检验科贵州贵阳550002 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检... 详细信息

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检测等方法和技术研究DMY对BLM解旋酶的生物学活性的影响。结果圆二色谱和紫外光谱结果显示,DMY能与BLM解旋酶结合,且有1个结合位点;在0~25μmol·L^-1浓度范围内,DMY对BLM解旋酶的二级结构的干扰能力成正相关,在25~75μmol·L^-1浓度范围内则相反。荧光偏振和自由磷检测实验显示,DMY能结合在BLM解旋酶上,进而抑制BLM解旋酶的解链活性。结论DMY能够竞争性结合于BLM解旋酶的DNA结合位点上,改变BLM解旋酶的空间结构,从而抑制BLM解旋酶与DNA的结合,进而抑制BLM解旋酶的生物学活性。

关键词：二氢杨梅素 Bloom解旋酶生化活性构象二级结构圆二色谱荧光偏振

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RPL15在K562细胞向红系分化过程中的功能和机制研究

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天津医药 2021年第7期49卷 688-693页

作者：彭涛周唯君周栋珍李化兰金芝李丹周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫教研室550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室

目的研究RPL15基因在K562细胞向红系诱导分化过程中的表达变化,并确定其对珠蛋白表达及红系分化的影响。方法用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,采用实时荧光定量PCR(q PCR)及Western blot法检测RPL15在K562红系分化过程中的表达情况... 详细信息

目的研究RPL15基因在K562细胞向红系诱导分化过程中的表达变化,并确定其对珠蛋白表达及红系分化的影响。方法用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,采用实时荧光定量PCR(q PCR)及Western blot法检测RPL15在K562红系分化过程中的表达情况。利用RNA干扰(RNAi)技术抑制K562细胞中RPL15的表达,进而通过四甲基联苯胺染色、q PCR及流式细胞技术检测K562细胞中血红蛋白、红系分化相关基因以及CD235a和CD71表达的变化。结果在K562细胞向红系分化过程中,RPL15的m RNA及蛋白水平均呈先升高后下降趋势。与对照组相比,干扰RPL15表达后,向红系分化24、48和72 h的K562细胞血红蛋白染色阳性率均明显下降;向红系分化的K562细胞中α-、β-、ε-、γ-珠蛋白及红系分化相关基因GATA1和HSP70相对表达量均明显下调(均P<0.05);而抑癌基因P53的m RNA表达水平显著上调(P<0.01)。同时CD235a^(+)CD71^(+)K562细胞比例在RPL15干扰后显著降低(P<0.01)。结论抑制RPL15表达可抑制K562细胞向红系分化,提示RPL15正调控红系分化过程。同时P53相关通路、GATA1及HSP70可能参与了RPL15对红系分化的调控过程。

关键词： K562细胞核糖体蛋白质类 GATA1转录因子基因 p53 HSP70热休克蛋白质类 RPL15基因红系分化

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解剖学报 2023年第5期54卷 538-545页

作者：何可可李远迪文廷浩朱婕高杰胡蓉韩锋苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵阳550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵阳550025 贵州医科大学附属医院神经外科贵阳550004

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方... 详细信息

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。

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ERMAP改善MOG特异性TCR转基因小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎

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中国免疫学杂志 2024年

作者：朱婕宋雯茜陈柯竹李远迪高杰胡蓉苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州医科大学转化医学研究中心贵州省高等学校自身免疫病研究重点实验室贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室，贵州省再生医学重点实验室，中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室

目的：利用MOG特异性TCR转基因小鼠(2D2TCR转基因小鼠)建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型，探讨外源性ERMAP对MOG35-55诱导的2D2TCR转基因小鼠脾脏中T细胞的影响。方法：2组(每组9只)2D2TCR转基因小鼠(对照组使用Control-Ig治疗，... 详细信息

目的：利用MOG特异性TCR转基因小鼠(2D2TCR转基因小鼠)建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型，探讨外源性ERMAP对MOG35-55诱导的2D2TCR转基因小鼠脾脏中T细胞的影响。方法：2组(每组9只)2D2TCR转基因小鼠(对照组使用Control-Ig治疗，实验组使用ERMAP-Ig融合蛋白治疗)建立EAE模型。根据每日临床评分(DAI)和HE、LFB染色结果评估MOG35-55诱导的小鼠EAE脊髓严重程度；流式细胞术检测脾脏内自身反应性T细胞(CD4+Vα3.2+Vβ11+)、T细胞增殖活化指标CD69(CD4+Vα3.2+Vβ11+CD69+)和Ki67(CD4+Vα3.2+Vβ11+Ki67)、Treg细胞(CD4+Vα3.2+Vβ11+CD25+Foxp3+)以及Th17细胞(CD4+Vα3.2+Vβ11+IL-17A+)；qRT-PCR检测脊髓组织中IL-17A、IL-6、IFN-γ 、TGF-β的相对表达。结果：在MOG35-55诱导的2D2TCR转基因小鼠EAE模型中，ERMAP-Ig融合蛋白治疗组脊髓出现较轻的炎性浸润和脱髓鞘，小鼠脾脏中自身反应T细胞比例减少，T细胞的活化及增殖比例减少，Treg比例增加，抑制Th17细胞分化，脊髓中更少的炎症细胞聚集及细胞因子产生，抗炎因子相对表达量增加。结论：ERMAP可能通过抑制T细胞增殖活化，促进Treg细胞生成来参与2D2TCR转基因小鼠EAE发生发展。

关键词：红细胞膜相关蛋白多发性硬化症自身反应性T细胞 2D2TCR 实验性自身免疫性脑脊髓炎

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Tet1蛋白对HEK293T细胞增殖、周期及凋亡的影响

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中国比较医学杂志 2020年第6期30卷 69-75页

作者：莫晶杨红兰刘含金皎范安然张鹏周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室贵州医科大学免疫教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞... 详细信息

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的Tet1CD稳转细胞系293T(Tet1CD)。通过Western blot检测Tet1蛋白的表达;通过DNA dot blot检测细胞基因组中5hmC的含量,通过流式细胞术检测Tet1CD蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测Tet1CD蛋白对细胞增殖的影响。结果成功建立了可诱导Tet1CD过表达的HEK293T细胞系293T(Tet1CD);Western blot结果显示诱导后细胞内Tet1CD蛋白表达上升;DNA dot blot结果显示过表达Tet1CD蛋白细胞内5hmC含量升高;流式细胞术结果显示,Tet1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0. 05)及增加G2时期细胞比例(P<0. 05);细胞计数结果显示,Tet1CD过表达抑制细胞增殖(P<0. 0001)。结论 Tet1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖。

关键词：表观遗传 Tet蛋白细胞周期细胞凋亡细胞增殖

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