检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2013年第12期33卷 1516-1522页

作者：方宁王钰莹陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。

关键词：人羊膜间充质干细胞心肌梗死移植分化心功能

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小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

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基础医学与临床 2012年第6期32卷 644-649页

作者：林瑞竹徐琦璘赵春华中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(F... 详细信息

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。

关键词：胚胎干细胞神经分化神经上皮祖细胞神经干细胞

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骨髓Sca-1^+间充质干细胞移植减轻小鼠迟发型超敏反应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 133-137页

作者：曲学彬曾洋刘星霞赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背... 详细信息

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞。24 h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例。结果注射组小鼠足跖的肿胀程度[(0.368±0.126)mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111)mm,P<0.01]。注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应。

关键词：间充质干细胞迟发型超敏反应免疫反应

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

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中国应用生理学杂志 2012年第2期28卷 139-143,I0002页

作者：赵玉洁方宁陈代雄余丽梅喻皇飞赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培... 详细信息

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培养基中诱导培养,分别于诱导不同时间采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子-1(PDX-1)mRNA的表达。结果:①hAECs高表达CD29、CD73、CD166和CK19;②hAECs诱导组第7、142、1天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.00%±1.73%、75.33%±1.15%和75.67%±0.58%,而对照组未见胰岛素阳性细胞;③hAECs诱导组第7、14、21天培养物上清液中胰岛素含量分别达(328.47±3.22)μIU/ml、(332.26±1.22)μIU/ml和(329.68±2.57)μIU/ml,均显著高于对照组(P均<0.01);④hAECs诱导前后均有PDX-1 mRNA和β2微球蛋白表达,胰岛素mRNA表达仅见于诱导组。结论:hAECs能分化为ISCs,在Ⅰ型糖尿病细胞移植治疗方面具有潜在应用前景。

关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞诱导分化

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人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响

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中华神经外科杂志 2012年第4期28卷 411-415页

作者：喻皇飞方宁陈代雄余丽梅章涛刘祖林万卫红赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心

目的观察人羊膜间充质干细胞（hAD—MSCs）移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法建立大鼠脊髓全横断损伤模型，脊髓横断后立即以明胶海绵吸附10μlhAD—MSCs（约2×10^5个）或等量PBS液植入脊髓两断端之间。术后每周应用BBB... 详细信息

目的观察人羊膜间充质干细胞（hAD—MSCs）移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法建立大鼠脊髓全横断损伤模型，脊髓横断后立即以明胶海绵吸附10μlhAD—MSCs（约2×10^5个）或等量PBS液植入脊髓两断端之间。术后每周应用BBB评分评价大鼠后肢运动功能；采用免疫荧光染色观察hAD—MSCs在脊髓内的存活、分化情况；免疫组织化学染色观察受损脊髓远端组织NF-200表达。结果hAD—MSCs移植组神经功能明显恢复，BBB评分逐周增加，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。hAD—MSCs植入后2周在宿主脊髓中存在MAB1281染色阳性细胞，但不表达MAP-2和GFAP。hAD—MSCs移植后大鼠受损脊髓远端神经组织NF-200表达明显强于对照组。结论hAD—MSCs移植可促进大鼠脊髓损伤后的神经功能恢复，其机制可能与hAD—MSCs促进受损脊髓远端组织表达NF-200有关。

关键词：大鼠脊髓损伤移植人羊膜间充质干细胞

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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 998-1003页

作者：宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛余丽梅赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只。造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM。于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达。结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白;2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb。结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。

关键词：人羊膜上皮细胞移植分化肝细胞肝损伤

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慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 404-408页

作者：王椋曲学彬赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院组织工程中心北京100005

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、... 详细信息

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、凋亡的作用情况。结果 CML和正常志愿者骨髓来源的MSC的细胞形态和表型没有差异,CML患者来源的MSC抑制T细胞增殖能力和抑制T细胞停留在G0/G1期的作用均减弱(CML MSC组74.5%±1.2%,BMSC组94.0%±1.9%,P<0.05),CML患者抑制T细胞凋亡的作用增强(CMLMSC组8.36%±1.31%,BMSC组14.10%±0.65%,P<0.05)。结论 CML患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用CML患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML患者最好是选用异基因的MSC移植。

关键词：慢性粒细胞白血病间充质干细胞免疫调节

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体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞

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中华内分泌代谢杂志 2011年第12期27卷 1013-1016页

作者：赵玉洁方宁陈代雄余丽梅喻皇飞万卫红赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心

目的探讨体外诱导人羊膜间充质干细胞（hAD-MSCs）向胰岛素分泌细胞分化潜能.方法采用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离提取hAD-MSCs,流式细胞术分析和免疫细胞化学染色行表型鉴定.取第3代按2.5× 106个/ml或5×105个/ml细胞密度接... 详细信息

目的探讨体外诱导人羊膜间充质干细胞（hAD-MSCs）向胰岛素分泌细胞分化潜能.方法采用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离提取hAD-MSCs,流式细胞术分析和免疫细胞化学染色行表型鉴定.取第3代按2.5× 106个/ml或5×105个/ml细胞密度接种6孔培养板或预置盖玻片的24孔培养板,在含10mmol/L尼克酰胺和N2补充物的无血清HG-DMEM培养基培养,未诱导组为含10％胎牛血清的LG-DMEM基础培养基.分别于体外诱导第7、14、21天采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子1（PDX-1）mRNA的表达.结果（1）hAD-MSCs高表达间充质干细胞表面标志CD29、CD44、CD73、CD166及波形蛋白；（2） hAD-MSCs诱导第7、14、21天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.67％±1.53％、75.00％±1.00％、74.33％±1.53％,培养物上清液中胰岛素含量分别为（331.62±1.76）、（330.50±1.22）和（331.65±0.48） μIU/ml,各时点间比较无显著性差异（均P＞0.05）,而未诱导组仍未见胰岛素阳性细胞；培养上清也未检测到胰岛素；（3） hAD-MSCs诱导前后均有PDX-1 mRNA和蛋白表达,胰岛素基因mRNA表达仅见于诱导组；（4） hAD-MSCs诱导组和未诱导组各时点均有β2微球蛋白表达,其阳性细胞百分率组间差异无显著性（均P＞0.05）.结论 hAD-MSCs具有向胰岛素分泌细胞分化的能力,可能成为1型糖尿病细胞移植治疗的新的细胞供源.

关键词：人羊膜间充质干细胞胰岛素分泌细胞诱导分化

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miRNA与癌症发生

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癌症进展 2011年第2期9卷 124-127页

作者：王椋赵春华中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

1 miRNA的作用机制和生物学功能miRNA是由约22nt组成的非编码单链RNA，作为一类新的基因调节剂在动植物体内均有发现。miRNA通过靶mRNA的切割或翻译抑制——这两种沉默机制中的一种来指导RISC，下调目的基因的表达。如果mRNA与miRNA具... 详细信息

1 miRNA的作用机制和生物学功能 miRNA是由约22nt组成的非编码单链RNA，作为一类新的基因调节剂在动植物体内均有发现。miRNA通过靶mRNA的切割或翻译抑制——这两种沉默机制中的一种来指导RISC，下调目的基因的表达。如果mRNA与miRNA具有完美的互补性，miRNA就指导mRNA特异性切割；如果两者没有足够的互补性，miRNA就指导翻译抑制。

关键词： miRNA 癌基因靶mRNA 癌症发生

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间充质干细胞通过IFN-γ和IL-10抑制CD4+幼稚T细胞分化为Th17细胞

间充质干细胞通过IFN-γ和IL-10抑制CD4+幼稚T细胞分化为Th17细胞

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中国解剖学会2011年年会

作者：曲学彬李晶刘星霞赵春华中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在自身免疫性疾病方面能够发挥免疫调节的作用。Th17细胞能够特异地分泌IL-17、IL-17F、IL-21和IL-23等细胞因子,与炎症反应及自身免疫性疾病的发生有关。虽然已有少数研究表明MSCs能够通过抑...

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在自身免疫性疾病方面能够发挥免疫调节的作用。Th17细胞能够特异地分泌IL-17、IL-17F、IL-21和IL-23等细胞因子,与炎症反应及自身免疫性疾病的发生有关。虽然已有少数研究表明MSCs能够通过抑制Th17细胞的活化与增殖而发挥免疫调节作用,但是其中的机制还不明确。本研究分离得到了Sca-1Lin小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-MSCs,BM-MSCs),其在体外能够促进CD4幼稚T细胞分化为调节性T细胞,而抑制其分化为Th17细胞。进一步研究发现,在MSCs与CD4幼稚T细胞共培养的最初阶段(24 h内),体系中大量存在的IFN-γ抑制了Th17的分化。IFN-γ能够依次活化T细胞内的STAT1、SOCS3,从而抑制了STAT3,进而阻断了IL-6对Th17的激活作用;加入IFN-γ的中和抗体或STAT1的抑制剂能够明显上调Th17的生成。然而,在CD4幼稚T细胞分化的中后期(24～72 h),MSC与其共培养环境中IFN-γ的量逐渐下降,而IL-10的水平逐渐升高。IL-10能够依次活化T细胞内的STAT5、SOCS3,抑制STAT3,进而阻断了IL-6对Th17的激活作用;加入IL-10的中和抗体或STAT5的抑制剂能够明显上调Th17的生成。此结果显示,在Th17的分化过程中,MSCs能够通过不同的机制抑制其分化,从而达到免疫调节的作用。

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