检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2024年第2期40卷 212-222页

作者：赵曜文朗骆少丹栗子杏刘超超江苏科技大学生物技术学院镇江212100

【目的】Heavy metal ATPase(HMA)基因家族广泛参与植物对金属元素的吸收和转运,系统鉴定番茄HMA基因家族成员及其特征,并研究其在应对镉胁迫过程中的功能,为解析番茄重金属转运机制及番茄低镉积累种质创新提供理论依据。【方法】通过... 详细信息

【目的】Heavy metal ATPase(HMA)基因家族广泛参与植物对金属元素的吸收和转运,系统鉴定番茄HMA基因家族成员及其特征,并研究其在应对镉胁迫过程中的功能,为解析番茄重金属转运机制及番茄低镉积累种质创新提供理论依据。【方法】通过生物信息学鉴定番茄HMA基因家族成员,并分析其系统进化树、蛋白理化性质、基因结构、顺式作用元件、基因表达模式等,通过酵母功能互补试验研究SlHMA1的镉转运活性。【结果】番茄基因组中存在8个SlHMAs,分属2个亚组。在基因结构方面,各SlHMAs间及与拟南芥和水稻的同源基因之间都存在显著差异。SlHMAs成员启动子区域含有较多逆境响应相关的顺式作用元件,RT-qPCR结果也揭示大多数SlHMAs表达对镉胁迫有不同程度的组织特异性响应。酵母功能互补试验表明SlHMA1蛋白具有镉转运活性,进化分析表明HMA1广泛存在于植物界,且其ATP水解酶活性相关的氨基酸保守基序DKTGT也在植物界高度保守。【结论】番茄SlHMAs具有HMA家族基因的典型特征,同时也存在功能多样性。SlHMAs及其氨基酸保守基序DKTGT与金属离子转运及镉胁迫响应密切相关,在低镉作物育种方面具有重要应用潜力。

关键词：番茄金属转运蛋白重金属ATP酶镉 SlHMA1

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CRISPR-Cas9基因编辑技术及其在家禽中的研究进展

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生物技术通报 2024年第5期40卷 38-47页

作者：肖怡梦杨雯程依依罗刚江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室镇江212100

CRISPR-Cas系统是细菌或古细菌内抵御病毒再次入侵的一种适应性免疫系统,能够对靶向核酸进行切割。基于Cas9蛋白及其突变体的特性,科学家开发出多样化的基因编辑工具,能够对细胞内的基因进行敲除或敲入等基因编辑操作,实现生物的遗传变... 详细信息

CRISPR-Cas系统是细菌或古细菌内抵御病毒再次入侵的一种适应性免疫系统,能够对靶向核酸进行切割。基于Cas9蛋白及其突变体的特性,科学家开发出多样化的基因编辑工具,能够对细胞内的基因进行敲除或敲入等基因编辑操作,实现生物的遗传变异;或对DNA或RNA进行表观修饰,调控基因的表达,已广泛地应用于生命科学的研究。禽类是农业中的重要物种,为人类提供优质的蛋白质。在禽类的基因组编辑和修饰中,CRISPR-Cas9技术仍处于研究状态,且只在鸡和鹌鹑两种家禽上取得实质性进展。本文从CRISPR-Cas9系统的组成成分、传递方法、优化策略介绍了CRISPR-Cas9基因编辑技术及其在家禽生产和疾病防控中的应用,为进一步开发适用于家禽体系的CRISPR-Cas9提供理论基础。

关键词：家禽 CRISPR-Cas9 育种诊断

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家蚕核型多角体病毒的快速检测:基于CRISPR/Cas12a系统的最佳crRNA组合筛选

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蚕业科学 2025年第1期51卷 41-48页

作者：焦心皓周雪敏沈振宇许韬王禄来吴萍江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212100

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是家蚕的重要病原微生物之一,其引发的病毒病会导致家蚕大量死亡,严重威胁蚕桑产业的高质量发展。近年来,基于CRISPR/Cas12a的分子诊断技术因其高灵敏度、高特异性和操作简... 详细信息

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是家蚕的重要病原微生物之一,其引发的病毒病会导致家蚕大量死亡,严重威胁蚕桑产业的高质量发展。近年来,基于CRISPR/Cas12a的分子诊断技术因其高灵敏度、高特异性和操作简便等优势而受到广泛关注。针对BmNPV的ie-1基因,设计并筛选了多条crRNA,通过优化crRNA组合,成功建立了一种新型的CRISPR/Cas12a系统多重crRNA检测方法。研究结果表明,crRNA3、crRNA8和crRNA9组合使用时检测效果最佳,30 min内通过肉眼观察荧光可在感染BmNPV 24 h的家蚕中肠组织及感染48 h的血液和丝腺组织中检测出BmNPV。该方法无需复杂的核酸扩增步骤,即可实现对BmNPV的快速可视化检测。

关键词： BmNPV CRISPR/Cas12a系统快速检测多重crRNA组合

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Trizol法提取鸡肝组织总RNA及miRNA的条件优化研究

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中国家禽 2024年第9期46卷 175-181页

作者：陈紫薇张吉龙庄武超郑晓彤陈建飞江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212100

试验旨在优化总RNA及miRNA的Trizol法提取条件。试验利用Trizol法提取鸡肝脏组织总RNA,在RNA的沉降阶段,将样品置于室温、4℃、-20℃和-80℃条件下分别放置10 min、30 min和60 min,另外将样品在-80℃条件下放置3 h、6 h、12 h,分别探究... 详细信息

试验旨在优化总RNA及miRNA的Trizol法提取条件。试验利用Trizol法提取鸡肝脏组织总RNA,在RNA的沉降阶段,将样品置于室温、4℃、-20℃和-80℃条件下分别放置10 min、30 min和60 min,另外将样品在-80℃条件下放置3 h、6 h、12 h,分别探究不同沉降温度和不同沉降时间对总RNA完整度、纯度、质量浓度以及miRNA提取量的影响。结果显示:不同沉降温度和不同沉降时间均不影响总RNA的完整性;沉降时间能显著降低RNA的A260/A280比值(P<0.05),但仍在1.90~1.95范围内;不同沉降温度和不同沉降时间均显著影响总RNA和miRNA的提取量(P<0.05)。研究表明,-20℃放置30 min是总RNA提取的适宜条件,-80℃放置3 h为miRNA提取的适宜条件,-80℃放置10 min、4℃放置30 min和-20℃放置60 min的miR⁃NA提取效果良好,适合短时间提取miRNA的相关研究。

关键词：鸡肝组织总RNA miRNA Trizol法 RNA纯度 RNA浓度

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铁基仿酶处理桑枝制备纳米纤维素的研究

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蚕业科学 2024年第5期50卷 426-432页

作者：邓妞妞李强朱烨罡王文洁胡学建吴悠然季更生褚衍亮杨功德江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212100

利用铁基仿酶(Fe-based biomimetic enzyme,Fe-CA)处理桑枝,以高效制备纳米结晶纤维素(nanocystalline cellulose,NCC)。通过正交实验优化Fe-CA用量、反应时间和反应温度,在较温和的条件下高效去除桑枝粉中的木质素和半纤维素,促进NCC... 详细信息

利用铁基仿酶(Fe-based biomimetic enzyme,Fe-CA)处理桑枝,以高效制备纳米结晶纤维素(nanocystalline cellulose,NCC)。通过正交实验优化Fe-CA用量、反应时间和反应温度,在较温和的条件下高效去除桑枝粉中的木质素和半纤维素,促进NCC生成。NCC得率可达61.21%,其具有高分散性,平均长度100 nm,结晶度提升至65.74%。采用傅里叶红外光谱、扫描电子显微镜和X射线衍射等方法对NCC进行结构和性能分析,结果表明该方法制备的NCC保留了纤维素的基本结构,且未发生化学衍生化反应,同时物理化学性能优良。该研究为桑枝生物质的高价值利用提供了新的方法。

关键词：桑枝纤维素纳米结晶纤维素铁基仿酶预处理

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猪转录因子YY1基因克隆、序列特征及真核表达载体构建

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中国畜牧杂志 2024年第4期60卷 276-284页

作者：邢文文李梦轩齐南南刘吉英江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018

YY1(Yin-Yang1,YY1)作为重要的转录因子对基因表达调控起到重要的作用。本研究旨在克隆猪YY1基因CDS区序列,利用生物信息学软件分析猪YY1基因编码蛋白的特性和功能。利用免疫荧光检测YY1在猪卵泡颗粒细胞中的定位;利用同源重组构建YY1... 详细信息

YY1(Yin-Yang1,YY1)作为重要的转录因子对基因表达调控起到重要的作用。本研究旨在克隆猪YY1基因CDS区序列,利用生物信息学软件分析猪YY1基因编码蛋白的特性和功能。利用免疫荧光检测YY1在猪卵泡颗粒细胞中的定位;利用同源重组构建YY1真核表达载体,通过qRT-PCR及Western Blot(WB)检测YY1过表达载体在猪原代卵泡颗粒细胞中的表达效率。本研究成功克隆了猪YY1基因全长CDS区,生物信息学分析结果表明猪YY1蛋白由411个氨基酸组成,相对分子质量为44.3 kDa,为亲水性与酸性蛋白,无跨膜结构域与信号肽,二级结构主要含有α-螺旋(16.06%)、延伸链(19.71%)、β-转角(7.54%)和无规则卷曲(56.69%),YY1主要定位于细胞核,共含39个潜在的磷酸化位点,互作蛋白有EP300、E2H2、HDAC1、HDAC2等。免疫荧光检测发现YY1主要在猪原代卵泡颗粒细胞的细胞核中表达,qPCR和Western Blot检测结果显示该真核表达载体在猪原代卵泡颗粒细胞中成功表达。本研究为进一步探究猪转录因子YY1的生物学功能及提高母猪的繁殖率提供了理论依据。

关键词：猪转录因子YY1 克隆生物信息学分析卵巢颗粒细胞载体构建

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产脂肪酶多粘类芽胞杆菌的产酶条件和固定化优化及对模拟油污废水的降解研究

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微生物学杂志 2024年第4期44卷 31-39页

作者：王娜赵文倩张盈盈蔡灏漾李泽舒褚衍亮江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212100

以筛选自健康桑树叶片的内生细菌多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)为实验菌株,对其产脂肪酶进行分析,探讨菌株在油污废水净化领域的应用潜力。在透明圈法定性分析的基础上,研究了影响菌株产酶的因素,优化了产酶条件;采用壳聚糖-... 详细信息

以筛选自健康桑树叶片的内生细菌多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)为实验菌株,对其产脂肪酶进行分析,探讨菌株在油污废水净化领域的应用潜力。在透明圈法定性分析的基础上,研究了影响菌株产酶的因素,优化了产酶条件;采用壳聚糖-戊二醛固定的方法对脂肪酶进行固定,探讨了固定化酶对模拟油污废水的降解能力。结果表明,菌株具有产脂肪酶特性,所产脂肪酶的最适反应温度为39℃,最适反应pH值为7.0。通过碳氮源筛选发现,蔗糖(60 g/L)和菜籽饼粉(15 g/L)最适合作为菌株培养基发酵产酶。设置培养基初始pH为7.0,培养温度32℃,发酵培养2 d,脂肪酶活性即可达到最大值。脂肪酶可有效固定在壳聚糖-戊二醛载体上。降解模拟油污废水时,游离酶在反应48 h时降解度达638.88 mg/mgprot,而后持续下降;固定化酶在反应36 h时,降解度达4174.44 mg/mgprot,且在60 h内,一直保持在相对恒定的水平。60 h后,固定化酶的降解度虽然显著下降,但相比于游离酶仍然保持较高的降解能力。内生细菌多粘类芽胞杆菌具有良好的产脂肪酶及降解油污能力,在废水净化领域有潜在的应用前景。

关键词：内生细菌脂肪酶多粘类芽胞杆菌固定化油污废水

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YY1作用机制及在动物繁殖调控中的研究进展

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畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4040-4049页

作者：邢文文齐南南李梦轩刘吉英江苏科技大学生物技术学院镇江212018

转录因子阴阳-1(Yin-Yang1,YY1)是一种复杂的蛋白,通过抑制或激活多种基因表达来调控重要的生命活动,如增殖、分化、衰老和凋亡等。YY1除了作为传统转录因子,还通过调控染色质结构,以及相分离机制等来发挥作用。研究发现YY1在生殖系统... 详细信息

转录因子阴阳-1(Yin-Yang1,YY1)是一种复杂的蛋白,通过抑制或激活多种基因表达来调控重要的生命活动,如增殖、分化、衰老和凋亡等。YY1除了作为传统转录因子,还通过调控染色质结构,以及相分离机制等来发挥作用。研究发现YY1在生殖系统起到重要的调控作用且与动物繁殖性能密切相关。文章综述了YY1的作用机制及其在动物繁殖调控方面的作用和潜在机制,以期为今后动物繁殖调控的深入研究提供理论依据。

关键词： YY1 转录调控卵巢精子发生生殖激素繁殖调控

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超声辅助酶法提取桦褐孔菌多糖的工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

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扬州大学学报(农业与生命科学版) 2025年第2期46卷 110-116页

作者：段双庚江明珠江苏科技大学生物技术学院江苏省大港中学

为优化超声辅助酶法提取桦褐孔菌多糖工艺，通过单因素试验确定影响多糖提取率的关键因素，包括果胶酶添加量、料液比、超声温度和超声时间，进一步采用正交试验优化提取条件，并评估其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明：最佳提取... 详细信息

为优化超声辅助酶法提取桦褐孔菌多糖工艺，通过单因素试验确定影响多糖提取率的关键因素，包括果胶酶添加量、料液比、超声温度和超声时间，进一步采用正交试验优化提取条件，并评估其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明：最佳提取条件为果胶酶添加量1%、料液比1∶20、超声温度50℃、超声时间20 min,在此条件下，桦褐孔菌多糖的提取率为4.97%。此外，桦褐孔菌多糖对α-葡萄糖苷酶显示出显著的抑制作用，其半数抑制质量浓度(IC50)为0.296 mg·mL-1,可见其具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，提示其在降血糖方面有潜在的应用价值。

关键词：桦褐孔菌多糖超声辅助酶法提取正交试验优化 α-葡萄糖苷酶

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天蚕素A和溶菌酶杂合肽在毕赤酵母中重组表达及其活性分析

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中国畜牧兽医 2023年第12期50卷 5032-5042页

作者：布阿依夏木·库尔班王义鑫杨铖熹耿子健徐滢清罗刚江苏科技大学生物技术学院

【目的】试验旨在利用毕赤酵母表达新型天蚕素A和溶菌酶杂合肽(CecA-Lyz),并初步探讨重组杂合肽的抑菌活性。【方法】根据毕赤酵母密码子偏好性优化杂合肽CecA-Lyz的编码基因，分析CecA-Lyz蛋白的理化性质，并将优化后的基因插入到质粒p... 详细信息

【目的】试验旨在利用毕赤酵母表达新型天蚕素A和溶菌酶杂合肽(CecA-Lyz),并初步探讨重组杂合肽的抑菌活性。【方法】根据毕赤酵母密码子偏好性优化杂合肽CecA-Lyz的编码基因，分析CecA-Lyz蛋白的理化性质，并将优化后的基因插入到质粒pPIC9K-HSA中，构建N-端含有6×His标签和HSA DⅠ&DⅡ区的重组质粒pPIC9K-HSA-CecA-Lzy。利用PmeⅠ线性化重组质粒并电转化毕赤酵母GS115感受态细胞，利用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)+遗传霉素(G418)筛选重组CecA-Lyz蛋白的高表达菌株，并摸索重组CecA-Lyz蛋白的最适诱导条件，包括甲醇浓度和诱导时间，验证CecA-Lyz的抑菌活性。【结果】经过密码子优化后，CecA-Lyz基因序列的GC含量为48.9%,密码子适应指数(CAI)为0.87,适合在毕赤酵母中分泌表达。重组CecA-Lyz蛋白的预期分子质量为20.8 ku,理论等电点为9.62,理化性质较为稳定。此外，本试验成功地将优化后的目的基因构建到表达载体上并在毕赤酵母中表达重组CecA-Lyz蛋白。重组CecA-Lyz蛋白在摇瓶中的最适诱导甲醇浓度为2.5%,最适诱导时间为72 h。另外，本试验通过TEV酶切的方式获得了N-端不含HSA DⅠ&DⅡ区的重组融合肽。通过平板计数法和牛津杯法初步验证重组CecA-Lyz对大肠杆菌具有抑菌活性，包括抑制养鸭场分离的耐药大肠杆菌的生长，抑菌直径达到1.45 cm,但是对沙门菌和葡萄球菌没有明显的抑制作用。【结论】重组CecA-Lyz融合肽可在毕赤酵母中稳定表达，得到无HSA标签的融合肽，其具有抑制大肠杆菌的作用，为进一步开发抗菌肽提供研究思路和参考。

关键词：抗菌肽毕赤酵母融合蛋白杂合肽

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