检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床解剖学杂志 2015年第6期33卷 655-661页

作者：王艳闵鹤鸣张苗苗秦书俭闵连秋包翠芬辽宁医学院附属第一医院神经内科辽宁医学院细胞生物学教研室辽宁医学院解剖学教研室辽宁省高校分子生物与新药开发重点实验室辽宁锦州121000

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实验分为BMSCs正常对照组、BMSCs缺氧复氧组(Model组)、人参皂苷Rg11×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5)mol/L处理组、尼莫地... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实验分为BMSCs正常对照组、BMSCs缺氧复氧组(Model组)、人参皂苷Rg11×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5)mol/L处理组、尼莫地平2.5×10^(-7)mol/L处理组(阳性对照组)。各组分别于缺氧复氧12h前加入完全培养基(正常对照组、Model组)、人参皂苷Rg1(人参皂苷Rg1各处理组)、尼莫地平(阳性对照组)。建立缺氧复氧BMSCs模型。采用TUNEL法检测各组的细胞凋亡率,免疫荧光和免疫印迹技术定性定量检测各组增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl-2、Bax的表达情况。结果TUNEL结果显示,BMSCs正常对照组未见明显凋亡细胞,Model组可见明显的凋亡细胞,与Model组比较,其余各处理组凋亡细胞数量均减少,以人参皂苷Rg1(1×10^(-5)mol/L)组最为明显。免疫荧光和免疫印迹结果显示,BMSCs正常对照组可见少量的PCNA、bcl-2、bax表达;Model组的PCNA、bcl-2的表达减少,但bax的表达显著增高,bcl-2/bax比值降低;与Model组比较,人参皂苷Rg1各组PCNA、bcl-2表达均呈不同程度的增高,而bax表达呈现相反的趋势,bcl-2/bax比值增高,以Rg1(1×10^(-5)mol/L)组最为明显。结论人参皂苷Rg1预处理对缺氧复氧BMSCs具有保护作用,其机制可能与下调bax的表达,上调PCNA、bcl-2的表达,抑制BMSCs凋亡和促进BMSCs增殖有关。

关键词：人参皂苷Rg1 BMSCs 增殖凋亡

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人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大鼠PARP-1和TNFR1表达的影响

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天津医药 2015年第3期43卷 245-248,I0002,I0003页

作者：于洋刘学政包翠芬李晓明刘霞辽宁医学院解剖学教研室 121000 省高校分子细胞生物与新药开发重点实验室组织胚胎学教研室

目的探讨人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大脑皮质多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)-1和肿瘤坏死因子受体(TNFR)1表达的影响。方法 90只健康SD大鼠随机均分为假手术组,单纯缺血组,人参皂苷Rg1低、中、高组,阳性对照组。于术前5 d至取材当日,... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大脑皮质多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)-1和肿瘤坏死因子受体(TNFR)1表达的影响。方法 90只健康SD大鼠随机均分为假手术组,单纯缺血组,人参皂苷Rg1低、中、高组,阳性对照组。于术前5 d至取材当日,假手术组与单纯缺血组分别腹腔注射生理盐水45 mg/kg,人参皂苷Rg1分别给10、20、40 mg/kg,阳性对照组尼莫地平1 mg/kg。采用大脑中动脉栓塞法制备局灶性脑缺血模型,神经功能缺损评分和TTC染色验证模型是否成功;采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测大脑皮质缺血后PARP-1、TNFR1的表达。结果单纯缺血组较假手术组可见明显神经功能缺陷症状及大面积苍白色梗死区域;人参皂苷Rg1各组和阳性对照组神经功能评分和脑梗死体积百分比高于假手术组,低于单纯缺血组(P<0.05);人参皂苷Rg1各组与阳性对照组差异无统计学意义。人参皂苷Rg1低组每高倍视野PARP-1、TNFR1阳性细胞数高于假手术组和阳性对照组;中、高组高于假手术组,低于单纯缺血组(P<0.05)。单纯缺血组皮质PARP-1、TNFR1较假手术组阳性表达条带显著增强;人参皂苷Rg1低组PARP-1、TNFR1阳性表达高于假手术组;中组高于假手术组,低于单纯缺血组;高组低于单纯缺血组(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机制可能与下调大脑组织PARP-1、TNFR1的表达,对抗脑细胞坏死有关。

关键词：人参皂甙脑缺血聚ADP核糖聚合酶类受体肿瘤坏死因子 Ⅰ型人参皂苷Rg1 局灶性脑缺血 PARP-1 TNFR1

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ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

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天津医药 2015年第12期43卷 1356-1360页

作者：张苗苗包翠芬王艳闵鹤鸣秦书俭辽宁医学院人体解剖与组织胚胎教研室锦州121000 辽宁省高校分子生物与新药开发重点实验室辽宁医学院附属第一医院神经内科辽宁医学院细胞生物学教研室

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对... 详细信息

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

关键词： DNA结合蛋白质类锌指基因同源盒转录因子基因沉默间质干细胞 smad3 smad4 RUNX2 转录抑制因子-锌指蛋白和同源框3

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脑缺血再灌注损伤后BMSCs不同示踪方式的比较

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天津医药 2015年第12期43卷 1377-1381页

作者：王艳闵鹤鸣张苗苗包翠芬闵连秋辽宁医学院附属第一医院神经内科 121001 辽宁医学院附属第一医院细胞生物学教研室 121001 辽宁医学院附属第一医院解剖学教研室 121001 辽宁医学院附属第一医院省高校分子生物与新药开发重点实验室 121001

目的比较脑缺血再灌注损伤后,不同示踪方式观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后的效果。方法BMSCs复苏培养后,分别采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、PKH26进行标记,并且与绿色荧光蛋白(GFP)转染细胞,分别对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织进行... 详细信息

目的比较脑缺血再灌注损伤后,不同示踪方式观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后的效果。方法BMSCs复苏培养后,分别采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、PKH26进行标记,并且与绿色荧光蛋白(GFP)转染细胞,分别对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织进行移植。将75只SPF级雄性SD大鼠随机均分为假手术组,模型组,BrdU、PKH26、GFP示踪组。采用线栓改良法制备大鼠左侧大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血再灌注24h后,假手术组、模型组分别采用脑立体定位仪经脑实质植入10μL生理盐水;BrdU、PKH26、GFP示踪组分别植入10μL的BMSCs/BrdU、BMSCs/PKH26、BMSCs/GFP。采用神经行为学评分、TTC染色、脑组织含水量法进行模型鉴定及疗效判定,采用焦油紫染色进行神经元计数,并在荧光显微镜下计数标记细胞阳性率。结果移植前细胞BrdU、PKH26、GFP标记率无明显差异。移植4周后3示踪组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织含水量均显著低于模型组,神经元计数显著高于模型组;神经行为学评分、脑梗死体积高于假手术组,脑组织含水量、神经元计数与假手术组差异无统计学意义;3示踪组间上述指标差异均无统计学意义。GFP示踪组的荧光标记细胞阳性率高于BrdU、PKH26示踪组。结论脑缺血再灌注损伤中,GFP示踪方式效果更为持久,优于BrdU和PKH26。

关键词：再灌注损伤间质干细胞移植绿色荧光蛋白质类荧光抗体技术脑缺血再灌注骨髓间充质干细胞示踪

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人葡萄糖调节蛋白78基因磷酸化位点的真核突变载体的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2014年第7期27卷 881-884页

作者：宋慧娟赵颂苏荣健辽宁医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换... 详细信息

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换,466位酪氨酸(Y)用苯丙氨酸(F)替换,以质粒pEGFP-N1-GRP78为模板,进行PCR扩增后,构建突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F),并进行DNA测序分析。将测序正确的突变质粒转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法检测融合蛋白在细胞中的表达。结果突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F)经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;突变质粒组荧光蛋白表达分布于细胞质内,细胞核内无表达产物分布;3个突变质粒转染组在相对分子质量约105 000处均可见目的蛋白条带,大小与预期相符。结论成功构建了人GRP78单突变T203A、Y466F和双突变T203A/Y466F真核表达载体,并可在肝癌SMMC-7721细胞中表达,为进一步研究GRP78基因磷酸化位点T203、Y466在肝肿瘤侵袭和转移中的作用奠定了基础。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 磷酸化位点定点诱变真核细胞基因表达

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人GRP78蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1079-1082页

作者：宋慧娟李宏丹魏嘉苏荣健辽宁医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001

目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性。方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1-GRP78。转化... 详细信息

目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性。方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1-GRP78。转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,再将所表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin切割;进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果:酶切和测序结果均证实GRP78原核表达载体构建正确,可诱导表达;ELISA检测显示纯化后的人GRP78抗原具有免疫原性。结论:成功构建了人GRP78基因的原核表达载体,获得了纯化的GRP78蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以GRP78为基础的肝细胞癌的血清学检测提供了抗原。

关键词： GRP78 原核表达蛋白纯化肝细胞癌

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肥胖MC4R重组腺病毒表达载体的构建及鉴定

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山东医药 2011年第15期51卷 45-47页

作者：王玉彬吕金钢苏荣健王光川巴彩凤辽宁医学院附属第一医院辽宁锦州121001 辽宁医学院实验动物中心辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室

目的构建黑素皮质素受体-4(MC4R)重组腺病毒表达载体,为肥胖症的基因治疗研究奠定基础。方法 PCR扩增犬MC4R目的基因后与T载体连接,双酶切鉴定正确的T-A载体获得具有黏性末端的MC4R目的基因;将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,... 详细信息

目的构建黑素皮质素受体-4(MC4R)重组腺病毒表达载体,为肥胖症的基因治疗研究奠定基础。方法 PCR扩增犬MC4R目的基因后与T载体连接,双酶切鉴定正确的T-A载体获得具有黏性末端的MC4R目的基因;将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建穿梭载体pShuttle-CMV/MC4R;PmeⅠ单酶切pshuttle-CMV/犬MC4R后,转化到含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;筛选阳性克隆子;PacⅠ酶切鉴定。结果线性化的pShuttle-CMV/MC4R转化含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,16 h后获得阳性克隆子,经PacⅠ酶切鉴定出一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,通过BglⅡ、XhoⅠ双酶切切下约1000 bp的片段,含MC4R目的基因的重组腺病毒载体构建成功。结论细菌内同源重组法可高效、快捷的制备含犬MC4R的重组腺病毒载体;该载体为人类肥胖症的基因治疗研究奠定了基础。

关键词：肥胖黑素皮质素受体-4 同源重组腺病毒载体

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人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

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眼科研究 2010年第9期28卷 846-850页

作者：萧鸿刘帅李群秀张克剑侯阳宋慧娟刘学政辽宁医学院附属第一医院教务科锦州121001 辽宁医学院人体解剖学教研室锦州121001 高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室

目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)... 详细信息

目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增Ang-1编码区序列,亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1。将pEGFP-N1-Ang-1导入UC-MSCs,然后应用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基对人UC-MSCs进行培养,荧光显微镜下观察Ang-1在人UC-MSCs中的表达,Western blot法检测重组体的表达。结果 RT-PCR法成功克隆人Ang-1基因编码区序列,纯度为1.82;PCR扩增的片段长度为1.5 kb,与预期片段大小相近。双酶切鉴定法可识别重组pEGFP-N1-Ang-1转染质粒,目的基因与预期基因序列的同源性为100%。人UC-MSCs转染的pEGFP-N1/Ang-1质粒能够表达Ang-1蛋白,呈现绿色荧光。转染pEGFP-N1的人UC-MSCs和对照组人UC-MSCs均未见相应的Ang-1蛋白表达。结论成功地克隆出人的Ang-1基因并构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ang-1,为将Ang-1基因转染至人UC-MSCs治疗DR奠定了基础。

关键词：人血管生成素-1 pEGFP-N1 pEGFP-N1-Ang-1 人脐带间充质干细胞

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肝细胞生长因子对肝癌细胞系SMMC-7721失巢凋亡的影响

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世界华人消化杂志 2010年第8期18卷 819-824页

作者：谷艳娇奥瑞芳苏荣健辽宁医学院病理学教研室辽宁省锦州市121001 山西省荣军医院病理科山西省太原市30031 辽宁医学院科学实验中心辽宁省高校分子细胞生物学和新药开发重点实验室辽宁省锦州市121001

目的:探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:悬浮培养SMMC-7721,建立失巢凋亡模型,应用TUNEL染色观察凋亡率.分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-7721及LY294002预处理后的HGF处理细胞,用台盼蓝染色观察... 详细信息

目的:探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:悬浮培养SMMC-7721,建立失巢凋亡模型,应用TUNEL染色观察凋亡率.分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-7721及LY294002预处理后的HGF处理细胞,用台盼蓝染色观察细胞失巢凋亡后存活率,用MTT检测细胞的增殖能力的变化,流式细胞仪检测失巢凋亡细胞的早、晚期凋亡率,Hoechst染色观察不同处理细胞的凋亡情况.应用免疫印迹技术检测失巢凋亡后Akt、p-Akt、FAK、p-FAK的表达.结果:TUNEL染色显示,悬浮培养的SMMC-7721失巢凋亡率远大于贴壁培养的SMMC-7721(21.72%±6.85%vs66.67%±7.66%,P<0.05);台盼蓝染色显示,HGF处理后的SMMC-7721存活率明显高于悬浮培养细胞(P<0.05),而HGF不能提高经LY294002预处理后细胞的存活率;MTT实验显示HGF处理细胞A值明显大于悬浮培养细胞(P<0.05),LY294002预处理细胞与悬浮培养细胞相似.流式细胞仪和Hoechst33258染色均显示HGF处理后细胞的失巢凋亡明显低于悬浮培养细胞(P<0.05),而经LY294002处理后细胞的失巢凋亡率明显升高.蛋白印迹结果显示HGF处理后细胞Akt、FAK、p-Akt、p-FAK的表达均升高,而经LY294002预处理后,其表达与悬浮培养SMMC-7721一致.结论:在肝细胞癌SMMC-7721失巢凋亡过程中,HGF通过活化Akt和FAK来增强细胞的抗失巢凋亡能力,该作用受PI3K的调节.

关键词：肝细胞癌失巢凋亡肝细胞生长因子 Akt 磷酸肌酸3激酶

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猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第4期25卷 388-392页

作者：赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹辽宁医学院实验动物教研室锦州121001 辽宁医学院高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室锦州121001 辽宁医学院畜牧兽医学院锦州121001

利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661... 详细信息

利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本***2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.

关键词：猪 CFL2b cDNA SMART RACE 肌纤维性状序列分析 Northern杂交

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