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中国生化药物杂志 2014年第2期34卷 48-50页

作者：井欢唐莹于丹刘春英辽宁中医药大学基础医学院病理教研室辽宁沈阳110032 辽宁中医药大学基础医学院人体解剖教研室辽宁沈阳110032

目的评估补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期的影响效果。方法体外培养人肺腺癌A549/DDP细胞,实验分组为:空白对照组,补中益气汤组和脾细胞处理组。用不同浓度的补中益气汤含药血清和脾细胞刺激A549/DDP细胞,采用MTT法(Methylthi... 详细信息

目的评估补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期的影响效果。方法体外培养人肺腺癌A549/DDP细胞,实验分组为:空白对照组,补中益气汤组和脾细胞处理组。用不同浓度的补中益气汤含药血清和脾细胞刺激A549/DDP细胞,采用MTT法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定2种方法对细胞的直接杀伤作用;流式细胞术检测2种方法对细胞凋亡的影响;荧光显微镜观察2种方法对凋亡小体产生的影响。结果MTT法显示同空白对照组相比,补中益气汤含药血清对细胞生长均有抑制作用(P<0.05),且该法同脾细胞作用后效果类似;2种方法处理后,流式细胞术均可见特征性的细胞凋亡峰;在荧光显微镜下可见凋亡细胞。结论补中益气汤含药血清在体外能阻滞A549/DDP细胞的生长增殖,诱导该细胞发生凋亡,且效果同脾细胞类似。

关键词：补中益气汤 A 549/DDP细胞细胞周期细胞凋亡

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补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞药物泵P-gp及LRP蛋白表达的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2014年第1期35卷 50-55页

作者：李璐璐于丹王莹井欢刘春英辽宁中医药大学基础医学院病理教研室辽宁沈阳110032

目的:用补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,观测药物泵P-gp及LRP的表达,并同小干扰RNA片段(siRNA)靶向切除P-gp、LRP基因后对这两种蛋白表达的影响相比较.方法:补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,设计并合成针对P-gp、LRP基因对应... 详细信息

目的:用补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,观测药物泵P-gp及LRP的表达,并同小干扰RNA片段(siRNA)靶向切除P-gp、LRP基因后对这两种蛋白表达的影响相比较.方法:补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,设计并合成针对P-gp、LRP基因对应序列的siRNA,采用转染试剂对细胞进行转染.两种蛋白实验分组均为:空白对照组、含药血清处理组及siRNA处理组.采用RT-PCR检测P-gp及LRP mRNA,免疫细胞化学法检测蛋白表达及定位,WB检测蛋白表达.结果:补中益气汤含药血清可以降低两种药物泵的表达,效果同siRNA类似,具有统计学差异(P<0.05).结论:补中益气汤含药血清能降低A549/DDP细胞上P-gp和LRP的表达.

关键词：补中益气汤1 A549/DDP细胞2 P糖蛋白3 肺耐药蛋白4 药物泵5

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软脂酸对***926细胞一氧化氮合成的影响及六味地黄丸的干预效应

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中国老年学杂志 2014年第6期34卷 1583-1585页

作者：于洋赵丹玉王艳杰冯晓帆高海宁杨小静柳春辽宁医学院生理学教研室辽宁中医药大学基础医学院生化教研室辽宁沈阳110032

目的研究软脂酸(PA)对***926内皮细胞一氧化氮(NO)合成和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达的影响及六味地黄丸(LWDHP)含药血清的干预作用。方法将培养的***926细胞分组,采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(NAPDH)依赖性硝酸盐还原酶法测定细胞裂解... 详细信息

目的研究软脂酸(PA)对***926内皮细胞一氧化氮(NO)合成和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达的影响及六味地黄丸(LWDHP)含药血清的干预作用。方法将培养的***926细胞分组,采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(NAPDH)依赖性硝酸盐还原酶法测定细胞裂解上清液NO含量;RT-PCR及Western印迹检测细胞内eNOS mRNA和蛋白的表达。结果 PA损伤的细胞裂解液中NO含量减少,与正常对照组比较差异显著(P<0.01)。2.5%LWDHP含药血清组NO含量进一步减少,5%、10%LWDHP含药血清组及二甲双胍(MET)组均能显著增加细胞裂解液中NO含量,与PA组比较有差异显著(P<0.01),但三者之间互相比较无显著性差异(P>0.05)。同时PA组细胞内eNOS mRNA和蛋白的表达显著减少(P<0.01),LWDHP和MET组细胞内eNOS mRNA和蛋白表达量增加(P<0.01)。结论 LWDHP含药血清能够刺激PA损伤的***926细胞eNOS mRNA和蛋白的表达,从而有效促进NO的合成,发挥其保护作用。

关键词：软脂酸六味地黄丸 EA.hy926内皮细胞一氧化氮内皮型一氧化氮合成酶

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六味地黄丸含药血清对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤抗氧化的机制

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中国老年学杂志 2014年第10期34卷 2794-2796页

作者：于洋赵丹玉王艳杰冯晓帆杨雪峰张瑞鹏柳春辽宁医学院生理学教研室辽宁中医药大学基础医学院生化教研室辽宁沈阳110032

目的探讨六味地黄丸(LWDHP)含药血清对软脂酸(PA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤抗氧化的保护作用及机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察HUVEC的存活率;氮蓝四唑(NBT)显色法测定细胞裂解上清液总超氧化物歧化酶(SOD)的活力;硫代巴比妥酸(TBA... 详细信息

目的探讨六味地黄丸(LWDHP)含药血清对软脂酸(PA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤抗氧化的保护作用及机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察HUVEC的存活率;氮蓝四唑(NBT)显色法测定细胞裂解上清液总超氧化物歧化酶(SOD)的活力;硫代巴比妥酸(TBA)反应法检测细胞裂解上清液丙二醛(MDA)的含量;RT-PCR及Western印迹检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA和蛋白的表达。结果 LWDHP含药血清能促进PA损伤的HUVEC增殖,增加细胞裂解上清液总SOD活力,降低细胞内MDA含量,减少NOX4 mRNA和蛋白的表达。结论 LWDHP含药血清能够对PA诱导的HUVEC氧化损伤发挥保护作用,此作用可能与LWDHP降低HUVEC内NOX4的表达量有关。

关键词：六味地黄丸软脂酸人脐静脉内皮细胞超氧化物歧化酶丙二醛 NADPH氧化酶4

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眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α表达的差异研究

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中国生化药物杂志 2014年第1期34卷 22-25页

作者：井欢于丹高原王哲王莹潘茜关洪全辽宁中医药大学基础医学院病理学教研室辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学基础医学院免疫与病原生物学教研室辽宁沈阳110847

目的分别观察眼针与体针疗法对缺血再灌注损伤24 h后大鼠脑组织中TNF—α表达的影响,探讨眼针与体针不同疗法对免疫效应表达的差异,为眼针疗法的临床应用提供实验依据。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occl... 详细信息

目的分别观察眼针与体针疗法对缺血再灌注损伤24 h后大鼠脑组织中TNF—α表达的影响,探讨眼针与体针不同疗法对免疫效应表达的差异,为眼针疗法的临床应用提供实验依据。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。将48只SD大鼠随机分为正常对照组、体针组、模型组、假手术组、眼针穴区组与眼针穴区外组(n=8)。模型组、眼针穴区组、眼针穴区外组与体针组均采用改良的线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。采用ZeaLonga评分法进行大鼠神经功能评分;ELISA方法检测缺血再灌注24 h后大鼠血清TNF—α含量,实时定量PCR方法检测缺血再灌注24 h后大鼠脑皮质TNF—αmRNA的表达,Western Blot法检测缺血再灌注24 h后大鼠脑皮质TNF—α蛋白的表达。结果脑缺血再灌注24 h后,眼针穴区组和体针组大鼠神经功能缺损评分均较模型组大鼠评分降低(P<0.01),但两者相比无统计学差异,眼针穴区外组大鼠评分与模型组相比较无统计学差异;眼针穴区组、体针组和和眼针穴区外组大鼠血清TNF—α含量均较模型组显著减少(P<0.01),但以眼针穴区组与体针组减少更明显,眼针穴区组与体针组比较无统计学差异;眼针穴区组、体针组和眼针穴区外组大鼠脑组织TNF—αmRNA含量和蛋白质含量均较模型组显著下调(P<0.01),眼针穴区组与体针组比较无统计学差异。结论眼针与体针在改善急性脑缺血再灌注损伤中的免疫效应相当,且两种疗法的作用机制可能均与脑组织TNF—α的表达下调有关。

关键词：急性脑缺血再灌注损伤肿瘤坏死因子眼针疗法体针疗法

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Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织VEGF和NF-кB表达的影响

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解剖科学进展 2015年第4期21卷 394-396,400页

作者：金龙吴晓兰周昕欣马腾沈阳军区总医院医务部保健科沈阳110840 辽宁卫生职业技术学院医学基础部机能教研室沈阳110101 辽宁中医药大学附属第二医院皮肤科沈阳110034 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110122

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)和核转录因子-кB(NF-кB)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模... 详细信息

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)和核转录因子-кB(NF-кB)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内VEGF和NF-кB的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内VEGF mRNA和NF-кB mRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织VEGF和NF-кB蛋白和mRNA表达产物的平均光密度值显著高于正常对照组,而Wortmannin处理组显著低于急性肺损伤组小鼠。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织VEGF和NF-кB表达。

关键词：急性肺损伤 Wortmannin 血管内皮生长因子核转录因子-кB 肺小鼠

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siRNA沉默TLR4表达对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第6期21卷 635-639页

作者：郭隽馥苗兰英王艳杰丛培玮辽宁中医药大学教学实验中心生物技术实验室辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学基础医学院生物化学教研室辽宁沈阳110847

目的:探讨靶向TLR4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条siRNA(siRNA722、siRNA1673和siRNA2560)及1条与TLR4基因无同源性的阴性对照siRNA,采用Real-time PCR和Western blotting方法测定干扰后A549细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA并确定最佳转染条件。TLR4特异性siRNA(TLR4-siRNA)转染A549细胞后,采用CCK-8法和Transwell小室法分别检测沉默TLR4对A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:与阴性对照相比,siRNA1673在转染48 h后对TLR4 mRNA和蛋白表达的抑制最为明显[(0.45±0.03)vs(0.83±0.02),(0.23±0.06)vs(0.98±0.09);均P<0.01]。TLR4-siRNA转染72 h后A549细胞增殖活性显著下降[(0.77±0.01)vs(0.98±0.11)、(0.93±0.04),P<0.01];转染48 h后,TLR4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于阴性对照组[(23.60±2.88)vs(59.80±5.54)个,P<0.01]。结论:TLR4-siRNA能够沉默A549细胞中TLR4基因表达,抑制A549细胞的增殖和侵袭能力,TLR4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。

关键词：肺癌 TLR4基因 siRNA 增殖侵袭

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绞股蓝总皂苷对紫外线照射的人皮肤细胞原癌基因表达的影响

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 360-363页

作者：马月丹张燚王继慧吴景东马贤德辽宁中医药大学经济管理学院公共管理教研室沈阳110847 辽宁中医药大学附属第三医院沈阳110847 辽宁中医药大学基础医学院中医基础理论教研室沈阳110847 辽宁中医药大学学生工作处沈阳110847 辽宁中医药大学教学实验中心生物技术实验室沈阳110847

目的:探讨绞股蓝总皂苷对紫外线照射的人皮肤相关原癌基因c-Fos和c-Jun表达的影响。方法:制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。将人永生化角质形成细胞(human immortal skin keratinocytes,HaCaT)40瓶随机分为4组(A^D组),每组10瓶,将人... 详细信息

目的:探讨绞股蓝总皂苷对紫外线照射的人皮肤相关原癌基因c-Fos和c-Jun表达的影响。方法:制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。将人永生化角质形成细胞(human immortal skin keratinocytes,HaCaT)40瓶随机分为4组(A^D组),每组10瓶,将人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSF)60瓶随机分为6组(Ⅰ~Ⅵ组),每组10瓶。分别用中波紫外线(ultraviolet B,UVB)对HaCaT细胞B^D组、用长波紫外线(ultraviolet A,UVA)对HSF细胞Ⅱ~Ⅵ组进行照射。将HaCaT 4组细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ~Ⅵ组。最终制成用于检测的6组细胞,分别为空白对照组(Ⅰ组)、UVA模型组(Ⅱ组)、HaCaT培养上清液A组(Ⅲ组)、HaCaT培养上清液B组(Ⅳ组)、HaCaT培养上清液C组(Ⅴ组)、HaCaT培养上清液D组(Ⅵ组)。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-PRC,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Ⅰ~Ⅵ组细胞cFos和c-Jun基因和蛋白的表达水平。结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞c-Fos和c-Jun基因和蛋白的表达水平明显上调(各组P值均为0.000);与Ⅱ组比较,Ⅳ组c-Fos和c-Jun基因和蛋白表达均上调(Pc-Fos基因=0.016、Pc-Fos蛋白=0.001、Pc-Jun基因=0.005、Pc-Jun蛋白=0.000),而Ⅲ组变化不明显;与Ⅳ组比较,Ⅵ组c-Fos和c-Jun基因和蛋白表达均下调(各组P值均为0.000),而Ⅴ组变化不明显(Pc-Fos基因=0.081、Pc-Fos蛋白=0.088、Pc-Jun基因=0.109、Pc-Jun蛋白=0.026)。结论:经UVB照射的HaCaT细胞分泌细胞因子促进经UVA照射的HSF细胞原癌基因c-Fos和c-Jun基因和蛋白的表达。绞股蓝总皂苷对UVB照射HaCaT细胞培养上清液作用的UVA照射HSF细胞中原癌基因c-Fos和c-Jun的表达具有抑制作用。

关键词：绞股蓝总皂苷紫外线照射皮肤细胞原癌基因 c-Fos c-Jun

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苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的***926细胞Bcl-2表达的影响

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中国老年学杂志 2014年第19期34卷 5519-5520页

作者：柳春杨雪峰张瑞鹏赵丹玉王艳杰辽宁中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110032

目的研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(***926)Bcl-2表达的影响。方法苦荞麦总黄酮作用于高浓度软脂酸刺激下的***926细胞,RT-PCR技术检测Bcl-2 mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对... 详细信息

目的研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(***926)Bcl-2表达的影响。方法苦荞麦总黄酮作用于高浓度软脂酸刺激下的***926细胞,RT-PCR技术检测Bcl-2 mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组相比较,苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组之间无显著差异(P>0.05)。结论苦荞麦总黄酮可以促进***926细胞Bcl-2基因及蛋白的表达发挥抑制凋亡的作用。

关键词： EA.hy926细胞苦荞麦总黄酮软脂酸凋亡 Bcl-2

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补中益气汤含药血清对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药作用的影响

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中国病理生理杂志 2014年第2期30卷 233-238页

作者：刘亚莉王莹易佳丽史妍婷刘春英辽宁中医药大学基础医学院病理教研室辽宁沈阳110032 辽宁卫生职业技术学院医学技术系卫生检验教研室辽宁沈阳110101

目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2... 详细信息

目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2种细胞的IC50,同时计算A549/DDP耐药指数和逆转指数;将A549/DDP细胞分为对照血清组、最佳含药血清组、LY294002组、LY294002+最佳含药血清组(联合组)和阴性对照组,给予相应的处置因素后,培养48 h,采用免疫细胞化学方法、Western blotting和real-time PCR等方法检测各组中PI3K、Akt蛋白与mRNA的表达情况。结果:10%中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间。最佳含药血清与顺铂联合作用时,A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显增强,最佳含药血清的逆转指数约为2.46。最佳含药血清组和联合组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平均下降,与对照血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平与对照血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补中益气汤通过减少PI3K的表达而降低A549/DDP细胞的耐药指数,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,干预或调整A549/DDP细胞对顺铂的耐药作用。

关键词：补中益气汤含药血清肺腺癌耐药性 PI3K蛋白 Akt蛋白

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