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参芎葡萄糖注射液通过激活PI3K/AKT通路拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡

中国中药杂志 2019年第17期44卷 3773-3779页

作者：陆定艳李靖孙佳薛维娜何彬李勇军王永林林昌虎刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,An... 详细信息

探究参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H2O2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin/PI法检测细胞凋亡率,基因芯片技术检测细胞表达谱的变化,荧光定量PCR技术(qRTPCR)检测PIK3CA,Bcl-2,Bax,caspase-3,GAPDH mRNA的表达,Western blot法检测PIK3CA,AKT,P-AKT,Bcl-2,Bax,caspase-3蛋白的表达水平,用试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和丙二醛(MDA)含量。结果显示,不同浓度的参芎葡萄糖注射液可显著提高H2O2诱导的H9c2细胞存活率(P<0. 01),明显逆转H2O2诱导的细胞凋亡情况(P<0. 01)。芯片实验发现,参芎葡萄糖注射液处理后,H9c2细胞有138个基因表达发生改变,其中与PI3K/AKT通路相关的PIK3CA差异表达倍数较高,为3. 59倍。qRT-PCR和Western blot结果表明,参芎葡萄糖注射液可下调H2O2处理后H9c2细胞中caspase-3的mRNA和蛋白表达水平(P<0. 01),上调PIK3CA和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平(P<0. 01),并上调AKT蛋白的磷酸化水平(P<0. 01)。在PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用下,参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2细胞损伤作用显著降低。结果表明,参芎葡萄糖注射液可能是通过调控PI3K/AKT信号通路来抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。

关键词：参芎葡萄糖注射液 H9c2细胞细胞凋亡基因芯片 PI3K/AKT通路

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一种高效合成二氢黄酮类化合物的方法

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云南大学学报（自然科学版） 2019年第4期41卷 786-790页

作者：杨常碧杨礼寿杨小生贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室药学院贵州贵阳550016 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550016

提出了一种以2’-羟基查尔酮及其衍生物为原料,以乙醇作溶剂,采用多聚磷酸(PPA)/浓盐酸体系高效合成二氢黄酮类化合物的方法.对化合物a进行了条件优化,考察了反应时间、PPA的物质的量、V(浓盐酸)/V(乙醇)对化合物a产率的影响,得出合成... 详细信息

提出了一种以2’-羟基查尔酮及其衍生物为原料,以乙醇作溶剂,采用多聚磷酸(PPA)/浓盐酸体系高效合成二氢黄酮类化合物的方法.对化合物a进行了条件优化,考察了反应时间、PPA的物质的量、V(浓盐酸)/V(乙醇)对化合物a产率的影响,得出合成化合物a的最优条件:反应物量为30.0 mg (0.1 mmol)、PPA的物质的量6.0 mmol,V(浓盐酸)/V(乙醇)=1/1,氮气保护下回流反应3 h.采用该方法以产率90.2%~93.6%合成得到5个二氢黄酮类化合物(a^f),所有化合物结构通过MS、1H NMR、13C NMR进行表征.该方法具有反应条件温和、反应时间短、产率高的优点.

关键词： 2’-羟基查尔酮二氢黄酮类化合物多聚磷酸浓盐酸合成

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三豆饮豆渣膳食纤维提取工艺优化研究

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广东农业科学 2019年第12期46卷 110-121页

作者：罗忠圣杨丹刘永琴邓强徐昌艳覃容贵贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550025 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州贵阳550014 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

【目的】以三豆饮豆渣为原料制备膳食纤维,利用单因素试验和响应面法相结合优化制备工艺条件。【方法】通过在酸提单因素试验基础上,采用响应面法以料液比、提取时间、提取温度、提取pH为因素,豆渣膳食纤维含量为响应值,以获得最优酸提... 详细信息

【目的】以三豆饮豆渣为原料制备膳食纤维,利用单因素试验和响应面法相结合优化制备工艺条件。【方法】通过在酸提单因素试验基础上,采用响应面法以料液比、提取时间、提取温度、提取pH为因素,豆渣膳食纤维含量为响应值,以获得最优酸提工艺。基于最优酸提工艺条件下提取过的豆渣,在碱提单因素试验基础上,采用响应面法以料液比、提取时间、提取温度、提取pH为因素,豆渣膳食纤维含量为响应值,以获得最优碱提工艺。【结果】最优酸提工艺为:料液比(1∶25)、提取时间2.8 h、提取温度87℃、提取pH 4.6。酸提后膳食纤维含量为59%,比原豆渣膳食纤维含量增加14.4%;最优碱提工艺为:料液比(1∶35)、提取时间4 h、提取温度56℃、提取pH 11.8。碱提后膳食纤维含量为75.7%,比原豆渣膳食纤维含量增加30.1%。【结论】经过工艺验证,豆渣中膳食纤维含量实测值和预测值基本一致,该工艺稳定可行,对三豆饮豆渣循环利用具有重要意义。

关键词：三豆饮豆渣响应面法膳食纤维提取工艺酸碱提取

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珠芽景天黄酮类化学成分研究

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中国药业 2020年第17期29卷 6-9页

作者：雷艳姚成芬马雪聂雨杉杨畅李月婷李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心·省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的分析珠芽景天的黄酮类化学成分。方法采用D101型大孔树脂柱层析、反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F凝胶柱层析等色谱技术分离珠芽景天70%乙醇提取物,并运用质谱和核磁共振谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。... 详细信息

目的分析珠芽景天的黄酮类化学成分。方法采用D101型大孔树脂柱层析、反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F凝胶柱层析等色谱技术分离珠芽景天70%乙醇提取物,并运用质谱和核磁共振谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果共分离得到21个黄酮类化合物,首次分离得到的化合物为槲皮素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(1)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(2)、木犀草苷(3)、柯伊利素-7-O-葡萄糖苷(4)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(5)、当药黄素(6)。结论化合物1~6为首次从珠芽景天中分离得到,其中化合物4~6为首次从景天属植物中分离得到。

关键词：珠芽景天黄酮类化合物结构鉴定核磁共振光谱

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贵州省9批不同产地盾叶秋海棠药材中铅、镉、砷、汞及铜的测定

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贵州医科大学学报 2020年第6期45卷 633-637页

作者：李小双刘理燕吴莹莹马雪陆苑潘洁李勇军贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550025

目的:建立药材盾叶秋海棠中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)及铜(Cu)的测定方法。方法:采用压力罐消解法对贵州省不同产地9批盾叶秋海棠进行前处理,采用原子吸收光谱法测定Pb、Cd、Cu、Hg及As元素的含量,并参照《药用植物及制剂进出口... 详细信息

目的:建立药材盾叶秋海棠中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)及铜(Cu)的测定方法。方法:采用压力罐消解法对贵州省不同产地9批盾叶秋海棠进行前处理,采用原子吸收光谱法测定Pb、Cd、Cu、Hg及As元素的含量,并参照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》判定9批盾叶秋海棠5个元素超标情况。结果:原子吸收光谱法测定盾叶秋海棠中Pb、Cd、Cu、Hg及As元素的方法均有良好的线性关系(r> 0. 999),平均回收率分别为79. 03%、73. 82%、87. 28%、88. 66%及92. 67%;参照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,两批药材分别出现了汞、砷超标的情况。结论:本研究建立的盾叶秋海棠中Pb、Cd、As、Hg及Cu测定方法简便、准确及重复性好,可为盾叶秋海棠的质量控制研究提供理论参考。

关键词：中草药重金属铅镉砷汞铜质量控制盾叶秋海棠原子吸收光谱仪

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PCR法快速鉴别川贝母真伪

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药物分析杂志 2019年第10期39卷 1844-1851页

作者：刘香香李靖张煜彬彭高发兰燕宇李勇军王永林杨畅刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:建立聚合酶链式反应法(PCR法)快速鉴别川贝母真伪。方法:分析川贝母内转录间隔区1(ITS1)序列的特点,比较川贝母及其常见伪品的序列差异,设计了1对川贝母特异性扩增引物(CBM-SP引物),并用该引物对川贝母真品、伪品以及市场上购买的... 详细信息

目的:建立聚合酶链式反应法(PCR法)快速鉴别川贝母真伪。方法:分析川贝母内转录间隔区1(ITS1)序列的特点,比较川贝母及其常见伪品的序列差异,设计了1对川贝母特异性扩增引物(CBM-SP引物),并用该引物对川贝母真品、伪品以及市场上购买的川贝母样品进行了鉴别。同时用《中华人民共和国药典》2015年版收录的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)进行了验证。结果:用CBM-SP引物进行PCR鉴别,正品川贝母扩增出1条200 bp左右的条带,伪品未出现扩增条带。将该法应用于9批贝母商品药材的鉴定,可将川贝母及其伪品区别开来。本法实验结果与药典收录的PCRRFLP法实验结果一致。结论:本文建立的川贝母PCR快速鉴别法适用于川贝母及其常见伪品的真伪鉴别。

关键词：聚合酶链式反应(PCR) DNA分子鉴别内转录间隔区(ITS) 川贝母鉴定特异性引物

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珠芽景天不同部位提取物抗小鼠急性肝损伤的作用研究

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中国药业 2020年第9期29卷 73-76页

作者：吴莹莹李银马雪郑林姚成芬李勇军林昌虎贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心·省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的筛选珠芽景天具有抗肝损伤作用的活性部位。方法采用D101大孔吸附树脂法对珠芽景天70%乙醇提取物进行分段富集,依次洗脱得到珠芽景天的水、50%乙醇、95%乙醇洗脱部位。将120只KM小鼠随机分为正常对照组(0.5%羧甲基纤维素钠20 mL/kg... 详细信息

目的筛选珠芽景天具有抗肝损伤作用的活性部位。方法采用D101大孔吸附树脂法对珠芽景天70%乙醇提取物进行分段富集,依次洗脱得到珠芽景天的水、50%乙醇、95%乙醇洗脱部位。将120只KM小鼠随机分为正常对照组(0.5%羧甲基纤维素钠20 mL/kg)、模型组(0.5%羧甲基纤维素钠20 mL/kg)、双环醇组(阳性对照组,0.2 g/kg),以及水段高、中、低剂量组(以生药量计分别为16.38,10.92,5.46 g/kg),50%乙醇段高、中、低剂量组(以生药量计分别为10.08,6.72,3.36 g/kg),95%乙醇段高、中、低剂量组(以生药量计分别为2.46,1.64,0.82 g/kg),每组10只,每天1次,灌胃7 d。末次给药2 h后,正常对照组腹腔注射玉米油10 mL/kg,其余各组腹腔注射0.1%四氯化碳(CCl4)-玉米油混合液,成模16 h后摘取小鼠眼球取血,分离小鼠肝脏组织。测定不同组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)活性与肝匀浆中丙二醛(MDA)含量,观察其肝组织病理形态学变化。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST活性显著升高,肝组织中MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,双环醇组和50%乙醇段高、中剂量组小鼠血清中ALT和AST的活性均显著降低(P<0.05),肝组织中MDA含量显著降低(P<0.05)。结合病理学切片观察,50%乙醇段高、中、低剂量组小鼠急性肝损伤均有不同程度减轻。结论珠芽景天70%乙醇提取物的50%乙醇洗脱部位为其具有抗CCl4致小鼠急性肝损伤作用的活性部位。

关键词：珠芽景天四氯化碳急性肝损伤活性部位小鼠

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CYP450蛋白在HepG2细胞与小鼠原代肝细胞中的表达差异

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贵州医科大学学报 2020年第10期45卷 1123-1127页

作者：李靖彭仕林刘亭李勇军王永林王爱民贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的:探讨CYP450蛋白在HepG2细胞与小鼠原代肝细胞中的表达差异。方法:采用改良的两步灌流法分离小鼠原代肝细胞后培养至36 h、同时培养HepG2细胞至对数生长期使用RIPA裂解液提取2种细胞的总蛋白;采用免疫印迹(Western blot)方法检测2... 详细信息

目的:探讨CYP450蛋白在HepG2细胞与小鼠原代肝细胞中的表达差异。方法:采用改良的两步灌流法分离小鼠原代肝细胞后培养至36 h、同时培养HepG2细胞至对数生长期使用RIPA裂解液提取2种细胞的总蛋白;采用免疫印迹(Western blot)方法检测2种细胞中CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4及CYP1A2的蛋白表达。结果:在HepG2细胞中未检测到CYP2E1、CYP2C19蛋白表达,但小鼠原代肝细胞中表达显著,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);小鼠原代肝细胞中CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4及CYP1A2的表达量分别约为HepG2细胞中的7.9倍、2.8倍、17.9倍及10.8倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:小鼠原代肝细胞CYP450蛋白表达丰度较高,而HepG2细胞CYP450蛋白表达水平较低。

关键词：小鼠 HepG2细胞原代肝细胞 CYP2E1 CYP2C19 CYP2C9 CYP2D6 CYP3A4 CYP1A2

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白刺花花蕾化学成分及其抑制丁酰胆碱酯酶活性研究

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天然产物研究与开发 2020年第6期32卷 980-988页

作者：邱天雯张东东施银仙龙美芝李建文王跃虎杨雪飞易平中国科学院昆明植物研究所资源植物与生物技术重点实验室昆明650201 中国科学院大学北京100049 中国科学院东南亚生物多样性研究中心耶津05282 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室/贵州省天然药物工程研究中心贵阳550014 百色学院百色533000

本研究对民间广泛食用的豆科植物白刺花(Sophora davidii(Franch.) Skeels)花蕾进行化学成分和生物活性分析。采用色谱分离方法,从白刺花花蕾的乙醇提取物中分离得到16个化合物。通过多种波谱学手段及文献对比的方法鉴定其结构分别为9α... 详细信息

本研究对民间广泛食用的豆科植物白刺花(Sophora davidii(Franch.) Skeels)花蕾进行化学成分和生物活性分析。采用色谱分离方法,从白刺花花蕾的乙醇提取物中分离得到16个化合物。通过多种波谱学手段及文献对比的方法鉴定其结构分别为9α,14β-二羟基苦参碱(1)、槐胺碱(2)、9α-羟基槐胺碱(3)、7α-羟基槐胺碱(4)、槐果碱(5)、9α-羟基槐果碱(6)、苦参碱(7)、9α-羟基苦参碱(8)、13α-羟基苦参碱(9)、9α-羟基-7,11-脱氢苦参碱(10)、槐定碱(11)、白羽扇豆碱(12)、14α-羟基白羽扇豆碱(13)、3,4-二甲氧基苯甲醇7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14)、2-苯乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)和丁香脂素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)。其中,化合物1是一个新的生物碱,化合物3、4、8~10和12~16共11个化合物为首次从该植物花部位中获得。二氯甲烷萃取部位及苦参碱(7)对丁酰胆碱酯酶有一定的抑制活性,抑制率分别为31%和35%。研究解析了民间食用白刺花花蕾的部分物质基础,明确了其抑制丁酰胆碱酯酶活性的化合物,为白刺花的天然产物开发提供了化学基础。

关键词：豆科白刺花生物碱苦参碱丁酰胆碱酯酶

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杜鹃兰化学成分、药理作用及质量控制研究进展

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贵州农业科学 2020年第5期48卷 121-125页

作者：王静肖红琴李莹胡贺佳巩仔鹏郑林王爱民李勇军李月婷贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

杜鹃兰为兰科杜鹃兰属草本植物,是贵州少数民族地区的一种中药材,其干燥假鳞茎含有多种化学成分,具有抗癌、抗血管、抗菌、抗炎、降压、阻断M胆碱受体等药理作用。为杜鹃兰有效成分的提取及临床应用的深入研究提供参考,从杜鹃兰不同溶... 详细信息

杜鹃兰为兰科杜鹃兰属草本植物,是贵州少数民族地区的一种中药材,其干燥假鳞茎含有多种化学成分,具有抗癌、抗血管、抗菌、抗炎、降压、阻断M胆碱受体等药理作用。为杜鹃兰有效成分的提取及临床应用的深入研究提供参考,从杜鹃兰不同溶剂提取的化学成分、药理作用及质量控制等方面进行综述。

关键词：杜鹃兰溶剂化学成分药理作用质量控制研究进展

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