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UPLC-Q-TOF-MS/MS分析荭草花有效组分在大鼠血清和尿液中的原型成分及其代谢产物

中国中药杂志 2019年第10期44卷 2156-2162页

作者：陈思颖夏涛郑林李月婷巩仔鹏黄勇李勇军赵平贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

应用超高效液相色谱串联电喷雾飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析SD大鼠灌胃给予荭草花有效组分后所得血清和尿液中的原型成分及代谢产物。采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),以0. 1%甲酸水(A)-0. 1%... 详细信息

应用超高效液相色谱串联电喷雾飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析SD大鼠灌胃给予荭草花有效组分后所得血清和尿液中的原型成分及代谢产物。采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),以0. 1%甲酸水(A)-0. 1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱。在电喷雾正负离子模式下获取生物样品中化学成分的质谱数据,通过比较空白样品、给药样品和两者的差异图谱确认灌胃后大鼠血清和尿液中原型成分及其代谢产物。利用TOF/MS得到的准确相对分子质量,多级质谱裂解信息,结合对照品及相关文献报道结果对比,对尿液和血清中荭草花原型成分和代谢产物进行鉴定。结果发现,在大鼠血清、尿液中分别检测到12,26个代谢产物(含交叉成分),代谢途径主要包括以氢化还原、开环裂解、羟基化、甲基葡萄糖醛酸化、葡萄糖醛酸化、硫酸化等。该实验建立的方法可靠、有效,可用于荭草花有效部位在血清和尿液中的代谢研究,研究结果为该药材今后的药效物质基础研究提供了理论参考。

关键词：荭草花有效组分 UPLC-Q-TOF-MS/MS 代谢产物代谢途径

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白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性研究

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中国中药杂志 2019年第1期44卷 167-174页

作者：杨淑婷潘洁陆苑梅朝叶刘亭黄勇王永林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

为研究白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明白及有效部位的口服吸收机制。该实验采用Caco-2细胞单层细胞吸收模型,通过UPLC-Q-TOF分析白及有效部位在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-TQD分析方法测定白及有效... 详细信息

为研究白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明白及有效部位的口服吸收机制。该实验采用Caco-2细胞单层细胞吸收模型,通过UPLC-Q-TOF分析白及有效部位在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-TQD分析方法测定白及有效部位主要成分在Caco-2细胞中的含量,分别考察时间、浓度、pH和P-gp抑制剂对各成分的吸收影响。经过UPLC-Q-TOF指认白及有效部位中的主要成分B6,B12,B14,B17,B19,B23,研究发现该6个成分能够摄取进入Caco-2细胞中,并且在Caco-2细胞中的吸收呈现浓度依赖性。其中B12,B14的吸收在0～180 min为上升趋势,未呈现饱和,B6,B17,B19,B23在60 min后吸收趋于饱和;各成分在偏酸性或酸性条件下吸收较好,其中B6在pH 6.0环境中吸收较好,其余成分B12,B14,B17,B19,B23在pH 4.0环境中吸收较好;且加入维拉帕米P-gp抑制剂后和空白相比,B6,B12的吸收无差异,而B14,B17,B19,B23的Caco-2细胞摄取量增加,但无显著性差异,说明B6等6个成分的摄取过程中没有P-gp的参与,即B6等6个成分不是P-gp底物。由此结果可知白及有效部位主要成分进入Caco-2细胞以被动扩散为主,且吸收过程不受P-糖蛋白的外排作用影响。

关键词：白及 Caco-2细胞 UPLC-Q-TOF UPLC-TQD 被动扩散 P-gp

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不同粒径天麻粉中有效成分的体外溶出度比较

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中国实验方剂学杂志 2019年第9期25卷 124-129页

作者：刘帆陈亭亭陈艳巩仔鹏刘智王爱民贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室民族药与中药开发应用教育部工程研究中心药学院贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵阳550004

目的:研究不同粒径天麻粉末中有效成分(天麻素,对羟基苯甲醇,巴利森苷A,巴利森苷B,巴利森苷C)的体外溶出行为差异,为天麻超微粉的应用提供实验依据。方法:采用桨法对天麻粉末在不同溶出介质(水、人工胃液、人工肠液)中溶出度进行测定,利... 详细信息

目的:研究不同粒径天麻粉末中有效成分(天麻素,对羟基苯甲醇,巴利森苷A,巴利森苷B,巴利森苷C)的体外溶出行为差异,为天麻超微粉的应用提供实验依据。方法:采用桨法对天麻粉末在不同溶出介质(水、人工胃液、人工肠液)中溶出度进行测定,利用HPLC测定不同粒径天麻粉中上述5种有效成分的溶出度,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,柱温40℃,检测波长220 nm。结果:在水中、人工肠液介质中,天麻细粉、极细粉中5种有效成分的溶出速率较天麻3种超微粉低;在人工胃液中,天麻超微粉中天麻素和对羟基苯甲醇的溶出速率较其他粉体高,但天麻超微粉中巴利森苷A的溶出速率较其他粉体低。结论:适度的微粉化能促进天麻粉末中有效成分的溶出,并不是越细越好,有效成分的溶出行为还受溶出介质的影响,可为天麻粉末临床应用时选择最佳粒径提供实验依据。

关键词：天麻超微粉有效成分体外溶出度天麻素对羟基苯甲醇巴利森苷类

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海洋微生物源活性产物的发酵条件优化研究进展

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天然产物研究与开发 2019年第11期31卷 2015-2023页

作者：左明星许言超王立平贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州省天然药物工程研究中心贵阳550014 贵州医科大学药学院贵阳550025

海洋微生物因其独特的生境和代谢途径,能够产生结构新颖且具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和免疫调节等多种生物活性的代谢产物,从而成为新活性化合物的重要源泉,并在新药物开发领域中越来越受到重视。但微生物来源的活性产物产量普遍较低,需... 详细信息

海洋微生物因其独特的生境和代谢途径,能够产生结构新颖且具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和免疫调节等多种生物活性的代谢产物,从而成为新活性化合物的重要源泉,并在新药物开发领域中越来越受到重视。但微生物来源的活性产物产量普遍较低,需要通过发酵优化提高其产量,为后续深入研究和开发提供物质基础。因此,本文根据化学分类介绍了来源于海洋微生物的活性化合物及其发酵条件优化,以期为其他海洋微生物资源的挖掘与利用提供相应的参考。

关键词：海洋微生物活性代谢产物发酵条件优化

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响应面法优化白及多糖酶解工艺及其抗氧化、免疫活性研究

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食品研究与开发 2020年第10期41卷 128-135页

作者：周美万科马风伟王瑜李春燕梁光焰宋智琴潘卫东王道平贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550014 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550014 贵阳学院食品与制药工程学院贵州贵阳550005 贵州省农业科学院现代中药材研究所贵州贵阳550006

该试验利用酶解法对白及多糖进行酶解,系统考察单因素对结果影响后,利用响应面法对酶添加量(%)、酶解温度(℃)、酶解时间(min)、pH值进行优化,优化出最佳酶解工艺。利用多糖对DPPH·、ABTS^+·和·OH的清除作用考察其抗氧... 详细信息

该试验利用酶解法对白及多糖进行酶解,系统考察单因素对结果影响后,利用响应面法对酶添加量(%)、酶解温度(℃)、酶解时间(min)、pH值进行优化,优化出最佳酶解工艺。利用多糖对DPPH·、ABTS^+·和·OH的清除作用考察其抗氧化活性;通过小鼠巨噬细胞(RAW264.7)细胞模型评价其体外免疫活性。结果表明:白及多糖最佳酶解工艺为:酶添加量为1.4%,温度为54.7℃,时间为87.5 min,pH值为5.4;在此工艺条件下白及多糖提取率为58.32%。白及多糖具有清除DPPH·、ABTS^+·和·OH的作用,表明其具有较好的抗氧化活性;白及多糖能有效促进免疫细胞增殖,可显著促进RAW264.7细胞内抗肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌,表明其具有较好的免疫活性。

关键词：白及多糖响应面法酶解工艺抗氧化活性免疫活性

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合欢花HPLC指纹图谱模式识别及含量测定研究

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中国民族民间医药 2020年第18期29卷 46-51页

作者：李银聂雨杉彭潇马雪潘洁陆苑李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立合欢花药材HPLC指纹图谱分析方法,结合模式识别与含量测定为其质量控制提供科学依据。方法:采用HPLC法,Waters CORTECS C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长27... 详细信息

目的:建立合欢花药材HPLC指纹图谱分析方法,结合模式识别与含量测定为其质量控制提供科学依据。方法:采用HPLC法,Waters CORTECS C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长270 nm。通过相似度分析、主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析对16批合欢花指纹图谱进行评价,寻找合欢花的主要差异性化学成分,并测定其含量。结果:建立了合欢花药材的指纹图谱,确定12个共有峰,并指认了其中3个共有峰,16批药材相似度均大于0.90。根据聚类分析结果,可将16批药材聚为2类,通过主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析确定槲皮苷为合欢花的主要差异性化学成分,方法学考察符合规定,RSD均小于3.0%。结论:该方法精密度高、重现性好,可为合欢花药材质量控制与评价提供参考。

关键词：合欢花高效液相色谱法指纹图谱模式识别含量测定质量控制

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艾纳香中1个新倍半萜内酯及其细胞毒活性研究

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中草药 2019年第14期50卷 3274-3278页

作者：胡永段玉书苑春茂黄烈军李霞顾玮郝小江贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550014 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550014 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州宏宇药业有限公司贵州贵阳550018

目的研究黔产艾纳香Blumea balsamifera叶中的化学成分并对其进行细胞毒活性评价。方法使用硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法分离纯化艾纳香中化学成分,以宫颈癌(HeLa)细胞株、乳腺腺癌(MCF-7)细胞株、肺腺癌(A549... 详细信息

目的研究黔产艾纳香Blumea balsamifera叶中的化学成分并对其进行细胞毒活性评价。方法使用硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法分离纯化艾纳香中化学成分,以宫颈癌(HeLa)细胞株、乳腺腺癌(MCF-7)细胞株、肺腺癌(A549)细胞株、胃癌(MGC-803)细胞株、结肠癌(COLO-205)细胞株为供试细胞株,并采用MTT法对分离纯化的化合物进行细胞毒活性筛选。结果从艾纳香中分离得到2个倍半萜内酯,通过波谱数据分析鉴定为艾纳香烯N(1)和艾纳香烯F(2)。细胞毒活性筛选结果表明化合物1对供试的5种细胞株均具有明显的抑制活性,其半数抑制浓度(IC50)值为48.730~97.907μmol/L;化合物2对乳腺腺癌MCF-7细胞株也具有一定的抑制活性,IC50值为91.188μmol/L。结论化合物1为新的倍半萜内酯类化合物;活性筛选结果表明2个倍半萜内酯类化合物都具有一定的细胞毒活性。

关键词：艾纳香新倍半萜内酯化合物艾纳香烯N 细胞毒活性 MTT法

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三七花药材质量控制方法的建立

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贵州医科大学学报 2020年第12期45卷 1390-1395页

作者：朱晓青刘春花龙庆德王爱民李勇军王永林陆苑贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的:建立三七花的质量控制方法,提高其质量可控性。方法:对5批次三七花外观形态特征进行观察,并对其表面特征和粉末特征进行显微鉴别;以三七花自身为对照建立薄层色谱法(TLC)进行鉴别,按2015版《中国药典》中方法测定三七花的水分、总... 详细信息

目的:建立三七花的质量控制方法,提高其质量可控性。方法:对5批次三七花外观形态特征进行观察,并对其表面特征和粉末特征进行显微鉴别;以三七花自身为对照建立薄层色谱法(TLC)进行鉴别,按2015版《中国药典》中方法测定三七花的水分、总灰分及醇溶性浸出物。结果:三七花呈不规则的球形或半球形,表面灰绿色,花梗基部具鳞片状苞片,花萼5齿裂,花瓣5,气清香,味微苦、甘;显微鉴别中观察三七花粉末呈黄绿色,表皮细胞呈类圆形、排列紧密,气孔在表皮细胞中呈不定式、导管多为螺纹,花粉粒呈圆球形、外壁有疣状雕纹、3个萌发孔、非腺毛甚多、单细胞或多细胞、长29~138μm,树脂道呈黄色,花冠顶端表皮细胞呈乳头状短绒毛突起;TLC中三七花在正丁醇-乙酸丁酯-水(4∶1∶5,上层)展开效果最好,展开效果受湿度、温度影响小;在确定的方法中样品稳定性好,样品TLC斑点明显,分离度好,色谱带清晰;5批三七花水分平均值9.63%,总灰分平均值7.41%,醇溶性浸出物平均值30.93%。结论:建立的方法可用于三七花的鉴别和质量控制。

关键词：色谱法,薄层三七花质量标准显微特征水分总灰分醇溶性浸出物

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不同粒径天麻超微粉对脑缺血再灌注脑损伤大鼠的保护作用

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中国实验方剂学杂志 2019年第8期25卷 71-76页

作者：陈亭亭刘帆陈艳巩仔鹏陶陶王爱民贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州省人民医院贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:研究不同粒径的天麻超微粉对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,为超微粉技术在天麻相关产品中的应用提供理论依据。方法:SD大鼠随机分为假手术组,模型组,天麻超微粉Ⅰ组(1. 2 g·kg-1),天麻超微粉Ⅱ组(1. 2 g·kg-1)... 详细信息

目的:研究不同粒径的天麻超微粉对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,为超微粉技术在天麻相关产品中的应用提供理论依据。方法:SD大鼠随机分为假手术组,模型组,天麻超微粉Ⅰ组(1. 2 g·kg-1),天麻超微粉Ⅱ组(1. 2 g·kg-1),天麻超微粉Ⅲ组(1. 2 g·kg-1),阳性药尼莫地平组(12. 6 g·kg-1),连续口服给药7 d后造模。采用单侧线栓法闭塞中动脉1 h后再灌注24 h,制备局灶性缺血再灌注损伤模型,2,3,5-氯化二苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑组织梗死面积,比色法测定脑组织匀浆液和血清中的超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性,液相色谱串联质谱法(LC/MSMS)记录脑海马中谷氨酸(Glu),天冬氨酸(Asp),甘氨酸(Gly)含量变化。结果:与假手术组比较,模型组出现显著的神经行为学功能缺失体征(P <0. 01),脑梗死面积显著增加(P <0. 01)。与模型组比较,天麻超微粉Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组均能明显改善神经行为学功能(P <0. 05),明显降低脑梗死面积比,Glu,Asp,MDA含量和NOS活性(P <0. 05,P <0. 01),明显升高SOD活性和Gly含量(P <0. 05)。与天麻超微粉Ⅰ组比较,天麻超微粉Ⅲ组SOD活性和Gly含量明显高于超微粉Ⅰ组(P <0. 05),Glu,Asp,MDA含量和NOS活性均明显低于超微粉Ⅰ组(P <0. 05),天麻超微粉Ⅱ组则均无显著性变化。结论:不同粒径的天麻超微粉均对脑缺血再灌注损伤具有预防保护作用,但天麻超微粉Ⅲ较天麻超微粉Ⅰ,Ⅱ预防保护作用较明显,表明天麻超微粉对大鼠大脑中动脉缺血再灌注的脑保护作用与其粒径大小具有一定相关性。

关键词：天麻超微粉脑缺血再灌注脑保护作用

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玉叶金花质量控制研究

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贵州医科大学学报 2020年第4期45卷 408-414页

作者：秦兰刘亭孙佳陆苑潘洁王永林李勇军林昌虎刘春花贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立玉叶金花的质量控制方法。方法:采集来自贵州和广东的13批次玉叶金花药材,采用显微鉴别方法鉴定玉叶金花叶表面特征和粉末特征,采用薄层色谱法对玉叶金花真实性进行鉴定;按照《中国药典》2015年版通则规定对玉叶金花水分、总... 详细信息

目的:建立玉叶金花的质量控制方法。方法:采集来自贵州和广东的13批次玉叶金花药材,采用显微鉴别方法鉴定玉叶金花叶表面特征和粉末特征,采用薄层色谱法对玉叶金花真实性进行鉴定;按照《中国药典》2015年版通则规定对玉叶金花水分、总灰分及醇溶性浸出物进行研究。结果:玉叶金花的显微特征明显,叶上表皮细胞呈类多角形、垂周壁增厚、气孔少见,叶下表皮细胞不规则形状、垂周壁波状弯曲、气孔为平轴式、非腺毛多见;粉末显微特征中非腺毛众多、表面光滑、导管多为具缘纹孔、偶见螺纹导管,石细胞众多、呈长方形、方形及类圆形;薄层色谱中主斑点清晰、分离好,斑点颜色和位置与对照药材一致;13批次玉叶金花的水分、总灰分及醇溶性浸出物存在差异。结论:本研究建立的玉叶金花的质量控制研究方法专属性强,稳定性和重复性良好,为该药材的真实性鉴定和质量评价提供了参考依据。

关键词：色谱法,薄层质量控制玉叶金花显微特征一般检查醇溶性浸出物

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