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细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

贵州医科大学学报 2022年第12期47卷 1390-1395页

作者：赵永龙郭玮钰龙昌兰陆定艳陈帅帅李勇军刘亭贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

关键词：细胞色素P450家族2亚家族E成员1 稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞蛋白免疫印迹法实时荧光定量PCR 转染

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UHPLC-ESI-Q-TOF-MS快速分析荭草中化学成分

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中国民族民间医药 2022年第10期31卷 23-30页

作者：李容杨淑婷潘洁刘春花陆苑王永林孙佳贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸... 详细信息

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)进行梯度洗脱;以0.25 mL/min流速进行梯度洗脱。使用ESI离子源,正、负离子模式进行质谱检测,电压分别为4 kV、3.5 kV。结果:通过结合对照品、查阅相关文献及相关质谱数据,对荭草提取物中化学成分进行结构分析,初步鉴定了21个化学成分,主要结构多为黄酮类化合物。结论:UHPLC-ESI-Q-TOF-MS可以提高中药民族药的分析效率,有利于化合物结构的分析,可作为荭草药材化学成分的分析方法。

关键词：荭草黄酮类 UHPLC-ESI-Q-TOF-MS

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HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中黑骨藤的3个指标成分及其药动学研究

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中国新药杂志 2020年第17期29卷 2021-2026页

作者：王昌权夏涛覃小丽李奎王爱民黄勇李月婷巩仔鹏陈思颖郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州医科大学药学院贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

目的:建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定大鼠灌胃黑骨藤提取物后血浆中活性成分3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸和5-O-咖啡酰基奎宁酸的分析方法,并用该方法研究3-O-咖啡酰基奎宁酸等3个指标成分的药动学特征。方法... 详细信息

目的:建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定大鼠灌胃黑骨藤提取物后血浆中活性成分3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸和5-O-咖啡酰基奎宁酸的分析方法,并用该方法研究3-O-咖啡酰基奎宁酸等3个指标成分的药动学特征。方法:血浆样品处理选择酸化后甲醇沉淀蛋白,ACE C-PFP(150 mm×4.6 mm,3μm),流速:0.6 mL·min,柱温:40℃,进样器温度:15℃,流动相:0.1%甲酸乙腈(B)-0.1%甲酸水(A)梯度洗脱,进样体积:1μL,采用电喷雾电离源(ESI~-),扫描方式为选择二级离子监测。结果:3个指标成分分别在1.09～1 114.00,1.00～1 086.00,0.98～1 024.00 ng·mL呈良好线性关系,提取回收率、精密度、准确度和稳定性均良好达到测定要求。3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸和5-O-咖啡酰基奎宁酸3个指标成分的T分别为(1.22±0.55),(0.93±0.45)和(0.81±0.56) h,C分别为(151.01±28.75),(83.84±14.71和(78.686±3.27) ng·mL。结论:建立的HPLC-MS/MS检测方法具有特异、快速、准确和灵敏的特点,能够同时测定生物样品中3-O-咖啡酰基奎宁酸等3个指标成分的血药浓度,并成功应用于黑骨藤在正常大鼠体内这3个指标成分的药动学研究。

关键词：黑骨藤高效液相色谱-串联质谱法 3-O-咖啡酰基奎宁酸 4-O-咖啡酰基奎宁酸 5-O-咖啡酰基奎宁酸

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荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢研究

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中国新药杂志 2020年第1期29卷 96-104页

作者：赵平王昌权郑林巩仔鹏黄勇李勇军李月婷贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州医科大学药学院贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

目的:研究荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢。方法:以荭草花有效组分为研究对象,通过收集健康SD大鼠给药后的粪便和胆汁,利用超高效液相色谱串联电喷雾四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-quadrup... 详细信息

目的:研究荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢。方法:以荭草花有效组分为研究对象,通过收集健康SD大鼠给药后的粪便和胆汁,利用超高效液相色谱串联电喷雾四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UHPLC-ESI-Q/TOF-MS)联用技术,并结合Metabolite ToolsTM,Smart Formula及MDF(mass defect filter)等代谢产物预测、筛查技术,有效分析荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢产物。结果:在大鼠体内检测出10个原形成分和25个代谢产物,其中粪便和胆汁中分别有20和22个成分(含交叉成分),代谢产物主要以槲皮素葡萄糖醛酸化、N-反式-对羟基苯乙基阿魏酰胺的氢化、甲基化代谢产物为主。结论:本课题建立了高分辨质谱分析方法,分析了荭草花有效组分在大鼠粪便和胆汁中的代谢产物,阐明了荭草花有效组分的体内代谢特征。

关键词：荭草花有效组分超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱代谢产物槲皮素

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2,4-二氨基嘧啶类黏着斑激酶抑制剂的3D-QSAR研究

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化学通报 2021年第10期84卷 1092-1101页

作者：杨丹徐兴莲张荣红周孟贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550004 贵州医科大学药学院贵安新区550025 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵阳550004

本文选取42个2,4-二氨基嘧啶类黏着斑激酶(FAK)小分子抑制剂,分别以比较分子场分析法(CoMFA)与相似性指数分析法(CoMSIA)构建3D-QSAR模型,评价模板分子、公共骨架点、最小能量优化参数、分子构象等因素对模型优化的影响。分析最优模型... 详细信息

本文选取42个2,4-二氨基嘧啶类黏着斑激酶(FAK)小分子抑制剂,分别以比较分子场分析法(CoMFA)与相似性指数分析法(CoMSIA)构建3D-QSAR模型,评价模板分子、公共骨架点、最小能量优化参数、分子构象等因素对模型优化的影响。分析最优模型中立体场、静电场以及氢键等因素对抑制剂活性的影响,并应用分子对接分析该类抑制剂与FAK蛋白的相互作用。结果表明,选择化合物16作为模板分子,骨架A作为公共骨架点,最小能量优化参数中电荷、最大迭代系数、最低能量限定值分别为MMFF94、1000、0.01kcal/mol时所构建的模型最优。以CoMFA和CoMSIA构建的3D-QSAR模型的交叉验证系数(q^(2))分别为0.666和0.736,非交叉验证系数(R^(2))分别为0.990和0.989,表明此模型具有良好的预测能力。分子对接分析显示,其与FAK的氨基酸残基CYS502、ASP564形成了重要的氢键作用,并与周围残基形成了较强的疏水作用。通过3D-QSAR的构建与分子对接分析,可指导2,4-二氨基嘧啶类FAK小分子抑制剂的进一步结构优化设计。

关键词： FAK抑制剂 2,4-二氨基嘧啶类 3D-QSAR 模型优化分子对接

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HPLC法同时测定苗药黑骨藤中6种咖啡酰基奎宁酸成分含量及指纹图谱研究

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中国新药杂志 2020年第9期29卷 1052-1058页

作者：马雪何燕玲刘文静郑林李月婷王广成李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州医科大学药学院贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室

目的:建立HPLC法同时测定黑骨藤药材中6种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量及液相指纹图谱,为其质量控制提供理论依据。方法:采用Agela Technologies Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),以乙腈-0. 1%磷酸水为流动相,梯度洗脱... 详细信息

目的:建立HPLC法同时测定黑骨藤药材中6种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量及液相指纹图谱,为其质量控制提供理论依据。方法:采用Agela Technologies Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),以乙腈-0. 1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速为0. 8 m L·min-1,检测波长为280 nm,柱温为25℃。结果:测定的6种成分5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸分别在9. 84～252. 00,31. 63～506. 00,5. 76～147. 50,0. 62～15. 81,1. 45～37. 24,2. 94～75. 14 mg·L-1范围内线性关系良好。平均加样回收率分别为102. 8%,91. 3%,92. 2%,97. 4%,92. 4%,97. 4%; RSD值分别为1. 6%,2. 1%,2. 6%,2. 1%,1. 9%,1. 0%。建立了黑骨藤HPLC指纹图谱,确立了19个共有峰,14批药材的相似度在0. 899以上。结论:该方法简便、快捷,重复性好,可为黑骨藤的质量评价提供参考。

关键词：黑骨藤 HPLC 咖啡酰基奎宁酸指纹图谱

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汉桃叶药材质量标准研究

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中国民族民间医药 2022年第10期31卷 15-17,36页

作者：聂雨杉匡维米黄勇李小双马雪李勇军王永林贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

目的:建立汉桃叶药材的质量标准。方法:分别对不同产地汉桃叶药材进行显微鉴别、薄层色谱鉴别;参照《中国药典》2020年版四部通则方法对汉桃叶药材水分、总灰分、浸出物进行测定。结果:汉桃叶药材显微特征明显;薄层色谱鉴别中,在与对照... 详细信息

目的:建立汉桃叶药材的质量标准。方法:分别对不同产地汉桃叶药材进行显微鉴别、薄层色谱鉴别;参照《中国药典》2020年版四部通则方法对汉桃叶药材水分、总灰分、浸出物进行测定。结果:汉桃叶药材显微特征明显;薄层色谱鉴别中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;汉桃叶药材水分、总灰分、醇溶性浸出物范围分别为4.90%~6.15%,3.27%~4.95%,7.28%~8.55%。结论:该方法操作简单,结果稳定可靠,可为汉桃叶药材质量控制提供参考依据。

关键词：汉桃叶质量标准显微鉴别薄层鉴别

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HPLC法同时测定金骨莲胶囊中9个成分的含量

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中药材 2021年第12期44卷 2871-2876页

作者：肖金超刘慧蒲健谭丹李勇军黄勇郑林贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州益佰制药股份有限公司贵州贵阳550008 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的:建立能同时测定金骨莲胶囊中富马酸、没食子酸、原儿茶酸、红景天苷、绿原酸、香草酸、表儿茶素、鹅掌楸苷、滇白珠苷A 9个成分含量的HPLC法。方法:采用ACE Excel 5 C_(18)-PFP(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶... 详细信息

目的:建立能同时测定金骨莲胶囊中富马酸、没食子酸、原儿茶酸、红景天苷、绿原酸、香草酸、表儿茶素、鹅掌楸苷、滇白珠苷A 9个成分含量的HPLC法。方法:采用ACE Excel 5 C_(18)-PFP(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长为210 nm;柱温为40℃;进样量为10μL。结果:上述9个成分在各自浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r>0.9996),平均加样回收率为97.40%~102.43%,RSD为0.62%~2.68%。结论:该研究建立的含量测定方法重复性良好,定量准确,可用于金骨莲胶囊的质量控制。

关键词：金骨莲胶囊 HPLC 含量测定

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吡非尼酮联合阿霉素对小鼠H22移植瘤的协同抗肿瘤作用

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贵州医科大学学报 2022年第3期47卷 255-261页

作者：张帅朱晓青王艳丽程枝梅李勇军陆苑贵州医科大学附属医院介入科贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

目的观察吡非尼酮(PFD)联合阿霉素(DOX)对小鼠H22肝癌移植瘤的协同抗肿瘤作用并探讨可能的作用机制。方法雄性H22移植瘤模型小鼠40只随机均分为4组,对照组(生理盐水0.25 mL/d)、PFD+DOX末次组[PFD 200 mg/(kg·d),最后一天给DOX]、... 详细信息

目的观察吡非尼酮(PFD)联合阿霉素(DOX)对小鼠H22肝癌移植瘤的协同抗肿瘤作用并探讨可能的作用机制。方法雄性H22移植瘤模型小鼠40只随机均分为4组,对照组(生理盐水0.25 mL/d)、PFD+DOX末次组[PFD 200 mg/(kg·d),最后一天给DOX]、DOX组(DOX 2.5 mg/kg)、PFD+多次DOX组[PFD 200 mg/(kg·d),隔日在PFD 200 mg/kg给药1 h后给予DOX 2.5 mg/kg],连续15 d;给药周期内隔天称量体重,测量瘤体体积并绘制肿瘤的生长曲线;试验结束后处死小鼠,剥离肿瘤组织并称重,计算抑瘤率和PFD+DOX联用相互作用指数Q值,HE染色法观察各组小鼠H22实体瘤细胞形态,UPLC-MS/MS法测定各组小鼠血浆、肿瘤、心、肝、肾组织中的DOX和阿霉素醇(DOXol)的浓度。结果PFD+DOX联用Q值为1.47,提示PFD与DOX联用对抑制肿瘤的生长有协同作用;PFD+多次DOX组与DOX组比较,脾脏指数显著上升(P<0.01);与对照组比较,PFD+多次DOX组的肿瘤组织出现大面积空隙,呈现片状坏死或消融现象比DOX组更加明显;与PFD+末次DOX组相比,DOX组血清及各组织中DOX的累积含量显著升高(P<0.01),肿瘤、心、肝、肾及肺组织中DOXol的累积含量显著升高(P<0.01),但在血清中未测到DOXol;与DOX组相比,PFD+多次DOX组肿瘤中DOX和DOXol的浓度增加(P<0.05),可降低心脏组织中DOXol的浓度(P<0.05)。结论PFD与DOX联合应用,对H22移植瘤小鼠有抗肿瘤协同作用,其机制可能与PFD增加肿瘤组织中DOX及DOXol浓度有关。

关键词：吡非尼酮阿霉素抗肿瘤作用协同作用组织分布

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苗药羊耳菊中7个抗炎活性成分在Raw264.7细胞中含量测定方法的建立

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江苏大学学报（医学版） 2022年第6期32卷 524-531页

作者：周杰薛寸张青陈思颖陈艺黄静李月婷黄勇郑林巩仔鹏贵州医科大学药学院贵州省药物制剂重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的:建立同时测定Raw264.7细胞中羊耳菊提取物中7个抗炎活性成分木犀草苷(luteolin,LUT)、绿原酸(chlorogenic acid,CA)、新绿原酸(neochlorogenic acid,NCA)、隐绿原酸(cryptochlorogenic acid,CCA)、3,4-二咖啡酰基奎宁酸(3,4-dicaffeoylquinic acid,3,4-DCQA)、3,5-二咖啡酰基奎宁酸(3,5-dicaffeoylquinic acid,3,5-DCQA)、4,5-二咖啡酰基奎宁酸(4,5-dicaffeoylquinic acid,4,5-DCQA)含量的方法。方法:以小鼠巨噬细胞Raw 264.7为研究对象,采用超高液相色谱-三重四级杆质谱联用仪(UPLC-MS/MS)建立同时测定Raw 264.7细胞中LUT、CA、NCA、CCA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA等7个成分含量的方法,包括专属性、线性、基质效应、回收率、准确度、精密度和稳定性等。结果:建立了一个快速稳定测量Raw264.7细胞中微量药物的分析方法,该方法的最低定量限为0.48~3.84 ng/mL,准确度为(90.78±5.30)%~(113.99±13.51)%,提取回收率为(87.19±5.33)%~(103.59±14.00)%,基质效应为(94.50±15.17)%~(112.77±7.02)%,稳定性为(91.71±11.70)%~(109.45±10.63)%,能够满足测量的要求。结论:建立了快速、准确的同时测定Raw264.7细胞羊耳菊提取物中7个活性成分(LUT、CA、NCA、CCA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA)含量的UPLC-MS/MS方法,为开展羊耳菊提取物的细胞药代动力学研究奠定基础。

关键词：羊耳菊提取物 Raw264.7细胞抗炎成分绿原酸细胞药代动力学 UPLC-MS/MS

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