目的:基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:体外培养***926细胞,随机分为正常组、模型组、ox-LDL+丹参酮ⅡA组、ox-LDL+丹参酮ⅡA+LY294002组、丹参酮ⅡA组、LY294002组。用比色法检测细胞氧化应激损伤MDA含量及SOD活力,利用FITC-LC3荧光显微镜及Naolive 3D cell explorer实时无标记3D显微成像系统检测自噬发生,同时应用免疫印迹(Western Blotting)检测自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活力降低,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P<0.01);丹参酮ⅡA干预后细胞中MDA含量降低,SOD活力增高,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P<0.01)。与正常组相比,模型组PI3K、P-Akt、P-mTOR、蛋白表达水平明显减少(O<0.05或P<0.01);与模型组相比,丹参酮ⅡA干预后细胞中PI3K、P-Akt、P-mTOR蛋白表达水平明显减少(P<0.05或P<0.01);与ox-LDL+丹参酮ⅡA组相比,加入PI3K的抑制剂LY294002后细胞中的LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少,自噬水平减少(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬,对ox-LDL诱导的***926细胞氧化应激损伤起到保护作用,进而防治动脉粥样硬化。
目的:探讨脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路变化。方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高剂量组(2.0 m L/kg),中剂量组(1.5 m L/kg),低剂量组(1.0 m L/kg),每组6只。采用ELISA法检测各组大...
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目的:探讨脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路变化。方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高剂量组(2.0 m L/kg),中剂量组(1.5 m L/kg),低剂量组(1.0 m L/kg),每组6只。采用ELISA法检测各组大鼠下丘脑组织c AMP活性,Real Time PCR法和Westernblot法检测蛋白激酶(cyclic-AMP-dependent protein kinase,PKA)、糖原磷酸化酶(glyeogenphospholase,Gp)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase,PHK)的mRNA及其表达量。结果:与正常组大鼠比较,脾气虚证组及鱼藤酮3组大鼠的下丘脑组织c AMP活性及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达均有不同程度的减弱,鱼藤酮中剂量组的结果与脾气虚证组最为相似。结论:脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路的变化存在相关性,其中c AMP-PKA信号通路可能参与调控。
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