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细胞色素P4502A13野生型/突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

郑州大学学报（医学版） 2021年第2期56卷 191-195页

作者：郑丹丹李靖王永林李勇军刘亭贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室贵阳550025 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550025 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:构建稳定表达细胞色素P4502A13(CYP2A13)野生型(CYP2A13*1)和5种突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法:构建CYP2A13野生型、各突变体的pcDNA5/FRT重组质粒。将pcDNA5-CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9重组质粒分别转染至Flp-In^(TM)CHO细胞中,用实时荧光定量PCR、Western blot和黄曲霉毒素B1(AFB1)细胞毒性实验检测转染细胞中CYP2A13表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13野生型和各突变体的Flp-In^(TM)CHO细胞。结果:和转染pcDNA5/FRT空质粒的Flp-In^(TM)CHO细胞相比,转染各CYP2A13野生型和各突变体的CHO细胞中CYP2A13 mRNA和蛋白表达水平增加,对AFB1毒性敏感度增加(P<0.05)。结论:成功建立了稳定表达CYP2A13*1、*2、*5、*6、*8和*9 Flp-In^(TM)CHO细胞系。

关键词：细胞色素P4502A13 黄曲霉毒素B1 突变体稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞

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石吊兰化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物预测

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中国药房 2021年第11期32卷 1391-1396页

作者：周坤谢家丽李勇军王永林张旭刘春花贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的:了解石吊兰的化学成分和药理作用的研究进展,为石吊兰质量标志物(Q-marker)的筛选和质量控制提供科学依据。方法:对石吊兰的化学成分和药理作用的研究进行归纳与总结,并结合中药Q-marker概念,从化学成分特有性、有效性、可测性、... 详细信息

目的:了解石吊兰的化学成分和药理作用的研究进展,为石吊兰质量标志物(Q-marker)的筛选和质量控制提供科学依据。方法:对石吊兰的化学成分和药理作用的研究进行归纳与总结,并结合中药Q-marker概念,从化学成分特有性、有效性、可测性、入血成分等方面对其Q-marker进行预测分析。结果与结论:石吊兰的主要化学成分包括黄酮类、挥发油、苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、植物甾醇类和三帖皂苷类等;其药理作用有抗菌、抗炎、保肝、止咳祛痰、平喘镇静、降血压、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤以及抗过敏等。根据Q-marker核心概念,可将单一成分石吊兰素、木通苯乙醇苷B和isonuomioside A作为石吊兰的Q-marker,将黄酮类、苯乙醇苷类、三萜皂苷类作为石吊兰Q-marker筛选的备选物质。

关键词：石吊兰化学成分药理作用质量标志物质量控制

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头花蓼提取物对左氧氟沙星血浆蛋白结合率的影响

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中南药学 2022年第8期20卷 1793-1798页

作者：王玲袁丽郑林巩仔鹏李月婷潘洁黄勇贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

目的考察头花蓼提取物对左氧氟沙星血浆蛋白结合率的影响。方法采用超高效液相-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定左氧氟沙星含量,色谱柱为Waters BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)柱,流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水,柱温为45℃,流速... 详细信息

目的考察头花蓼提取物对左氧氟沙星血浆蛋白结合率的影响。方法采用超高效液相-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定左氧氟沙星含量,色谱柱为Waters BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)柱,流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水,柱温为45℃,流速为0.30 mL·min^(-1),进样体积为1μL。以中药灌胃预处理大鼠后,分离血浆与左氧氟沙星作用,通过平衡透析法考察左氧氟沙星在3μg·mL^(-1)、6μg·mL^(-1)两种浓度下,头花蓼提取物对左氧氟沙星血浆蛋白结合率的影响。结果左氧氟沙星在血浆及透析外液浓度范围内线性关系良好,其精密度、准确度、稳定性、提取回收率及基质效应均符合生物样品分析测定要求。左氧氟沙星单独与大鼠血浆作用,血浆蛋白结合率分别为(22.53±3.16)%、(20.03±8.00)%;大鼠灌胃头花蓼提取物预处理后,分离的血浆与左氧氟沙星蛋白结合率显著增加,分别增加至(43.95±4.14)%、(35.27±6.05)%(P<0.05)。结论头花蓼提取物能够使左氧氟沙星的血浆蛋白结合率升高。

关键词：头花蓼提取物左氧氟沙星血浆蛋白结合率 UPLC-MS/MS 平衡透析法

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细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

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贵州医科大学学报 2023年第12期48卷 1454-1458页

作者：何俊奇陆定艳陈帅帅李勇军王永林郑江刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 凤冈县妇幼保健院药剂科贵州凤冈564299 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-In TM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果与Flp-In^(TM)CHO-空质粒组相比,Flp-In^(TM)CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-In^(TM)CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

关键词：细胞色素P4503A4 黄曲霉毒素B1 突变体稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞

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汉桃叶的化学成分研究

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中药材 2021年第7期44卷 1631-1635页

作者：杨婷李小双黄勇郑林马雪蒋礼李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究汉桃叶的化学成分。方法:运用D-101大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、正相硅胶柱等色谱技术进行分离,并运用MS、NMR技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:从汉桃叶的70%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴... 详细信息

目的:研究汉桃叶的化学成分。方法:运用D-101大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、正相硅胶柱等色谱技术进行分离,并运用MS、NMR技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:从汉桃叶的70%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为:芥子醛(1)、香草醛(2)、咖啡酸乙酯(3)、(+)-syringaresinol(4)、erythro-guaiacyl-glycerol-β-coniferyl aldehyde ether(5)、ω-hydro-xypropioguaiacone(6)、5-hydroxymethyl-furfural(7)、对苯二酚(8)、3,4-dihydroxybenzaldehyde(9)、threo-1,2-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-propane-1,3-diol(10)、erythro-1,2-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-propane-1,3-diol(11)、coniferaldehyd(12)、3-表-白桦脂酸(13)、3-表-齐墩果酸(14)、kobophenol A(15)。结论:其中,化合物1、3~12、15为首次从鹅掌柴属植物中分离得到。

关键词：汉桃叶化学成分结构鉴定

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钩毛茜草的化学成分研究

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中药材 2021年第4期44卷 853-857页

作者：刘理燕廖永娥何燕玲王军伟马雪李月婷李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.的化学成分。方法:运用正反相硅胶、D-101大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶与Toyopearl HW-40F凝胶等柱色谱法进行分离纯化,并通过NMR及MS技术进行结构鉴定。结果:从钩毛茜草乙酸乙酯... 详细信息

目的:研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.的化学成分。方法:运用正反相硅胶、D-101大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶与Toyopearl HW-40F凝胶等柱色谱法进行分离纯化,并通过NMR及MS技术进行结构鉴定。结果:从钩毛茜草乙酸乙酯萃取物中分离纯化得到13个化合物,分别鉴定为:rubiprasin A(1)、burselignan(2)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-1-propanol(3)、lirioresinol A(4)、落叶松脂醇(5)、acetylwikstresinol(6)、大黄素(7)、大黄素甲醚(8)、甘草素(9)、9-acetoxyisolariciresinol(10)、(+)-isolariciresinol(11)、2-exo,3-endo-camphanediol(12)、(-)-(7R,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(13)。结论:以上13个化合物均为首次从该植物中分离得到,其中,化合物3、6、10、12、13为首次从茜草属植物中分离得到。

关键词：钩毛茜草化学成分结构鉴定

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艾迪注射液对H22肝癌模型小鼠组织中阿霉素和阿霉醇分布的影响

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贵州医科大学学报 2022年第3期47卷 249-254,267页

作者：王艳丽朱晓青孙佳李勇军刘春花陆苑贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的研究艾迪注射液(ADI)对阿霉素(DOX)及其活性代谢产物阿霉素醇(DOXol)在H22肝癌模型小鼠体内组织分布的影响。方法建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,将模型小鼠随机分成DOX单次给药组(SDOX组)、DOX多次给药组(MDOX组)和ADI联合MDOX组(AMDOX... 详细信息

目的研究艾迪注射液(ADI)对阿霉素(DOX)及其活性代谢产物阿霉素醇(DOXol)在H22肝癌模型小鼠体内组织分布的影响。方法建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,将模型小鼠随机分成DOX单次给药组(SDOX组)、DOX多次给药组(MDOX组)和ADI联合MDOX组(AMDOX组)。三组小鼠均造模15d,于造模结束2 h时收集各组小鼠的血液、肿瘤、心、肝、肾、肺组织,样本处理后,采用超高效液相串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定DOX和DOXol浓度,比较各组小鼠DOX和DOXol的组织分布情况。结果与SDOX组比较,MDOX组小鼠各组织中DOX和DOXol的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药后,DOX和DOXol除了在肿瘤部位的积累量明显增加外,在其余组织中均表现出不同程度的降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ADI可能是通过增加肿瘤中DOX和DOXol浓度增强抗肿瘤能力,并且通过降低心脏中DOX和DOXol浓度、降低DOX的心脏毒性。

关键词：艾迪注射液 H22肝癌模型阿霉素阿霉素醇组织分布

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毛大丁草的化学成分研究

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中药材 2021年第8期44卷 1870-1874页

作者：薛靖怡吴莹莹马雪刘春花孙佳李勇军王永林贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、Toyopearl HW-40等色谱技术对毛大丁草70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从毛大... 详细信息

目的:研究毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、Toyopearl HW-40等色谱技术对毛大丁草70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从毛大丁草中分离得到18个化合物,分别鉴定为:路路通内酯(1)、白桦脂酸(2)、2,4-二羟基苯乙酮(3)、2,5-二羟基苯甲醛(4)、2,5-二羟基苯乙酮(5)、白桦脂醇(6)、7-羟基-8-甲氧基香豆素(7)、8-甲氧基补骨脂素(8)、伞形花内酯(9)、去氢吐叶醇(10)、gerberlin B(11)、芹菜素(12)、木犀草素(13)、对苯二酚(14)、5-羟甲基-糠醛(15)、异紫花前胡内酯(16)、紫花前胡苷(17)、瑞香素-8-O-葡萄糖苷(18)。结论:其中,化合物11为首次从该植物中分离得到,化合物1~7、10、12~15为首次从该属植物中分离得到。

关键词：毛大丁草化学成分分离鉴定

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西南鬼灯檠的研究进展

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中国民族民间医药 2022年第12期31卷 72-81页

作者：谢家丽孙佳陆苑张旭李勇军刘春花贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.以干燥根茎入药,又称岩陀、毛青冈等,具有清热解毒、祛风除湿、收敛的功效,常用于治疗感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血,具有较好的临床应用价值。目前关于西南鬼灯檠的研究已经有一定的积累。通... 详细信息

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.以干燥根茎入药,又称岩陀、毛青冈等,具有清热解毒、祛风除湿、收敛的功效,常用于治疗感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血,具有较好的临床应用价值。目前关于西南鬼灯檠的研究已经有一定的积累。通过对相关文献进行归纳总结,综述了西南鬼灯檠在生药学研究、化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面的研究现状,以期为西南鬼灯檠的进一步开发利用提供数据参考。

关键词：西南鬼灯檠生药学研究质量控制药理作用化学成分

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Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响

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中国药业 2022年第8期31卷 37-42页

作者：蒙文莎袁丽王朴郑林巩仔鹏李月婷王爱民黄勇贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室·药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的探讨Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响。方法取直肠腺癌Caco-2细胞,培养至屏障模型形成。以0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mg/mL的头花蓼提取液和5,10,20,40,80,160,320,640µmol/mL左氧氟沙星溶液分别作用Caco-... 详细信息

目的探讨Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响。方法取直肠腺癌Caco-2细胞,培养至屏障模型形成。以0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mg/mL的头花蓼提取液和5,10,20,40,80,160,320,640µmol/mL左氧氟沙星溶液分别作用Caco-2细胞24 h,采用细胞增殖检测法检测细胞活力。以筛选出的上述2种药液最大安全浓度分别及同时作用于Caco-2细胞1 h,采用超高效液相色谱串联质谱法检测细胞中头花蓼提取液所含没食子酸、原儿茶酸及左氧氟沙星的含量。结果头花蓼提取液和左氧氟沙星的最大安全浓度分别为1 mg/mL和160µmol/mL。两药合用时左氧氟沙星的细胞摄取量为(3.903±0.394)µg/g,显著少于其单用时的(5.895±0.663)µg/g(P<0.01);两药合用时没食子酸和原儿茶酸细胞摄取量分别为(0.076±0.015)µg/g和(0.060±0.008)µg/g,分别少于两药单用时的(0.094±0.022)µg/g和(0.074±0.018)µg/g,但无显著差异(P>0.05)。结论头花蓼提取液能显著减少左氧氟沙星在Caco-2细胞中的吸收,而左氧氟沙星对头花蓼提取液的吸收无显著影响。

关键词： Caco-2细胞超高效液相色谱串联质谱法头花蓼提取液左氧氟沙星吸收

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