检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2022年第5期17卷 537-541页

作者：曾晓燕全欣莹李雷蕾贾岑岑廖永慧谢渊赵艳周建奖贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA... 详细信息

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA基因敲除株和1株CagA C端缺失株的Hp以感染复数30∶1分别感染AGS细胞6 h和7 d,观察不同时间点的细胞形态变化。以未感染及煮沸10 min的Hp感染AGS细胞为空白对照及阴性对照。从GenBank数据库收集150条cagA基因序列,用MEGA7.0软件进行聚类分析。结果cagA基因敲除株和cagA基因C端缺失株Hp感染AGS细胞6 h均未出现明显的细胞形态改变,其它7株(cagA基因完整)感染细胞后均出现明显的蜂鸟样表型的形态改变。将9株Hp煮沸10 min灭活后感染的细胞也未出现明显的形态改变。Hp持续感染7 d后,只有3株西方株和1株东亚株感染的细胞呈现蜂鸟样表型,另3株带CagA的EPIYA基序变异的东亚株未发生细胞形变。聚类分析显示,多株起源于东亚国家日本、中国和韩国的Hp聚类于西方株,且西方株CagA中EPIYA基序更容易发生变异。结论Hp西方株在中国和其它东亚国家普遍流行,其CagA比东亚株的CagA有更强的致细胞形变能力和更多的EPIYA基序变异,完整的CagA序列是诱导细胞形变的主要因素。这些数据对深入研究Hp不同基因型的致病能力有重要意义。

关键词：幽门螺杆菌 CagA 聚类分析细胞形态学

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幽门螺杆菌CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响

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中国病原生物学杂志 2021年第2期16卷 155-160页

作者：陈定宇何小凤张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响。方法用CagA基因失活突变Hp菌株(1004Hp△cagA)和野生型1004Hp菌株分别感染人胃上皮细胞GES-1和AGS 24 h,收集标本。Western blot检测各... 详细信息

目的评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响。方法用CagA基因失活突变Hp菌株(1004Hp△cagA)和野生型1004Hp菌株分别感染人胃上皮细胞GES-1和AGS 24 h,收集标本。Western blot检测各组细胞中CagA蛋白、线粒体融合分裂蛋白Mfn1、Mfn2、Fis1和Drp1的表达情况;加入JC-1荧光探针后,荧光显微镜观察各组细胞线粒体膜电位变化;ATP检测试剂盒检测各组细胞中ATP生成水平的变化。结果Western blot鉴定显示野生型1004Hp中有CagA的表达,而1004Hp△cagA无CagA的表达。1004Hp感染组与1004Hp△cagA感染组比较,线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2表达下降(P<0.05),线粒体分裂蛋白Fis1、Drp1表达上升(P<0.05),线粒体膜电位下降,且在GES-1和AGS两株细胞结果一致。1004Hp感染组和1004Hp△cagA中AGS和GES-1细胞ATP相对生成量分别为0.30±0.03、0.64±0.04和0.64±0.01、1.23±0.19,AGS中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降53.1%,GES-1中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降48.0%(P<0.05)。结论Hp/cagA影响线粒体动态平衡,诱发功能障碍,可能是Hp引起胃部病理变化的原因之一。

关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白CagA 线粒体融合线粒体分裂线粒体膜电位

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一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用

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环境与健康杂志 2018年第2期35卷 128-132,F0003页

作者：朱丹刘宇平桂传枝官志忠贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004 贵州省分子生物学重点实验室贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1... 详细信息

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4 mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、Na F(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、Na F和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO和1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力。结果与对照组相比,0.02~4 mmol/L Na F染毒组及4~10 mmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L Na F染毒组e NOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,仅1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起的原代海马神经细胞e NOS蛋白、m RNA表达及细胞凋亡率增高,起到一定的神经保护作用。

关键词：氟中毒海马神经细胞内皮型一氧化氮合酶一氧化氮 L-亚氨基乙基鸟氨酸

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燃煤污染型地方性氟中毒患者外周血DNA甲基化分析

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中华地方病学杂志 2021年第2期40卷 93-98页

作者：毛春燕官志忠吴昌学李毅齐晓岚贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探讨燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型氟中毒)患者外周血DNA甲基化模式及甲基化差异基因,为氟化物诱导机体损伤的发病机制研究提供依据。方法采用病例-对照研究方法,在贵州省六盘水水城县辖内常年敞灶燃用高氟煤的陡箐乡选择10例... 详细信息

目的探讨燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型氟中毒)患者外周血DNA甲基化模式及甲基化差异基因,为氟化物诱导机体损伤的发病机制研究提供依据。方法采用病例-对照研究方法,在贵州省六盘水水城县辖内常年敞灶燃用高氟煤的陡箐乡选择10例重度氟中毒患者为病例组,并在同地区以木柴为主要燃料的花嘎乡选择10例无氟中毒症状者为对照组。采集两组人群外周血,采用简并代表性亚硫酸氢盐测序(RRBS)技术,分析外周血全基因组DNA甲基化模式(n=4)、DNA差异甲基化区域(differentially methylated region,DMR),结合DMR差异程度(log2Ratio值)和KEGG通路富集分析筛选甲基化差异基因;采用实时荧光定量PCR,验证候选甲基化差异基因的mRNA表达水平(n=10)。结果甲基化模式分析结果显示,病例组与对照组基因DNA的所有C碱基甲基化水平分别为(61.53±0.59)%、(62.48±1.53)%;其中,CG位点甲基化水平分别为(63.75±0.65)%、(64.36±1.01)%,CHG位点分别为(13.79±0.72)%、(16.69±4.06)%,CHH位点分别为(25.12±1.72)%、(29.77±3.97)%。与对照组比较,病例组患者分布在不同常染色体上的DMR共有1000段;其中19号染色体最多,为104段。DMR相关基因978个,其中高甲基化基因265个、低甲基化基因713个;KEGG通路富集分析结果显示,甲基化差异基因主要参与细胞新陈代谢、癌症发生、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)等信号通路;结合DMR差异程度,以高甲基化的琥珀酸脱氢酶复合物黄素蛋白亚基A假基因3(SDHAP3,log2Ratio=3.487)和低甲基化的核因子κB抑制剂激酶调节亚基γ(IKBKG,log2Ratio=-4.436)为候选基因。病例组与对照组人群SDHAP3(0.54±0.08、1.00±0.00)、IKBKG mRNA表达水平(1.32±0.39、1.00±0.00)比较,差异均有统计学意义(F=22.94、15.09,P<0.01或<0.05)。结论燃煤型氟中毒患者与对照人群基因组中存在大量的甲基化差异基因,其中高甲基化的SDHAP3及低甲基化的IKBKG可能参与了燃煤污染型氟化物诱导的机体损伤。

关键词：氟化物煤 DNA甲基化机体损伤

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Stattic增强三氧化二砷诱导急性髓样白血病THP1细胞生存和凋亡的机制

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西安交通大学学报（医学版） 2021年第1期42卷 53-58页

作者：吴昌学赵艳张婷张健禹文峰柏华张启芳贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学贵州贵阳550004 贵州医科大学第三附属医院医学中心实验室贵州都匀558000

目的探讨STAT3抑制剂Stattic联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)THP1细胞生存和凋亡的影响及其作用机制。方法以THP1细胞株为研究对象,用CCK8法检测Stattic联合ATO对THP1细胞生存的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡、ROS水平,用Caspase 3/7 Glo assay试剂盒检测细胞Caspase 3/7活性,用qPCR检测mRNA表达,Western blotting检测蛋白表达。结果Stattic可明显抑制磷酸化STAT3的水平,显著加剧ATO对AML细胞生存抑制,增强ATO诱导的细胞凋亡和氧化应激产物。Stattic显著抑制ATO上调的Nrf2的表达以及下游基因的表达。结论Stattic可增强ATO对AML细胞生存抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与抑制Nrf2和Nrf2下游基因表达引起ROS增多有关。

关键词： Stattic 三氧化二砷 THP1细胞细胞生存凋亡 Nrf2

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线粒体DNA拷贝数与燃煤污染型地方性氟中毒的关联分析

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中华地方病学杂志 2022年第2期41卷 111-116页

作者：赵安宿田薇喻艳琴李瑞超王婵娟张婷单可人何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探讨相对线粒体DNA拷贝数(mitochondrial DNA copy number,mtDNA-CN)与燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型地氟病)的关联。方法2018年6月至2019年3月,采用横断面研究,在贵州省典型燃煤型地氟病病区毕节市选择482例燃煤型地氟病患者... 详细信息

目的探讨相对线粒体DNA拷贝数(mitochondrial DNA copy number,mtDNA-CN)与燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型地氟病)的关联。方法2018年6月至2019年3月,采用横断面研究,在贵州省典型燃煤型地氟病病区毕节市选择482例燃煤型地氟病患者作为病例组;同时,在非病区长顺县选择212例健康人群作为对照组。通过问卷调查和体格检查收集两组人群基本信息、生活行为习惯等一般情况,采集外周静脉血血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血相对mtDNA-CN;应用二分类和无序多分类logistic回归等方法分析相对mtDNA-CN与燃煤型地氟病的相关性。结果对照组与病例组人群的体质指数(body mass index,BMI)及性别比例、婚姻状况、文化程度分布情况比较差异均有统计学意义(t=7.91,χ2=5.11、13.33、34.32,P均<0.05);且对照组人群相对mtDNA-CN高于病例组[中位数(四分位数):202(138,292)比131(96,217),Z=-7.80,P<0.001]。二分类logistic回归分析结果[比值比(95%置信区间)]显示,文化程度[小学:0.572(0.377~0.868)、初中及以上:0.292(0.174~0.493)]、相对mtDNA-CN[131~<217:0.265(0.144~0.488)、≥217:0.183(0.100~0.335)]、BMI[1.222(1.142~1.307)]均为燃煤型地氟病患病风险的影响因素(P均<0.05)。在不同BMI及文化程度亚组中,相对mtDNA-CN与燃煤型地氟病患病风险均呈显著负相关(P趋势均<0.05);相对mtDNA-CN与人群BMI、文化程度对燃煤型地氟病均不存在交互效应(P交互均>0.05)。无序多分类logistic回归分析结果显示,相对mtDNA-CN与氟斑牙、氟骨症的患病风险均呈显著负相关(P趋势均<0.05)。结论相对mtDNA-CN越高,人群燃煤型地氟病患病风险越低,提示mtDNA-CN可能是燃煤型地氟病的潜在生物标志物。

关键词：氟煤线粒体DNA 拷贝数横断面研究影响因素

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杨梅素调控ERK1/2/GSK-3β信号通路保护SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激

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中国药理学与毒理学杂志 2023年第7期37卷 518-519页

作者：王丽唐智李勃彭亚倩齐晓岚贵州医科大学贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学地方病与少数民族病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育... 详细信息

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育48 h，并设立对照组。分别采用Western印迹法检测各处理组细胞突触前蛋白（SNAP25和snaptophysin）和突触后蛋白（PSD95）；磷酸化tau蛋白（p-tau）和总tau蛋白（t-tau）;p-ERK和t-ERK、p-GSK-3β和t-GSK-3β蛋白；线粒体分裂蛋白（动力相关蛋白1,Drp1）和融合蛋白[丝裂蛋白1（Mfn1）和Mfn2]。流式细胞术检测线粒体膜电位变化和活性氧产生，免疫荧光法检测氧化应激标志物8-OHdG和4-HNE变化。结果（1） Aβ1-42寡聚体处理组与杨梅素预处理组对比，其p-tau/t-tau（Taus396/Tau5）的相对表达量增加了43%（P=0.0328）。（2） Aβ1-42的施加降低了突触前蛋白SNAP25（32%）、突触素snaptophysin（23%）和突触后蛋白PSD95（17%）的相对表达量（P=0.0146）。杨梅素预处理可逆转上述指标变化。（3）杨梅素可抑制SH-SY5Y细胞中Aβ1-42寡聚体诱导的ERK1/2和GSK-3β通路磷酸化（P=0.0002,P=0.0253）。（4）杨梅素可恢复SH-SY5Y细胞中Aβ1-42诱导的线粒体融合蛋白和线粒体膜电位降低以及线粒体分裂蛋白DRP1的磷酸化（P<0.05）。（5）杨梅素阻断了Aβ1-42寡聚体诱导的SH-SY5Y细胞中ROS产生和DNA损伤（P<0.01）。结论杨梅素可抑制Aβ1-42寡聚体诱导的tau蛋白过度磷酸化、突触前和突触后蛋白的损伤、线粒体功能障碍及氧化应激反应，并且上述保护作用经GSK-3β和ERK1/2信号通路介导。

关键词：淀粉样蛋白 ERK1/2通路 GSK-3β通路杨梅素寡聚体氧化应激突触损伤

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AGO和RDRP基因参与黄曲霉压力应激反应

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1442-1449页

作者：刘翔杨碧田询周建鸿廖永慧刘玲玲禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种10^(6)CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂... 详细信息

目的探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种10^(6)CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基上观察突变菌株的生长发育现象。在小量酵母提取物葡萄糖(YGM)培养基中加入200、400μg细胞壁压力试剂刚果红(CR),0.8 mol/L、1.6 mol/L渗透压药物氯化钠(NaCl),氧化压力试剂2 mmol/L、4 mmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2)),基因组损伤剂0.01%、0.02%甲磺酸甲酯(MMS)试剂分析突变菌株的压力应激反应。结果成功构建黄曲霉突变菌株ΔAgo1、ΔAgo2、ΔRDRP1、ΔRDRP3且生长发育正常。ΔAgo1、ΔAgo2菌株相比对照可降低对细胞壁和渗透压的胁迫影响。Ago1基因缺失可降低H_(2)O_(2)的影响,相反RDRP3基因缺失,H_(2)O_(2)的抑制作用增加。ΔAgo2、ΔRDRP1菌株能降低对基因损伤剂的作用。此外,ΔRDRP1增加渗透压胁迫作用。结论黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因不参与生长速率和无性繁殖调控,可以参与调节宿主菌对环境的应激反应。

关键词：黄曲霉 RNAi 应激反应

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耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162的分离、鉴定及治疗效果评价

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安徽医科大学学报 2024年第10期59卷 1742-1751页

作者：田询谭文才杨碧刘翔禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的从地下污水中分离出一株鲍曼不动杆菌噬菌体并对其进行研究,为噬菌体治疗鲍曼不动杆菌感染提供理论基础。方法以鲍曼不动杆菌GY-6为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其进行生物学特性检测、治疗效果评价及遗传信息分析。结... 详细信息

目的从地下污水中分离出一株鲍曼不动杆菌噬菌体并对其进行研究,为噬菌体治疗鲍曼不动杆菌感染提供理论基础。方法以鲍曼不动杆菌GY-6为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其进行生物学特性检测、治疗效果评价及遗传信息分析。结果分离到鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162。透射电镜(TEM)分析显示,Abgy202162的形态呈二十面体结构。生物学特性分析表明其最佳感染复数为1,潜伏期为5 min,暴发量大小约为每个细胞520 PFU。此外,Abgy202162在不同浓度的三氯甲烷以及不同pH水平和温度下保持稳定。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,其含有10种蛋白质,分子量为15~100 ku。Abgy202162的双链DNA基因组由40889 bp组成,G+C含量为38.85%,包含47个开放阅读框(ORFs),其中26个ORFs具有特异性功能,未发现毒力相关基因或抗生素耐药基因。系统发育分析显示,Abgy202162是自转录噬菌体科,拜耶林克噬菌体亚科,弗留纳病毒属的一个新的噬菌体。Abgy202162在大蜡螟幼虫体内模型中表现出了治疗鲍曼不动杆菌感染的能力。结论噬菌体Abgy202162对环境耐受性强、安全性高,提示其有望成为抗生素的代替治疗剂用于治疗鲍曼不动杆菌引起的感染。

关键词：鲍曼不动杆菌噬菌体生物学特性基因组分析治疗效果评价大蜡螟幼虫

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CircRNA4736通过“海绵状”吸附miR-206调控Seipin介导的线粒体自噬在缺血性脑卒中再灌注损伤的分子机制

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第6期33卷 409-410页

作者：禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室

目的缺血性脑卒中神经元损伤主要有2种形式:迟发性神经元坏死和凋亡。线粒体损伤和功能紊乱是脑缺血再灌注中导致神经元死亡的重要因素。因此,清除损伤的线粒体并避免对神经元造成更严重危害是缺血性脑卒中溶栓治疗后的再灌注损伤神经... 详细信息

目的缺血性脑卒中神经元损伤主要有2种形式:迟发性神经元坏死和凋亡。线粒体损伤和功能紊乱是脑缺血再灌注中导致神经元死亡的重要因素。因此,清除损伤的线粒体并避免对神经元造成更严重危害是缺血性脑卒中溶栓治疗后的再灌注损伤神经细胞保护的重要策略之一。内质网蛋白Seipin介导的线粒体自噬能够清除受损线粒体,但机制不清。本研究旨在探索circRNA4736是否竞争性吸附miR-206,解除miR-206对Seipin的抑制作用,从而上调Seipin蛋白的表达,促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元凋亡。方法通过RNA-seq检测PC12细胞正常组与OGD/R处理组中差异表达circRNA和miRNA的筛选及验证;构建circRNA4736和Seipin敲除、脑缺血再灌注的动物和细胞模型;检测目标circRNA4736、miR-206与靶基因Seipin内源性表达水平及其相关性;分析miR-206沉默对氧糖剥夺PC12细胞的影响;在PC12细胞中分析过表达circRNA4736通过充当'分子海绵'吸附miR-206,从而抑制miR-206对Seipin的阻碍作用;分析外源性circRNA4736对缺血再灌注损伤的神经细胞的保护作用。结果在Seipin-KO小鼠的MCAO模型发现,线粒体自噬水平较野生型小鼠MCAO模型显著降低;在Seipin敲低的PC12细胞经OGD/R处理后,线粒体自噬水平较野生型PC12细胞显著下降;PC12细胞Seipin缺失导致Akt-m TOR信号活性增加;通过全转录组测序分析获得了差异表达倍数最高的circRNA4736;同时我们发现,miR-206表达水平与circRNA4736呈负相关;双荧光素酶报告基因检测发现miR-206与circRNA4736和Seipin之间均具有相互结合位点,并且过表达circRNA4736或下调miR-206能够恢复Seipin表达及其介导的线粒体自噬;在PC12细胞的OGD/R模型中抑制miR-206水平,Seipin蛋白的表达得到回复,细胞纯化线粒体蛋白中P62和BNIP3的表达及Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均显著上调,即线粒体自噬增强;过表达circRNA4736能够有效促进OGD/R模型的PC12细胞Seipin的表达上调及显著抑制PC12细胞凋亡。结论 Seipin及其介导的线粒体自噬可能作为缺血性脑卒中溶栓治疗后导致的缺血再灌注损伤的潜在研究靶点,外源性circRNA4736通过'海绵状'竞争性结合miR-206,解除miR206对Seipin的3’UTR区的抑制作用,从而重新激活Seipin蛋白生物学功能,进而促进Seipin介导的线粒体自噬,最终抑制神经元的凋亡。

关键词：环状RNA4736 微小RNA206 Seipin蛋白线粒体自噬脑缺血再灌注

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