检索结果-内蒙古大学图书馆

基因组学与应用生物学 2021年第4期40卷 1838-1845页

作者：张亮亮易婉婷黄江涛代杰曾柱贾义贵州医科大学贵州省免疫细胞和抗体工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学医学生物技术工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

硒是人和动物必需的微量元素,不同浓度的硒可以调节猪、羔羊、小鼠、人和酵母中与脂质和葡萄糖代谢相关基因的表达水平,但是目前尚不清楚低剂量硒对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因的影响。因此,我们通过实时荧光定量PCR和基因组学分... 详细信息

硒是人和动物必需的微量元素,不同浓度的硒可以调节猪、羔羊、小鼠、人和酵母中与脂质和葡萄糖代谢相关基因的表达水平,但是目前尚不清楚低剂量硒对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因的影响。因此,我们通过实时荧光定量PCR和基因组学分析,研究了亚硒酸钠对HepG2细胞中脂质和葡萄糖代谢相关基因表达水平的影响。结果表明,脂质代谢相关基因FAR1,DGKD和HILPDA在24 h和36 h时表达增加,葡萄糖代谢相关基因UGDH,IRS-2和PEPCK在24 h和36 h时表达增加。与对照组相比,0.1μmol/L亚硒酸钠处理HepG2细胞24 h可以增加TRAP1,HILPDA和PEPCK的表达水平,它们在肿瘤发生发展中起着重要的作用。此外,转录组学分析表明,亚硒酸钠可以改变代谢调控网络,包括萜类骨架的生物合成、胰岛素抵抗、磷酸肌醇代谢和细胞周期途径等。以上结果表明,0.1μmol/L亚硒酸钠可能会影响HepG2细胞的脂质和葡萄糖代谢,影响肿瘤的发生发展。

关键词：亚硒酸钠脂质代谢葡萄糖代谢 HepG2细胞

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不同射线剂量对鼻咽癌细胞蛋白表达谱的影响

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基因组学与应用生物学 2021年第5期40卷 2397-2404页

作者：崔忠慧曾宪琳胡祖权张世超王赟龙金华曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 附属肿瘤医院头颈肿瘤科贵阳550025

探讨不同的射线剂量对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞蛋白表达谱的影响,以期从放射免疫学的角度深入理解NPC的临床治疗模式。利用固相p H梯度双向凝胶电泳研究5-8F NPC经不同射线剂量照射不同时间后的蛋白质表达谱,MALDI-TOF... 详细信息

探讨不同的射线剂量对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞蛋白表达谱的影响,以期从放射免疫学的角度深入理解NPC的临床治疗模式。利用固相p H梯度双向凝胶电泳研究5-8F NPC经不同射线剂量照射不同时间后的蛋白质表达谱,MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达蛋白并用RT-qPCR和Western blot进行验证。发现不同射线对NPC细胞的蛋白表达谱有影响,并鉴定出24个差异表达的蛋白质,涉及抗原处理、抗原提呈、蛋白酶体泛素化和内质网应激等过程,其中热休克蛋白70A1A,蛋白酶体α、β等的表达水平呈射线剂量依赖性,可能是NPC细胞的肿瘤相关抗原。

关键词：鼻咽癌射线照射蛋白表达谱肿瘤抗原

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单链抗体融合蛋白FvCA4-218-AP原核表达条件优化及活性检测

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基因组学与应用生物学 2021年第9期40卷 3277-3282页

作者：赵雪李淑琴李世美于欢尚国富彭晓燕黄江涛曾柱胡祖权贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025

为实现抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP在大肠杆菌中可溶性高效表达,本研究在不同诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件下培养重组大肠杆菌XL1-Blue[pDAP2/S-(Fv CA4-218-AP)],收集诱导培养的菌液,经过超声波破碎处理... 详细信息

为实现抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP在大肠杆菌中可溶性高效表达,本研究在不同诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件下培养重组大肠杆菌XL1-Blue[pDAP2/S-(Fv CA4-218-AP)],收集诱导培养的菌液,经过超声波破碎处理后离心收集总蛋白,并通过碱性磷酸酶直接显色法、Western blot和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量、可溶性和活性等表达情况。结果显示在重组大肠杆菌培养至OD600为0.5时加入0.5 mmol/L IPTG,在25℃诱导表达6~8 h可获得较高表达量和活性的可溶性融合蛋白。因此,通过优化原核表达的诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件,可以显著提高抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP的表达水平,为发展快速免疫检测方法提供了实验基础。

关键词：镰刀菌融合蛋白碱性磷酶酶免疫检测原核表达条件

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MTT法检测奶牛乳房炎无乳链球菌活菌数的研究

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中国动物传染病学报 2021年第6期29卷 100-104页

作者：马林玉胡家银林煊陈鹤丹谢颖付文莉杨君仪刘丽娜贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心医药生物技术工程研究中心贵阳550025

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法... 详细信息

为建立一种准确、快速反映无乳链球菌活菌数的计数方法,以奶牛乳房炎致病菌中的无乳链球菌为研究对象,对MTT计数法中的最大吸收波长、MTT和DMSO最佳用量、无乳链球菌与MTT最适反应时间等影响因素进行了优化,并对MTT法与平板菌落计数法定量检测结果进行了比较。结果显示:MTT法测定无乳链球菌活菌数的最大吸收波长为570 nm,0.5 mg/mL MTT与100μL无乳链球菌菌液反应的最佳反应量为45μL,最适反应时间为3 h,溶解产物的DMSO最佳用量为125μL;无乳链球菌活菌数在1.5×10^(7)~4.73×10^(8 )CFU/mL范围内时,MTT法与平板菌落计数法定量结果具有较好的线性关系(R^(2)>0.99)。结果表明,本研究建立的MTT法可用于无乳链球菌活菌计数。

关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 MTT 活菌计数

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抗伏马菌素单链抗体与碱性磷酸酶的融合表达及活性鉴定

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基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 252-257页

作者：刘江丽赵雪尚国富于欢彭晓燕王赟周静刘丽娜曾柱胡祖权贵州医科大学贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli... 详细信息

为原核表达抗伏马菌素单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白并分析其活性,本研究根据抗伏马菌素单链抗体H2的基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因,经限制性核酸内切酶SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点克隆到pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌(Eschrichia coli)菌株XL1-Blue并鉴定阳性转化子。IPTG诱导H2-AP融合蛋白基因的表达,利用Western blot检测其表达情况,AP显色反应和ELISA鉴定其活性。结果显示成功构建了pDAP2/S-H2原核表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中实现可溶性表达,并保留单链抗体和碱性磷酸酶的活性。因此,H2-AP融合蛋白通过原核表达后可用于发展伏马菌素的快速免疫检测方法。

关键词：伏马菌素单链抗体碱性磷酸酶融合表达

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家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin15的克隆表达及重组蛋白的体外活性分析

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环境昆虫学报 2021年第3期43卷 699-709页

作者：杜敏池骋张涛黄兰英杨慧国果吴建伟尚小丽贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性,本文对家蝇Serpin15基因进行了生物信息学分析和克隆表达,并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究。结果显示:家蝇Serpin15基因ORF框全长为1353 bp,编码450个氨基酸,理论... 详细信息

为探明家蝇重组Serpin15蛋白的体外活性和酶稳定性,本文对家蝇Serpin15基因进行了生物信息学分析和克隆表达,并对纯化后的家蝇重组Serpin15蛋白进行了酶特性的研究。结果显示:家蝇Serpin15基因ORF框全长为1353 bp,编码450个氨基酸,理论分子量为51076.63 Da,有信号肽和一个标志抑制活性的功能结构域RCL反应环;成功构建原核表达载体pET-28a(+)-Serpin15,经诱导表达和纯化获得家蝇重组Serpin15蛋白;重组蛋白酶特性研究发现,家蝇重组Serpin15蛋白对胰蛋白酶有极显著的抑制作用,此外,将重组Serpin15蛋白经20~60℃热处理15 min,或经pH 6~10过夜处理,或经50℃和pH 8处理后室温存放15~90 min,重组蛋白的胰蛋白酶抑制活性均仍大于70%。研究结果为家蝇Serpin15蛋白的免疫功能研究奠定了重要实验基础,也为有害昆虫杀虫剂的研发提供思路。

关键词：家蝇 Serpin15基因原核表达抑制活性酶稳定性

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大剂量放射鼻咽癌细胞衍生外泌体诱导树突状细胞成熟的研究

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医用生物力学 2024年第S1期39卷 126-126页

作者：冷吉曾宪琳曾柱贵州医科大学基础医学院贵阳550000 贵州医科大学生物与工程学院(健康医药现代产业学院) 贵阳550000 贵州省感染与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵阳550000

目的放疗是鼻咽癌的主要治疗方法之一。作为体内最强大的抗原提呈细胞,树突状细胞(dendritic cells,DCs)在肿瘤的发生发展中发挥着关键作用。然而,大剂量放射(>2 Gy)对鼻咽癌的影响及其诱导的免疫应答类型尚不明确。因此,本课题旨在... 详细信息

目的放疗是鼻咽癌的主要治疗方法之一。作为体内最强大的抗原提呈细胞,树突状细胞(dendritic cells,DCs)在肿瘤的发生发展中发挥着关键作用。然而,大剂量放射(>2 Gy)对鼻咽癌的影响及其诱导的免疫应答类型尚不明确。因此,本课题旨在探究不同剂量放射后鼻咽癌细胞衍生外泌体对DCs免疫功能的影响及机制。方法通过超速离心分离放疗后鼻咽癌细胞衍生外泌体,透射电镜和纳米颗粒追踪技术表征外泌体,与DCs共培养后,流式细胞术及RT-q PCR检测DCs免疫表型变化的情况。结果成功获得鼻咽癌细胞衍生外泌体。与PBS组相比,DCs与鼻咽癌细胞衍生外泌体共培养后,共刺激分子CD80、CD40及趋化因子受体CCR7表达上调,结论大剂量放疗鼻咽癌细胞衍生的外泌体可诱导DCs分化成熟。

关键词：外泌体树突状细胞抗原提呈细胞鼻咽癌细胞免疫表型流式细胞术共刺激分子超速离心

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利什曼原虫感染树突状细胞早期基因表达差异分析及关键基因筛选

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中国免疫学杂志 2021年第1期37卷 13-20页

作者：余鹏宋咏刚黄卓闵海黄江涛张世超陈晋胡祖权王赟(指导) 曾柱(指导) 贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵阳市妇幼保健院优生遗传科贵阳550003 贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

目的:分析利什曼原虫感染树突状细胞(DCs)早期的基因表达与信号通路变化,探究DCs感染后应答,寻找利什曼原虫感染后基于DCs的免疫治疗方法。方法:GEO数据库下载利什曼原虫感染前后DCs基因芯片数据,RStudio软件筛选差异表达基因(DEGs),STR... 详细信息

目的:分析利什曼原虫感染树突状细胞(DCs)早期的基因表达与信号通路变化,探究DCs感染后应答,寻找利什曼原虫感染后基于DCs的免疫治疗方法。方法:GEO数据库下载利什曼原虫感染前后DCs基因芯片数据,RStudio软件筛选差异表达基因(DEGs),STRING构建DEGs蛋白质相互作用网络(PPI),Cytoscape筛选差异表达蛋白质的核心模块,RStudio软件对DEGs进行GO和KEGG富集分析。结果:共筛选出DEGs 129个,其中IL12B与CXCL10差异最为显著,GO分析共富集23个过程,主要涉及病毒感染过程相关细胞反应及Ⅰ-IFN相关免疫反应;KEGG分析共富集3条信号通路,分别为甲型流感、麻疹及DNA复制信号通路。结论:利什曼原虫感染DCs前后Ⅰ-IFN信号通路和TLR4/NF-κB信号通路激活,影响IL12表达,提示Ⅰ-IFN/IL12信号通路与TLR4/NF-κB/IL12信号通路可作为利什曼原虫感染治疗的靶点,CXCL10也有望成为潜在的治疗靶点;利什曼原虫感染后,出现类似病毒感染现象,推测抗病毒免疫疗法可能在对抗利什曼原虫感染中具有一定疗效。

关键词：利什曼原虫树突状细胞生物信息学基因芯片

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渗透压对未成熟树突状细胞生物力学特性和免疫学功能的影响

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医用生物力学 2020年第2期35卷 202-207页

作者：石玉玲胡祖权闵海宋咏刚赵雪王赟邱炜吴宁曾柱贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞... 详细信息

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞电泳迁移率的改变,荧光偏振法检测细胞的膜流动性,实时荧光定量PCR检测免疫相关分子的表达变化,流式细胞仪检测细胞的抗原吞噬能力。结果高、低渗均会改变im DCs的F-actin结构,甚至诱导细胞凋亡。低渗组电泳率显著高于等渗组,高渗组电泳率低于等渗组(P<0.05)。荧光偏振结果显示,高、低渗均会显著降低细胞的膜流动性(P<0.05);q PCR结果发现,高、低渗会显著上调im DCs免疫表型分子CCR7、CD40、CD205、CD11a、CD11c的表达和抗原吞噬能力(P<0.05)。结论高、低渗应激会影响im DCs生物力学特性和免疫表型分子表达,研究结果对深入理解DCs的免疫调节功能具有重要意义。

关键词：树突状细胞渗透压生物力学特性免疫学功能

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树突状细胞分化过程中部分微丝结合蛋白表达差异

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基因组学与应用生物学 2020年第12期39卷 5844-5850页

作者：王佳邱炜叶远浓胡祖权王赟曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状... 详细信息

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)和成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)。利用蛋白免疫印迹法检测MOs、imDCs和m DCs中部分微丝结合蛋白的表达水平,然后联合逐步回归分析和主成分分析在这些微丝结合蛋白中筛选出起关键作用的蛋白。DCs分化过程中,Arp2/3复合体、caldesmon、gelsolin、WASP、WAVE 1、fascin、filamin A、α-actinin和Cap Z的表达水平均发生了不同程度的上调,formin的表达水平发生下调,profilin和VASP的表达水平没有明显变化。联合逐步回归分析和主成分分析发现,在这些微丝结合蛋白中,Cap Z可能在DCs分化过程中起关键作用。DCs分化过程中部分微丝结合蛋白的表达发生了明显变化,可能与其形态和免疫学功能的变化密切相关,这对深入理解DCs的生物学行为来说具有重要意义。

关键词：树突状细胞微丝结合蛋白分化逐步回归分析主成分分析

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