检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2010年第2期26卷 107-110页

作者：戴佳琳黄江廖兴江江楠王宇刘玉江贵阳医学院多媒体形态学实验室贵阳550004

目的通过对猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的表达,对其免疫性进行初步研究。方法利用生物信息学从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出谷胱甘肽转移酶(GST)基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+),经过双酶切、PCR鉴定后,异丙基-β-D半乳糖苷(I... 详细信息

目的通过对猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的表达,对其免疫性进行初步研究。方法利用生物信息学从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出谷胱甘肽转移酶(GST)基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+),经过双酶切、PCR鉴定后,异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析,Western blotting鉴定该蛋白免疫反应性。结果成功构建了重组体,并得到高纯度蛋白,该蛋白可被感染猪带绦虫的病人及猪、感染牛带绦虫病人及感染亚带绦虫病人血清所识别。结论猪带绦虫谷胱甘肽转移酶可在原核系统中获得具有免疫反应性的高效表达。

关键词：猪带绦虫谷胱甘肽转移酶原核表达免疫反应性

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猪带绦虫腺苷酸激酶的克隆及其重组蛋白免疫反应性的评价

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中国预防兽医学报 2010年第7期32卷 534-536页

作者：戴佳琳黄江廖兴江申萍香周灵贵刘玉江贵阳医学院多媒体形态学实验室贵州贵阳550004

为原核表达猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK),对其免疫性进行初步研究,本研究以猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中ADK同源基因重组质粒为模板,通过PCR扩增并将其亚克隆于原核表达载体pET28a(+),构建了pET-Ts-ADK重组质粒,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAG... 详细信息

为原核表达猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK),对其免疫性进行初步研究,本研究以猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中ADK同源基因重组质粒为模板,通过PCR扩增并将其亚克隆于原核表达载体pET28a(+),构建了pET-Ts-ADK重组质粒,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE鉴定,表明重组蛋白约30ku。经His-镍蛋白纯化柱纯化后western blot试验表明该重组蛋白可被猪带绦虫、亚洲带绦虫及牛带绦虫患者血清识别,表明猪带绦虫ADK基因在原核表达系统中表达获得的蛋白具有免疫反应性。

关键词：猪带绦虫腺苷酸激酶基因克隆免疫反应性

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亚洲带绦虫膜联蛋白B2基因的表达、纯化及免疫学分析

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西安交通大学学报（医学版） 2010年第6期31卷 696-698页

作者：戴佳琳黄江廖兴江李波王宇贵阳医学院法医学教研室贵州贵阳550004 贵阳医学院多媒体形态学实验室贵州贵阳550004

目的对亚洲带绦虫膜联蛋白B2(Annexins B2)进行克隆表达及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Annexins B2基因,并将该基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,... 详细信息

目的对亚洲带绦虫膜联蛋白B2(Annexins B2)进行克隆表达及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Annexins B2基因,并将该基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用Western blotting进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及重组质粒DNA测序均显示重组体构建成功,并得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫、猪带绦虫及牛带绦虫患者的血清识别。结论亚洲带绦虫成虫Annexins B2基因可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。

关键词：亚洲带绦虫膜联蛋白B2 基因克隆免疫反应性

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牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的构建及EST测序

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中国人兽共患病学报 2010年第4期26卷 364-366页

作者：戴佳琳黄江廖兴江郎书源贵阳医学院多媒体形态学实验室贵阳550004 贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004

目的构建牛带绦虫(Taeniasaginata)成虫全长cDNA质粒文库,为寻找更多有效的牛带绦虫病疫苗候选抗原分子及对三种主要人体带绦虫的功能基因对比研究奠定基础。方法提取牛带绦虫成虫mRNA;进行反转录合成双链cD-NA。PCR产物经蛋白酶K消化... 详细信息

目的构建牛带绦虫(Taeniasaginata)成虫全长cDNA质粒文库,为寻找更多有效的牛带绦虫病疫苗候选抗原分子及对三种主要人体带绦虫的功能基因对比研究奠定基础。方法提取牛带绦虫成虫mRNA;进行反转录合成双链cD-NA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用CHROMA SPIN-400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并与改造载体pBluescript Ⅱ SK连接,将连接产物涂板,测定文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库质量。随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5′端测序,归并UniGene。结果测定文库的滴度为1016个菌落/μL,共测1023个克隆,对这些序列进行UniGene归并,得到419条unigene。结论已成功获得高质量的牛带绦虫成虫全长cDNA表达文库。

关键词：牛带绦虫全长cDNA质粒文库表达序列标签(EST)

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亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因克隆、表达及纯化

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中国公共卫生 2009年第7期25卷 827-828页

作者：王杰戴佳琳黄江吴璇廖兴江申萍香周灵贵杜武英郎书源贵阳医学院法医教研室贵阳550004 贵阳医学院多媒体形态学实验室

目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序... 详细信息

目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spef1-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。结论成功克隆了亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因,并表达和纯化了Spef1-Like蛋白,为研究Spef1-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据。

关键词：亚洲牛带绦虫 Spef1-Like基因基因克隆原核表达

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亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析

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中国公共卫生 2009年第4期25卷 398-400页

作者：戴鹏戴佳琳黄江廖兴江郎书源周灵贵申萍香贵阳医学院理化实验中心贵州贵阳550004 贵阳医学院多媒体形态学实验室

目的通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据。方法用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全... 详细信息

目的通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据。方法用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果该基因全长1090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26973.8,等电点为5.96。生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功。结论发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

关键词：亚洲牛带绦虫半胱氨酸分泌蛋白分子克隆原核表达序列分析

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猪带绦虫腺苷酸激酶基因及蛋白结构特性分析

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中国公共卫生 2009年第10期25卷 1214-1215页

作者：戴佳琳黄江廖兴江周灵贵申萍香刘玉江郎书源贵阳医学院多媒体形态学实验室贵阳550004 贵阳医学院寄生虫学教研室

目的分析和预测猪带绦虫腺苷酸激酶（ADK）基因及其编码的蛋白结构和特性。方法利用各种在线生物信息网站及其它分析软件包,分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别的腺苷酸激酶基因的结构和编码区序列,分析、预测编码的蛋白质的理化特... 详细信息

目的分析和预测猪带绦虫腺苷酸激酶（ADK）基因及其编码的蛋白结构和特性。方法利用各种在线生物信息网站及其它分析软件包,分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别的腺苷酸激酶基因的结构和编码区序列,分析、预测编码的蛋白质的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。结果该基因全长864 bp,编码区为110－758,编码215个氨基酸,为全长基因。理论分子量、等电点分别为23771.4 Da和6.86;没有跨膜区;三维结构建模图显示其线性表位的部位。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了腺苷酸激酶基因的cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息。

关键词：猪带绦虫腺苷酸激酶 cDNA 生物信息学

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亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析

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中国人兽共患病学报 2011年第8期27卷 731-733,737页

作者：王宇戴佳琳黄江廖兴江贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004 贵阳医学院现代病原生物学实验室贵阳550004 贵阳医学院多媒体形态学实验室贵阳550004

目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进... 详细信息

目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-TaRPL8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论亚洲带绦虫成虫TaRPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词：亚洲带绦虫 60S核糖体蛋白L8基因基因克隆原核表达

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牛带绦虫乳酸脱氢酶基因原核表达及免疫学特征

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中国公共卫生 2010年第8期26卷 987-988页

作者：戴佳琳黄江李波廖兴江王宇贵阳医学院多媒体形态学实验室贵州贵阳550004 贵阳医学院人体寄生虫教研室

目的克隆牛带绦虫乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因在大肠杆菌中表达,研究其免疫学特征。方法将牛带绦虫成虫LDH基因与质粒pET-28a(+)连接构建原核重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物... 详细信息

目的克隆牛带绦虫乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因在大肠杆菌中表达,研究其免疫学特征。方法将牛带绦虫成虫LDH基因与质粒pET-28a(+)连接构建原核重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Westernblotting)进行分析。结果牛带绦虫乳酸脱氢酶基因编码332个氨基酸,理论分子量为35.4kDa,PCR、双酶切及DNA测序的结果均证明pET-28a(+)-LDH构建成功;SDS-PAGE结果表明,牛带LDH基因在大肠埃希菌高效表达,经过亲和层析高纯度蛋白,且该重组蛋白可以被亚洲带绦虫、牛带绦虫及猪带绦虫感染病人血清识别,表明其具有免疫反应性。结论牛带绦虫LDH基因可在原核系统中有免疫活性的高效表达。

关键词：牛带绦虫乳酸脱氢酶原核表达免疫活性

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亚洲带绦虫EIFs3克隆与免疫反应性分析

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中国公共卫生 2010年第9期26卷 1146-1148页

作者：戴佳琳黄江廖兴江李波王宇江楠贵阳医学院多媒体形态学实验室贵州贵阳550004 贵阳医学院人体寄生虫教研室贵州贵阳550004

目的对亚洲带绦虫真核翻译起始因子3(eukaryotic translation initiation factor3 subunit,EIFs 3)进行克隆及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出含有EIFs3基因,并将该基因克隆到原核表达质粒... 详细信息

目的对亚洲带绦虫真核翻译起始因子3(eukaryotic translation initiation factor3 subunit,EIFs 3)进行克隆及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出含有EIFs3基因,并将该基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析。结果 PCR,双酶切及DNA测序均显示重组体构建成功,用亲和层析法得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫及猪带病人血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲带绦虫成虫EIFs 33基因可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。

关键词：亚洲带绦虫真核翻译起始因子3 原核构建免疫反应性

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