检索结果-内蒙古大学图书馆

食品与生物技术学报 2021年第7期40卷 42-49页

作者：张煜彬叶路芬吴忠秀薛维娜何彬杨畅李勇军王永林刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医药卫生管理学院贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 详细信息

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。

关键词：大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化亲和层析蛋白质印迹法

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UHPLC-PDA法同时测定毛大丁草中6种成分

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中成药 2021年第1期43卷 111-116页

作者：游景瑞孙佳兰燕宇李勇军王永林刘春花贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的建立UHPLC-PDA法同时测定毛大丁草Gerbera piloselloides(Linn.)Cass.中熊果苷、绿原酸、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量。方法毛大丁草50%甲醇提取物的分析采用Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm)... 详细信息

目的建立UHPLC-PDA法同时测定毛大丁草Gerbera piloselloides(Linn.)Cass.中熊果苷、绿原酸、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量。方法毛大丁草50%甲醇提取物的分析采用Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.28 mL/min;柱温40℃;检测波长280、328 nm。结果熊果苷、绿原酸、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C分别在4.45~284.59(r=0.9999)、0.30~19.52(r=0.9998)、0.30~19.50(r=0.9998)、0.31~19.84(r=0.9999)、0.61~38.96(r=0.9998)、0.32~20.19(r=0.9998)μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为102.06%、103.37%、104.97%、104.79%、105.21%、104.75%,RSD分别为1.88%、1.70%、1.20%、1.89%、1.53%、1.25%。结论该方法稳定,重复性好,可用于毛大丁草的质量控制。

关键词：毛大丁草化学成分 UHPLC

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表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第1期37卷 73-78页

作者：张煜彬吴忠秀何彬杨畅李勇军刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓... 详细信息

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。

关键词：表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ) PD0721 间接ELISA 单链抗体

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钩毛茜草正丁醇部位化学成分的研究

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中成药 2021年第12期43卷 3367-3372页

作者：朱敏汇杨贵香郑林汪洋马雪林昌虎李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

目的研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.正丁醇部位的化学成分。方法钩毛茜草70%乙醇提取物正丁醇部位采用硅胶、Sephadex LH-20、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到15个化合... 详细信息

目的研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.正丁醇部位的化学成分。方法钩毛茜草70%乙醇提取物正丁醇部位采用硅胶、Sephadex LH-20、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到15个化合物,分别鉴定为落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷(1)、11-demethoxy-11-ethoxydaphylloside(2)、鸡屎藤酸甲酯(3)、10-acetylborreriagenin(4)、去乙酰车叶草苷酸乙酯(5)、(-)-(7S,8R)-4,9,9′-trihydroxy-3′,5,-dimethoxy-4′,7-epoxy-8,3′-neoligan-9-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside(6)、(7S,8R)-脱氢双松柏醇-9′-β-葡萄糖苷(7)、落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(8)、没食子酸乙酯(9)、车叶草酸(10)、车叶草苷(11)、腺苷(12)、β-胡萝卜苷(13)、没食子酸(14)、齐墩果酸(15)。结论化合物1~9为首次从茜草属植物中分离得到,化合物1~14为首次从该植物中分离得到。

关键词：钩毛茜草正丁醇部位化学成分分离鉴定

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参芎葡萄糖注射液对CoCl_(2)诱导的H9c2细胞凋亡的影响

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中成药 2021年第5期43卷 1152-1157页

作者：刘欢吴忠秀陆定艳席晓岚王永林李勇军杨畅刘亭贵州医科大学/贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550025

目的探讨参芎葡萄糖注射液对氯化钴(CoCl_(2))诱导的H9c2心肌细胞凋亡的拮抗作用及其机制。方法体外培养H9c2细胞,利用CoCl_(2)建立细胞凋亡模型;MTS法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测c-Jun... 详细信息

目的探讨参芎葡萄糖注射液对氯化钴(CoCl_(2))诱导的H9c2心肌细胞凋亡的拮抗作用及其机制。方法体外培养H9c2细胞,利用CoCl_(2)建立细胞凋亡模型;MTS法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测c-Jun、p-c-Jun、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase 3的表达情况。结果CoCl_(2)浓度在600μmol/L处理24 h的情况下可建立H9c2细胞凋亡模型;不同浓度的SGI预处理后,可明显增加细胞存活率,降低细胞凋亡率,下调蛋白c-Jun磷酸化水平、Bax和Cleaved caspase 3表达水平,上调蛋白Bcl-2表达水平。结论SGI预处理对CoCl_(2)诱导H9c2细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与其抑制c-Jun通路有关。

关键词：参芎葡萄糖注射液 H9c2细胞细胞凋亡 c-Jun通路

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云实皮中二苯并氧辛类新化合物

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中国中药杂志 2021年第20期46卷 5310-5313页

作者：雷艳蒋礼刘俊宏陆苑马雪郑林李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州省食品药品审评查验中心贵州贵阳550004

研究豆科云实属植物云实Caesalpinia decapetala的化学成分。采用硅胶、反相C18、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据结合参考文献鉴定化合物结构。从云实皮70%乙醇提取物中分离得到3对二... 详细信息

研究豆科云实属植物云实Caesalpinia decapetala的化学成分。采用硅胶、反相C18、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据结合参考文献鉴定化合物结构。从云实皮70%乙醇提取物中分离得到3对二苯并氧辛类新化合物,分别鉴定为protosappanoside A(1a)和isoprotosappanoside A(1b)、protosappanoside B(2a)和isoprotosappanoside B(2b)、protosappanoside C(3a)和isoprotosappanoside C(3b)。以上化合物均为二苯并氧辛类新化合物。

关键词：豆科云实二苯并氧辛类衍生物结构鉴定

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酢浆草的化学成分研究

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中国药学杂志 2021年第17期56卷 1378-1383页

作者：雷艳张宝马雪郑林巩仔鹏王永林李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵阳市妇幼保健院贵阳市儿童医院药学部贵阳550003

目的研究酢浆草(Oxalis corniculata L.)的化学成分。方法酢浆草药材采用体积分数75%乙醇提取,用D101大孔树脂柱色谱、反复硅胶柱色谱、Toyopearl HW-40F、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱技术进行分离,运用MS、NMR技术进行结构鉴定。... 详细信息

目的研究酢浆草(Oxalis corniculata L.)的化学成分。方法酢浆草药材采用体积分数75%乙醇提取,用D101大孔树脂柱色谱、反复硅胶柱色谱、Toyopearl HW-40F、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱技术进行分离,运用MS、NMR技术进行结构鉴定。结果从酢浆草中分离得到23个化合物,分别鉴定为正二十八烷醇(1)、正三十烷醇(2)、trans-4-hydroxy-2-nonenoic acid(3)、棕榈酸(4)、胸腺嘧啶(5)、(2S,3S,4R)-2-[(2R)-2-hydroxy-tetracosanoylamino]-1,3,4-octadecanetriol(6)、6,7,10-3羟基-8-十八烯酸(7)、没食子酸乙酯(8)、香草酸(9)、丁香酸(10)、methyl-3-hydroxy-5-(p-hydroxyphenyl)pentanoate(11)、原儿茶酸(12)、cucumegastigmaneⅠ(13)、槲皮素(14)、leptolepisol D(15)、牡荆素(16)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(17)、斯皮诺素(18)、2″-O-xylosylswertisin(19)、staphylionoside D(20)、L-鼠李糖(21)、arabitol(22)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(23)。结论化合物2、3、5~7、10~13、15、17~22为首次从酢浆草属植物中分离得到,化合物9、16为首次从该植物中分离得到。

关键词：酢浆草斯皮诺素分离结构鉴定核磁共振光谱

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黑骨藤对高表达表皮生长因子受体突变体Ⅲ的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及机制

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贵州医科大学学报 2023年第10期48卷 1137-1144页

作者：唐银彤官志忠陆定艳陈帅帅吴忠秀曹陶涛郭玮钰刘亭贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550001 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(... 详细信息

目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(100 mg/L黑骨藤培养液)、中浓度黑骨藤组(200 mg/L黑骨藤培养液)及高浓度黑骨藤组(400 mg/L黑骨藤培养液),处理细胞24 h,采用细胞增殖与毒力检测试剂盒(MTS)检测各组DKMG、U87MG细胞的存活率,采用流式细胞术检测各组DKMG细胞凋亡率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及BCL2-Associated X(Bax)的信使核糖核酸(mRNA)表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋酶家族(Caspase-3、Cleaved caspase-3)蛋白的表达。结果MTS检测显示,与Con组相比,各浓度黑骨藤组DKMG细胞存活率明显降低(P<0.05),各浓度黑骨藤组U87MG细胞存活率比较、差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞凋亡率明显增加(P<0.05);qRT-PCR结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ和Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.05),Bax表达无变化(P>0.05);Western blot结果显示,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论黑骨藤可诱发DKMG细胞凋亡,产生细胞杀伤作用,其机制可能与下调EGFRvⅢ、Bcl-2、Caspase-3表达及上调Bax、Cleaved caspase-3表达有关。

关键词：细胞凋亡黑骨藤 DKMG细胞 U87MG细胞表皮生长因子受体突变体Ⅲ 细胞毒性

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海州常山茎的化学成分研究(Ⅱ)

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中药材 2022年第4期45卷 857-861页

作者：张宇岑银芝陈亮李勇军孙建博李林珍贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学民族药中药开发应用教育部研究工程中心贵州贵阳550004 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 中国药科大学天然药物化学教研室江苏南京210009

目的:研究海州常山Clerodendrum trichotomum Thunb.茎的化学成分。方法:综合运用硅胶、凝胶、ODS等柱色谱技术进行分离纯化,结合MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR等波谱技术鉴定化合物的结构。结果:从海州常山茎中分离得到14个化合物,分别鉴... 详细信息

目的:研究海州常山Clerodendrum trichotomum Thunb.茎的化学成分。方法:综合运用硅胶、凝胶、ODS等柱色谱技术进行分离纯化,结合MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR等波谱技术鉴定化合物的结构。结果:从海州常山茎中分离得到14个化合物,分别鉴定为:弥罗松酚(1)、villoson A(2)、粘霉烯醇(3)、3-O-乙酰齐墩果醛(4)、teuvincenone E(5)、异地黄苷(6)、deacylisomartynoside(7)、毛蕊花糖苷(8)、异毛蕊花糖苷(9)、去咖啡酰基毛蕊花糖苷(10)、(+)-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷(11)、(-)-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷(12)、南烛木树脂酚(13)、3,12-O-β-D-二吡喃葡萄糖基-11,16-二羟基松香醇-8,11,13-三烯(14)。结论:其中,化合物11~13为首次从该属植物中分离得到,化合物1、7、14为首次从该植物中分离得到。

关键词：海州常山化学成分苯丙素类结构鉴定

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云实属植物化学成分、药理作用及质量控制研究进展

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药物评价研究 2021年第2期44卷 424-431页

作者：袁丽刘慧黄勇王爱民巩仔鹏李月婷陈思颖郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

云实属Caesalpinia L.植物资源丰富,主要分布在热带和亚热带地区,具有很高的药用价值。目前,已经从云实属植物中分离出的化学成分主要包括黄酮类和萜类两大类,药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗疟等药理作用。近年来,关于云实属植物... 详细信息

云实属Caesalpinia L.植物资源丰富,主要分布在热带和亚热带地区,具有很高的药用价值。目前,已经从云实属植物中分离出的化学成分主要包括黄酮类和萜类两大类,药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗疟等药理作用。近年来,关于云实属植物的质量控制研究比较单薄,不能全面反映药材质量标准。因此,系统综述了该属植物化学成分、药理作用和质量控制研究进展,以期为云实属植物药用活性成分及其作用机制的研究、资源的充分利用、新药开发提供依据。

关键词：云实属化学成分药理作用质量控制

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