检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2023年第8期55卷 11-17页

作者：杨洋袁超龙勇肖文贵州省畜牧兽医研究所贵州贵阳550005 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025

旨在探究成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factors-10, FGF10)基因在贵州黑山羊肌肉及脂肪组织中的表达规律。试验以贵州黑山羊为研究对象,首先克隆了贵州黑山羊FGF10基因CDS区,并对该编码区序列进行了生物信息学分析,其次使用q... 详细信息

旨在探究成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factors-10, FGF10)基因在贵州黑山羊肌肉及脂肪组织中的表达规律。试验以贵州黑山羊为研究对象,首先克隆了贵州黑山羊FGF10基因CDS区,并对该编码区序列进行了生物信息学分析,其次使用qPCR方法分析1、3、6、9、12、24月龄贵州黑山羊背最长肌、臂三头肌、肱二头肌、皮下脂肪、肾周脂肪和尾脂6个组织中FGF10基因mRNA的表达情况。结果表明,克隆的贵州黑山羊FGF10基因CDS区全长642 bp,共编码213个氨基酸,与山羊和牛同源性较高。FGF10基因在不同月龄贵州黑山羊肌肉和脂肪组织中均有表达,且表达量在幼龄贵州黑山羊肌肉和脂肪组织中较低,随年龄增加FGF10基因表达量呈现逐渐上升的趋势;1月龄时,FGF10基因在皮下脂肪表达量极显著高于其他组织,3月龄和6月龄时在背最长肌和臂三头肌中表达量相对较高,9月龄和12月龄时在皮下脂肪中表达量较高,24月龄时,在肱二头肌中表达量最高,尾脂中最低。

关键词：成纤维细胞生长因子10 贵州黑山羊克隆表达规律肌肉脂肪

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织金白鹅微卫星标记遗传多样性及其与体尺指标的关联分析

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农业生物技术学报 2023年第11期31卷 2341-2357页

作者：郭徵力赵中龙杨红王天松叶丽周艳杨远青袁建王智伟张勇贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室/动物科学学院毕节市畜牧站铜仁职业技术学院农学院贵州黄牛产业集团科技服务公司

织金白鹅(Anser cygnoides orientalis)是经长期人工选择和风土驯化形成的地方品种，具有耐粗饲、适应性强等特点。为探究织金白鹅准确的遗传信息，筛选与其体尺性状相关的位点，本研究利用微卫星技术分析织金白鹅群体内遗传多样性，并... 详细信息

织金白鹅(Anser cygnoides orientalis)是经长期人工选择和风土驯化形成的地方品种，具有耐粗饲、适应性强等特点。为探究织金白鹅准确的遗传信息，筛选与其体尺性状相关的位点，本研究利用微卫星技术分析织金白鹅群体内遗传多样性，并在与体尺相关的位点中进行不同基因型的多重比较，旨在为织金白鹅的种质资源保护及开发利用提供一定的理论基础。研究共测量了101羽织金白鹅体尺指标，从52对微卫星引物中筛选出15对多态性较好的微卫星引物，共检测出63个等位基因，平均有效等位基因数为2.066 5，其中以CKW21位点有效等位基因数最多。各位点观测杂合度范围在0～0.969 7之间，期望杂合度范围在0.265 7～0.676 2之间，Ans17位点期望杂合度值最低，CKW21位点期望杂合度值最高。香农指数处于0.539 2～1.307 4之间，CKW21位点的香农指数值最高。各位点多态信息含量范围在0.248 9～0.620 2之间，Ans17位点的多态信息含量值最低，CKW21位点的多态信息含量最高。近交系数平均值为0.197 2。各位点经过卡方检验发现位点5A5397、5A265164、Ans21、Ans25、CKW10、CKW48、TTUCG2极显著偏离哈德-温伯格平衡。相关性分析发现，在公鹅中，有5个位点分别与体重、体斜长、胸宽、龙骨长、骨盆宽、胫长相关；在母鹅中，有10个位点分别与体重、胸宽、胸深、龙骨长、骨盆宽、胫长、胫围及半潜水长存在不同程度的相关。研究结果为织金白鹅分子标记辅助育种提供一定参考。

关键词：织金白鹅微卫星DNA标记体尺性状遗传多样性

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贵州省自然保护区中华蜜蜂形态及mtDNA遗传多样性

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生物学杂志 2023年第6期40卷 81-87页

作者：赵金玉吴育滔龙见坤陈祥盛常志敏贵州大学昆虫研究所贵阳550025 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室动物科学学院贵阳550025 贵州大学昆虫资源开发利用省级特色重点实验室贵阳550025

试验旨在探明贵州省不同自然保护区中华蜜蜂种群形态及mtDNA遗传分化现状,为贵州省中华蜜蜂种群分化、种质资源保护与开发利用提供参考依据。采集贵州省11个代表性自然保护区中华蜜蜂样本,采用31项形态指标进行聚类分析、主成分分析、... 详细信息

试验旨在探明贵州省不同自然保护区中华蜜蜂种群形态及mtDNA遗传分化现状,为贵州省中华蜜蜂种群分化、种质资源保护与开发利用提供参考依据。采集贵州省11个代表性自然保护区中华蜜蜂样本,采用31项形态指标进行聚类分析、主成分分析、方差分析研究其形态分化现状,采用mtDNA COⅠ~COⅡ序列对其进行碱基组成分析、单倍型分析、系统发育分析等研究其种群遗传分化情况及遗传多样性程度。结果显示:11个采样点中华蜜蜂在形态上聚为2个类群;COⅠ~COⅡ序列A+T平均含量为82%,碱基偏倚性明显;在COⅠ~COⅡ序列中共检测到11个单倍型;单倍型系统发育树显示11个单倍型聚为3个类群;11个样点间平均遗传距离介于0.0070~0.0270,遗传距离和地理距离之间未发现明显相关性。结果表明贵州省自然保护区中华蜜蜂形态及mtDNA存在一定种群分化,且形态和mtDNA分化结果基本一致。其中,草海和百里杜鹃自然保护区种群分化较为明显,形态和mtDNA均存在分化;其次,宽阔水自然保护区、野钟自然保护区、青岩油杉自然保护区受外界影响也发生一定程度的种群分化,发生种群分化的原因可能与海拔和气候有关。研究结果为贵州省本土蜜蜂种质资源的保护与开发提供依据。

关键词：中华蜜蜂线粒体DNA 形态指标种群分化

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关岭牛IGF1基因干扰载体构建及其对成肌细胞的影响

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农业生物技术学报 2022年第5期30卷 896-907页

作者：宋林锦许厚强李永孙金魁贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学动物科学学院贵州大学生命科学学院

胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素，对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用，本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响。选用健康的... 详细信息

胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1, IGF1)是通过调控骨骼肌蛋白的合成影响肌肉发育的单链多肽类激素，对细胞增殖等多种生理功能具有重要作用，本研究旨在探究IGF1基因对关岭牛(Bos taurus)成肌细胞的影响。选用健康的成年(2～3岁)关岭牛3头，采集心、肝、脾、肺、肾、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌、胃、小肠12个组织样提取RNA，采集背最长肌组织成功培养关岭牛成肌细胞。运用qPCR技术检测IGF1基因在不同组织中的相对表达量；运用在线软件对关岭牛IGF1蛋白质理化性质、二级结构和三级结构、亚细胞定位进行分析；同时通过在线软件设计IGF1基因的3对短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)干扰序列和1对阴性对照序列，与pGPU6-GFP-Neo载体连接后进行测序，将构建成功的IGF1基因干扰载体转染至成肌细胞；运用qPCR技术检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体，分析该干扰载体对IGF1基因表达的影响；运用qPCR技术检测干扰IGF1基因对细胞增殖相关基因细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclin-dependent kinases 2, CDK2)的相对表达量影响；运用CCK8 (Cell Counting Kit-8)法检测成肌细胞增殖情况。结果表明，IGF1基因在关岭牛心、前腿肌、后腿肌、背最长肌、斜方肌、臀肌等12个组织样中均有表达，在肝中相对表达量最高，极显著高于其他组织(P<0.01)；在培养关岭牛成肌细胞的基础上，成功构建关岭牛IGF1基因干扰载体，并筛选出shRNA-IGF1-1干扰效率最高(P<0.01);IGF1蛋白的分子式为C744H1186N214O216S15，相对分子质量为17.06581 kD，理论等电点为9.36，属碱性不稳定蛋白；IGF1基因被抑制后，细胞增殖相关基因cyclin D1和CDK2的表达量均极显著低于shRNA-NC (P<0.01)。CCK8法检测细胞增殖结果表明，IGF1基因被抑制后，在24和72 h成肌细胞增殖均显著低于对照组(P<0.05),48 h为极显著水平(P<0.01)，表明体外沉默IGF1基因后，会影响成肌细胞增殖能力和抑制成肌细胞增殖相关基因表达。本研究为进一步研究IGF1基因对关岭牛肌肉生长发育的作用及调控机制提供了基础数据。

关键词：关岭牛胰岛素样生长因子1 (IGF1) RNA干扰成肌细胞细胞增殖

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IP3R2结构域对三穗鸭子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的影响

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农业生物技术学报 2022年第6期30卷 1153-1165页

作者：杨酸谭光辉张依裕游敏芳廖朝美谭元成王盈童贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

肌醇1, 4, 5-三磷酸受体2型（inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2, IP3R2）是位于内质网的细胞内Ca2+释放通道，通过调控Ca2+释放而影响蛋壳品质。为阐明IP3R2蛋白结构域对鸭（Anas platyrhyncha domestica）子宫内膜上皮细胞... 详细信息

肌醇1, 4, 5-三磷酸受体2型（inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2, IP3R2）是位于内质网的细胞内Ca2+释放通道，通过调控Ca2+释放而影响蛋壳品质。为阐明IP3R2蛋白结构域对鸭（Anas platyrhyncha domestica）子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的调控效应及其对钙转运相关基因的影响，本研究以蛋鸭品种三穗鸭为研究对象，构建IP3R2蛋白结构域的表达载体pCDNA3.1-IP3R2，转染至鸭子宫内膜上皮细胞，以Flag标签ELISA检测试剂盒确定IP3R2蛋白结构域的表达量；以Fluo-3/AM钙离子荧光标记检测胞内Ca2+含量；以qPCR检测不同结构域过表达量及离子转运相关基因的mRNA水平。结果显示，MIR、RYDR＿ITPR（1）、RYDR＿ITPR（2）、RIH＿assoc和Ion＿trans结构域过表达均引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+浓度下降；RYDR＿ITPR（1）和IP3R2-Ion＿trans的表达量与胞内Ca2+浓度显著负相关（P<0.05）;RYDR＿ITPR（2）、RIH＿assoc和5个结构域共转染的表达量与胞内Ca2+浓度极显著负相关（P<0.01）;RYDR＿ITPR（2）结构域表达量与RYR2、KCNJ15和CA2基因表达量呈显著正相关（P<0.05）;MIR结构域过表达量与IP3R1、CALB1和CA2的基因表达量呈现显著正相关（P<0.05）,2个RYDR＿ITPR结构域过表达量均与KCNJ15和RYR2基因表达量呈显著正相关（P<0.05）;RIH＿assoc结构域过表达量与IP3R2和ORAI1基因表达量呈显著正相关（P<0.05）;Ion＿trans结构域过表达量与CALB1、SLC8A1和CA2基因表达量呈显著正相关（P<0.05）;5个结构域共转染后的表达量与CFTR基因表达量呈显著正相关、与TRPV6呈显著负相关（P<0.05）。上述结果提示，5个IP3R2蛋白结构域的过表达可能引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+向胞外释放，对细胞中20个离子转运基因表达水平的调控效应存在差异。本研究可为分子遗传标记选择和鸭蛋壳品质提高提供参考依据。

关键词：三穗鸭肌醇1, 4, 5-三磷酸受体2型(IP3R2)蛋白结构域子宫内膜上皮细胞 Ca2+分泌蛋壳品质

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3种贵州地方鸡盲肠菌群结构特征的比较

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南方农业学报 2024年第2期55卷 323-333页

作者：杨胜宏杨永鲜龙小霞李辉张福平周迪王忠贵州大学高动物科学学院/原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省种畜禽种质测定中心贵州贵阳550018

【目的】基于微生物16S rRNA测序技术探究3种贵州地方鸡的盲肠菌群结构特征,鉴别不同品种鸡盲肠富集的特定菌群,从肠道菌群角度解析地方鸡遗传资源特性,进而加深对贵州地方鸡肠道菌群特征的认识。【方法】选取3种贵州地方鸡(乌蒙乌骨鸡1... 详细信息

【目的】基于微生物16S rRNA测序技术探究3种贵州地方鸡的盲肠菌群结构特征,鉴别不同品种鸡盲肠富集的特定菌群,从肠道菌群角度解析地方鸡遗传资源特性,进而加深对贵州地方鸡肠道菌群特征的认识。【方法】选取3种贵州地方鸡(乌蒙乌骨鸡11羽、黔东南小香鸡12羽及瑶山鸡12羽),采集盲肠内容物样品检测16SrRNA序列V3~V4可变区,通过QIIME计算鸡盲肠菌群Alpha多样性,以主坐标分析(PCoA)评估鸡盲肠菌群Beta多样性;采用SparCC算法构建盲肠菌群互作网络,使用马修斯相关系数(MCC)算法进行枢纽菌群识别,并以LEfse分析鉴别组间差异的菌群类别及功能通路。【结果】从35羽贵州地方鸡盲肠内容物共测序获得2625245条Clean reads,按序列相似度97%的阈值进行聚类分析共获得727个OTUs。在门分类水平上,3种贵州地方鸡盲肠菌群的优势菌包括拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门、互养菌门和螺旋菌门;在属分类水平上,相对丰度排名前5的属为拟杆菌属、理研菌科_RC9_菌群、考拉杆菌属、普拉梭菌属和脱硫弧菌属。从乌蒙乌骨鸡、黔东南小香鸡和瑶山鸡盲肠菌群中分别获得160、144和149个OTUs用于菌群互作网络研究,对盲肠菌群互作网络结构分析发现网络稳定性排序为瑶山鸡(稳定性指数44.22%)>黔东南小香鸡(稳定性指数41.76%)>是乌蒙乌骨鸡(稳定性指数37.56%),而网络复杂性排序为黔东南小香鸡>乌蒙乌骨鸡>瑶山鸡。颤螺菌属是黔东南小香鸡和瑶山鸡盲肠菌群互作网络中重要性评分最高的枢纽菌群,乳酸杆菌属是黔东南小香鸡盲肠的枢纽菌群,理研菌科_RC9_菌群是乌蒙乌骨鸡盲肠的枢纽菌群。LEfSe分析结果表明,乌蒙乌骨鸡盲肠富集到15个特征OTUs,其功能通路涉及氨基酸生物合成、2-氧羧酸代谢、精氨酸生物合成等;黔东南小香鸡盲肠富集到2个特征OTUs,其功能通路涉及光合作用和链霉素生物合成;瑶山鸡盲肠富集到6个特征OTUs,仅涉及脂多糖生物合成功能通路。【结论】品种是影响贵州地方鸡盲肠菌群组成和结构的重要因素,一些特定微生物存在于不同品种鸡盲肠中。其中,理研菌科_RC9_菌群、瘤胃球菌属、紫单胞菌属等在乌蒙乌骨鸡盲肠中富集;巨单胞菌属、理研菌科_RC9_菌群、考拉杆菌属等在瑶山鸡盲肠中富集;脱硫弧菌属和普拉梭菌属在黔东南小香鸡盲肠中富集。

关键词：乌蒙乌骨鸡黔东南小香鸡瑶山鸡盲肠菌群结构特异性

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COL1A1基因在贵州黑山羊性腺轴中的表达及其对产羔相关基因的影响

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农业生物技术学报 2022年第11期30卷 2152-2162页

作者：周明帅温晓艳张艳李永徐畅杨秀远赵佳福贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/动物科学学院

型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠα1 chain, COL1A1)作为Ⅰ型胶原蛋白的重要组成成分，在参与调控卵泡发育及卵巢细胞增殖中发挥作用，与动物繁殖性状密切相关。为探究COL1A1基因与贵州黑山羊(Capra hircus)繁殖力间的关系，及其不同... 详细信息

型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠα1 chain, COL1A1)作为Ⅰ型胶原蛋白的重要组成成分，在参与调控卵泡发育及卵巢细胞增殖中发挥作用，与动物繁殖性状密切相关。为探究COL1A1基因与贵州黑山羊(Capra hircus)繁殖力间的关系，及其不同表达水平对产羔相关基因的影响，本研究采集单羔、多羔贵州黑山羊性腺轴组织(子宫,卵巢,垂体,下丘脑,输卵管)，采用qPCR检测COL1A1基因在单羔、多羔山羊性腺轴中的表达水平，随后分离培养卵巢颗粒细胞；通过RNA干扰技术，构建目的基因的干扰载体，并转染至卵巢颗粒细胞中，使用qPCR及Western blot方法检测COL1A1基因及其蛋白的表达量，筛选最佳干扰组，再通过qPCR方法检测干扰COL1A1基因后对产羔相关基因骨形态发生蛋白15 (bone morphogenetic protein 15, BMP15)、骨形态发生蛋白受体1B (bone morphogenetic protein receptor 1B, BMPR-1B)、生长分化因子9 (growth differentiation factor 9, GDF9)和促卵泡激素β亚基(follicle stimulating hormone β-subunit,FSHβ)表达的影响。结果表明，COL1A1基因在单羔和多羔子宫、卵巢、垂体、下丘脑和输卵管组织中均有表达。其中在多羔组卵巢、下丘脑中表达量最高，且极显著高于单羔组(P<0.01)，在垂体和输卵管中显著高于单羔组(P<0.05)，在子宫中无显著性差异；免疫荧光结果表明，实验中分离培养的细胞为卵巢颗粒细胞；qPCR及Western blot结果表明，shRNA-COL1A1-2为最佳干扰组，而且抑制COL1A1基因的表达后，产羔相关基因BMP15、BMPR-1B、GDF9和FSHβ的表达量均极显著低于shRNA-NC组(P<0.01)。本研究揭示了COL1A1基因在单羔、多羔贵州黑山羊性腺轴中的表达差异，其在多羔卵巢组织中的高表达及沉默COL1A1基因对产羔相关基因的抑制，说明COL1A1基因与卵巢发育及卵泡生长密切相关，可作为贵州黑山羊多羔品系选育的候选基因。

关键词： COL1A1基因贵州黑山羊性腺轴卵巢颗粒细胞产羔性状

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柯乐猪PAEP基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1593-1602页

作者：赵永郭小江李维熊力杨红文王春源吴燕向进张依裕贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学香猪研究所贵阳550025 贵州省畜禽遗传资源管理站贵阳550001 贵州省草地技术试验推广站贵阳550001 贵州省动物疫病预防控制中心贵阳550001

【目的】研究孕激素相关子宫内膜蛋白(progestogen associated endometrial protein,PAEP)基因多态性对柯乐猪繁殖性状的影响,以挖掘柯乐猪的高繁殖力基因,用于提升柯乐猪的繁殖力。【方法】以189头经产柯乐猪为试验动物,采用PCR产物测... 详细信息

【目的】研究孕激素相关子宫内膜蛋白(progestogen associated endometrial protein,PAEP)基因多态性对柯乐猪繁殖性状的影响,以挖掘柯乐猪的高繁殖力基因,用于提升柯乐猪的繁殖力。【方法】以189头经产柯乐猪为试验动物,采用PCR产物测序和序列比对鉴定单核苷酸多态性(SNP)位点,利用SHEsis在线软件分析SNP位点的群体遗传特性,通过RNAfold、SOPMA、SWISS-MODEL和SWISS-PdbViewer程序对SNP位点进行生物信息学分析,利用SPSS 22.0软件分析PAEP基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状的相关性。【结果】在柯乐猪PAEP基因中共鉴定到3个SNPs位点:外显子4的g.1884992 T>C位点,为错义突变,导致第135位缬氨酸(V)变成丙氨酸(A);内含子4的g.1885152 G>C和g.1887834 G>A位点。3个突变位点均检测到3种基因型;g.1884992 T>C位点属于低度多态(PIC<0.25),g.1885152 G>C、g.1887834 G>A位点属于中度多态(0.25C位点产生的基因型分布未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);g.1885152 G>C和g.1887834 G>A位点产生的基因型分布均极显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。连锁分析发现,g.1885152 G>C和g.1887834 G>A位点完全连锁,共产生3种单倍型和6种双倍型。g.1884992 T>C位点引起PAEP基因mRNA及蛋白的二级结构发生改变。关联分析结果表明,g.1884992 T>C位点对柯乐猪总产仔数和产活仔数的影响均达到显著水平(P<0.05),g.1885152 G>C、g.1887834 G>A位点对柯乐猪总产仔数、产活仔数、断奶仔数和断奶窝重的影响均达到显著水平(P<0.05);双倍型H3H3个体总产仔数、产活仔数、断奶仔数和断奶窝重均显著高于其他5种双倍型(P<0.05),初生窝重显著高于双倍型H1H1、H2H2和H2H3(P<0.05);双倍型H1H3个体的总产仔数和断奶仔数显著高于双倍型H1H1、H1H2、H2H2和H2H3(P<0.05),产活仔数显著高于双倍型H2H3(P<0.05)。【结论】PAEP基因中存在的3个SNPs对柯乐猪繁殖性状有显著影响,其中H3H3为有利双倍型,可作为柯乐猪繁殖性状选择的遗传标记。

关键词：柯乐猪 PAEP基因单核苷酸多态性繁殖性状

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从江香猪睾丸支持细胞分离培养与鉴定

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西南农业学报 2022年第8期35卷 1948-1953页

作者：高艺黄泳冯贤辀王维勇徐永健龚婷贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025

【目的】建立一种高效制备从江香猪睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)体外分离培养方法,为后续香猪雄性繁殖研究提供细胞材料,为同类小型香猪支持细胞的分离培养提供参考。【方法】采用0.1%Ⅳ型胶原酶和0.25%胰酶-EDTA组合酶消化法消化... 详细信息

【目的】建立一种高效制备从江香猪睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)体外分离培养方法,为后续香猪雄性繁殖研究提供细胞材料,为同类小型香猪支持细胞的分离培养提供参考。【方法】采用0.1%Ⅳ型胶原酶和0.25%胰酶-EDTA组合酶消化法消化睾丸组织,差速贴壁法纯化支持细胞,使用含10%胎牛血清完全培养基培养支持细胞,观察其形态特征并记录生长曲线,经苏木精—伊红(HE)染色、RT-PCR及免疫荧光染色进行支持细胞的鉴定。【结果】组合酶法消化后可获得大量生精上皮细胞混悬液,刚分离的支持细胞呈圆形或椭圆形,分离培养5~6 h后SCs贴壁,贴壁后细胞形态呈梭形或不规则形,培养3~4 d后细胞之间呈紧密连接,可清晰观察到细胞核及细胞质中的颗粒状物质或小空泡;SCs分离后1~2 d增殖速度缓慢,培养3~6 d细胞增殖速度加快,活性增强,进入对数生长期,培养7~8 d后细胞增殖速率下降,原代支持细胞生长曲线呈S形;HE染色显示SCs细胞核为深紫色,细胞质呈淡红色;RT-PCR结果显示支持细胞特异性基因WT1、SOX9均表达;免疫荧光染色结果显示特异性基因GATA-4抗体免疫阳性率达90%以上。【结论】成功建立从江香猪睾丸支持细胞的原代培养方法。

关键词：睾丸支持细胞分离培养鉴定从江香猪

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柯乐猪MMP2基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

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中国畜牧兽医 2024年第3期51卷 1142-1150页

作者：向进杨齐心罗华伦洪亚婷郭小江杨红文李维王春源吴燕张依裕贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学香猪研究所贵阳550025 贵州省畜禽遗传资源管理站贵阳550001 贵州省草地技术试验推广站贵阳550001 黔西南州农业农村局兴义562400

【目的】探究基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)及其与繁殖性状的相关性,筛选与柯乐猪繁殖性状相关的遗传标记。【方法】试验选择212头健康的经产柯乐母猪,采... 详细信息

【目的】探究基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)及其与繁殖性状的相关性,筛选与柯乐猪繁殖性状相关的遗传标记。【方法】试验选择212头健康的经产柯乐母猪,采用直接测序法筛选柯乐猪MMP2基因SNP位点,利用RNAfold在线软件预测MMP2基因不同单倍型mRNA二级结构,并通过SPSS 22.0软件分析MMP2基因SNP位点与柯乐猪繁殖性状的相关性。【结果】在柯乐猪MMP2基因第2外显子中检测到1个SNP位点(g.30062403 C>T),在第4外显子中检测到2个SNPs位点(g.30065309 C>T和g.30065312 C>T),均存在3种基因型(CC、CT和CT)。遗传特性分析结果显示,g.30062403 C>T位点为低度多态,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点属于中度多态。卡方适合性检验结果显示,g.30062403 C>T位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),另2个位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。连锁不平衡分析结果显示,g.30065309 C>T和g.30065312 C>T位点之间存在强连锁不平衡。单倍型mRNA二级结构分析显示,单倍型H1的mRNA二级结构与原序列相同,其他3种单倍型均导致mRNA二级结构和最小自由能发生变化。关联分析结果显示,g.30062403 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数显著高于CC基因型,断奶窝重显著高于CT基因型(P<0.05);g.30065309 C>T位点CC基因型个体的断奶仔数显著高于TT基因型(P<0.05);g.30065312 C>T位点TT基因型个体的窝产活仔数、断奶仔数均显著高于CT基因型(P<0.05)。双倍型H2H2为窝产仔数、窝产活仔数、断奶仔数、断奶窝重的优势双倍型,H1H4为初生窝重的优势双倍型。【结论】柯乐猪MMP2基因3个SNPs位点与其窝产仔数、窝产活仔数、初生窝重、断奶仔数及断奶窝重均存在显著关联性,可作为分子育种遗传标记。

关键词：柯乐猪 MMP2基因多态性繁殖性状关联分析

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