检索结果-内蒙古大学图书馆

中国细胞生物学学报 2013年第7期35卷 973-978页

作者：李俊陶贵周黄建华辽宁医学院附属第一医院心内科锦州121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室锦州121001

该研究针对LOX-1基因(OLR1)设计并合成3条siRNA干扰序列,与双酶切的U6-vshR-NA-CMV-GFP慢病毒载体连接得到重组载体,包装慢病毒并测定滴度。采用最佳MOI值及转染条件,转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVE... 详细信息

该研究针对LOX-1基因(OLR1)设计并合成3条siRNA干扰序列,与双酶切的U6-vshR-NA-CMV-GFP慢病毒载体连接得到重组载体,包装慢病毒并测定滴度。采用最佳MOI值及转染条件,转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),转染96 h后通过RT-PCR和Western blot检测LOX-1 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后ox-LDL诱导HUVEC的凋亡情况。测序证实靶向LOX-1 RNAi慢病毒载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示转染后LOX-1 mRNA及蛋白均受到不同程度抑制(P<0.05);流式检测结果显示抑制LOX-1表达后ox-LDL诱导HUVEC凋亡显著减少(P<0.05)。该研究应用RNAi技术成功构建LOX-1 RNAi慢病毒载体,有效抑制了LOX-1的表达,显著减少了ox-LDL诱导的凋亡,为进一步研究LOX-1基因沉默减轻内皮细胞损伤及相应保护机制奠定了基础。

关键词： LOX-1 慢病毒载体 RNA干扰人脐静脉内皮细胞凋亡

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突变型低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及常氧表达

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中华实验外科杂志 2011年第9期28卷 1539-1540,F0003,F0004页

作者：李谌靳云龙胡亮刘丹平辽宁医学院附属第一医院辽宁省医学组织工程重点实验室锦州121001 辽宁医学院附属第一医院骨关节外科锦州121001

目的为了在常氧条件下观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在骨缺损部位促新血管生成作用，构建能够同时表达突变型HIF-1仅和人源化绿色荧光蛋白（hrGFP）的腺病毒载体并检测其在兔骨髓间充质干细胞（MSCs）中的表达。方法利用聚合酶链式... 详细信息

目的为了在常氧条件下观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在骨缺损部位促新血管生成作用，构建能够同时表达突变型HIF-1仅和人源化绿色荧光蛋白（hrGFP）的腺病毒载体并检测其在兔骨髓间充质干细胞（MSCs）中的表达。方法利用聚合酶链式反应（PCR）定点突变人HIF-1α编码区（CDS）第402、564和803位氨基酸，将突变后HIF-1α和hrGFP重组入pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度。以感染复数（MOI）=100将腺病毒转染MSCs，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot方法检测转染细胞中HIF-1αmRNA和蛋白表达。结果（1）第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸。（2）A、B两组HIF-10tmRNA表达量明显高于C、D两组，差异有统计学意义（P〈0．01）；A组HIF-1α蛋白表达量明显高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论（1）腺病毒载体Ad—HIF-1α mu-IRES—hrGFP-1构建成功。（2）突变后HIF-1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。

关键词：低氧诱导因子-1α 基因突变重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞

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羟基红花黄色素通过RhoA/ROCK通路保护大鼠心肌再灌注损伤的机制研究

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临床心血管病杂志 2015年第7期31卷 791-794页

作者：王亚光王鹏刘洪光张媛媛陶贵周黄建华辽宁医学院附属第一医院心内科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室

目的:研究羟基红花黄色素A对大鼠离体缺血心脏再灌注的保护作用,探讨其与Rho/ROCK信号通路的作用。方法:36只大鼠被随机分为7组,采用离体心脏灌流模型,给予缺血预处理及药物灌流,比较各组心率、冠状动脉流量,测定左心室内压,TTC心肌染... 详细信息

目的:研究羟基红花黄色素A对大鼠离体缺血心脏再灌注的保护作用,探讨其与Rho/ROCK信号通路的作用。方法:36只大鼠被随机分为7组,采用离体心脏灌流模型,给予缺血预处理及药物灌流,比较各组心率、冠状动脉流量,测定左心室内压,TTC心肌染色评估梗死范围,Western blot检测心肌组织内ROCK1、ROCK2活性以及Caspase-3的表达。结果:治疗组大鼠心脏缺血再灌注损伤减轻,心肌梗死面积减少,ROCK1、ROCK2活性以及Caspase-3的表达减低。结论:羟基红花黄色素A能够减轻大鼠心脏缺血再灌注损伤,同时减少心肌梗死面积,其作用机制可能与其抑制RhoA/ROCK信号通路,减少Caspase-3的表达有关。

关键词：羟基红花黄色素A 缺血再灌注损伤 RhoA/ROCK Caspase-3

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黄芩苷对再灌注心肌细胞保护作用及与心肌细胞自噬的相关性

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中国循环杂志 2016年第7期31卷 701-705页

作者：王鹏马军军杜亚明辽宁医学院附属第一医院胸心外科辽宁省锦州市121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室辽宁省锦州市121001

目的 :探讨黄芩苷对再灌注心肌细胞保护作用及与心肌细胞自噬的相关性。方法 :将48只大鼠随机分为4组(n=12):假手术组,假手术+黄芩苷组,缺血再灌注组,黄芩苷处理组。术前7天每日1次灌胃,建立各组模型。统计各组同时间点的血流动力学及... 详细信息

目的 :探讨黄芩苷对再灌注心肌细胞保护作用及与心肌细胞自噬的相关性。方法 :将48只大鼠随机分为4组(n=12):假手术组,假手术+黄芩苷组,缺血再灌注组,黄芩苷处理组。术前7天每日1次灌胃,建立各组模型。统计各组同时间点的血流动力学及再灌注45 min后心肌梗死面积情况,免疫印迹试验(Western blot)测定再灌注30 min后心肌微管相关蛋白(LC3-Ⅱ)及自噬体膜标记蛋白(Becl-1)表达情况,再灌注30 min后检测线粒体膜通道转换孔(m PTP)开放情况。结果 :假手术组和假手术+黄芩苷组心肌梗死面积极小,不便进行比较。缺血再灌注组心肌梗死面积(41.32±1.85)%,黄芩苷处理组心肌梗死面积(23.30±1.60)%,两组差异有统计学意义(P<0.001)。再灌注30min后LC3-Ⅱ及Becl-1蛋白表达量,缺血再灌注组(LC3-Ⅱ:1.051±0.005,Becl-1:1.169±0.002)和黄芩苷处理组(LC3-Ⅱ:0.863±0.009,Becl-1:0.943±0.005)较假手术组(LC3-Ⅱ:0.763±0.007,Becl-1:0.647±0.014)明显增加(P<0.01);黄芩苷处理组较缺血再灌注组明显下降(P<0.01)。再灌注30 min后烟酰胺腺嘌呤=核苷酸(NAD+)含量(nmol/mg),缺血再灌注组(6.02±0.33)和黄芩苷处理组(9.56±0.53)较假手术组(11.28±0.37)明显下降(P<0.01);黄芩苷处理组较缺血再灌注组明显增加(P<0.01)。结论 :黄芩苷对正常心肌细胞自噬无影响,但能显著减少缺血再灌注心肌梗死面积,降低再灌注后的过度自噬发生,其机制可能通过抑制m PTP开放从而减少自噬的相关诱导因素发挥作用。

关键词：黄芩苷心肌再灌注保护自噬

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急性冠脉综合征患者血液Rho激酶活性分析

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医学与哲学（B） 2014年第7期35卷 26-29页

作者：刘洪光陶贵周黄建华虞改雪辽宁医学院附属第一医院心内科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室辽宁锦州121001 山东省莘县人民医院山东聊城252400

探讨Rho激酶(ROCK)活性与急性冠脉综合征(ACS)患者冠状动脉狭窄程度及预后的关系。选取2012年6月至2013年3月住院的129例患者,其中急性心肌梗死(AMI)组68例、不稳定型心绞痛(UA)组30例、对照(CON)组31例。Western Blot检测血液白细胞中R... 详细信息

探讨Rho激酶(ROCK)活性与急性冠脉综合征(ACS)患者冠状动脉狭窄程度及预后的关系。选取2012年6月至2013年3月住院的129例患者,其中急性心肌梗死(AMI)组68例、不稳定型心绞痛(UA)组30例、对照(CON)组31例。Western Blot检测血液白细胞中ROCK、ROCK1、ROCK2活性,同时根据冠状动脉的狭窄程度及是否发生心血管意外分组再次比较。AMI组和UA组ROCK、ROCK1、ROCK2活性均增高;且AMI组高于UA组;三支、双支、单支病变组活性依次减低,Gensini评分≥20分组及发生心血管意外组均高于Gensini评分<20分组及未发生心血管意外组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROCK活性可能对ACS患者预后观察、评估有重要意义。

关键词：急性冠脉综合征 Rho 激酶 Gensini 评分预后

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骨髓间充质干细胞中突变型人低氧诱导因子1α真核表达载体的表达

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第45期15卷 8495-8498页

作者：张男李谌郭韬刘丹平辽宁医学院附属第一医院中心实验室辽宁省医学组织工程重点实验室辽宁省外科学重点实验室辽宁省锦州市121000 辽宁医学院附属第一医院骨关节外科辽宁省锦州市121000

背景:转基因小鼠体内实验证实,重组的低氧诱导因子1α可以促进皮肤形态功能正常的血管新生。目的:构建能够在常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和绿色荧光蛋白报告分子的新型腺病毒真核表达载体,并转染SD大鼠骨髓间充质... 详细信息

背景:转基因小鼠体内实验证实,重组的低氧诱导因子1α可以促进皮肤形态功能正常的血管新生。目的:构建能够在常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和绿色荧光蛋白报告分子的新型腺病毒真核表达载体,并转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,检测该基因在细胞中的表达情况。方法:利用Lipofectamine2000介导将构建成功的重组腺病毒真核表达载体pAd-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1转染HEK293A细胞,包装病毒,以最佳感染指数=50将重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,并设3个对照组,即阳性对照组:转染Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1;阴性对照组:转染Ad-CMV-IRES-hrGFP-1组;空白组:未转染病毒。结果与结论:①腺病毒载体成功转染HEK293A细胞,包装成功,细胞内有大量绿色荧光表达。②转染突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体的细胞在常氧条件下蛋白表达量明显高于转其他3组,3个对照组间差异无显著性意义(P>0.05)。提示突变型腺病毒真核表达载体Ad-HIF1α-IRES-hrGFP-1在HEK293A内成功包装;突变后低氧诱导因子1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。

关键词：低氧诱导因子1α 基因突变重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞转染

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RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

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中国动脉硬化杂志 2014年第9期22卷 891-896页

作者：刘洪光陶贵周李俊黄建华虞改雪辽宁医学院附属第一医院心内科辽宁省锦州市121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室辽宁省锦州市121001 莘县人民医院山东省莘县252400

目的构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞。观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制。方法针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成... 详细信息

目的构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞。观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制。方法针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干扰序列,测定滴度。转染人脐静脉内皮细胞96 h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率。转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24 h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表达。结果测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×1011TU/L。转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少(P<0.01)。与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达(P<0.05);与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用(P<0.05)。结论干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用。本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据。

关键词：血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 RNA干扰细胞间黏附分子1 单核细胞趋化蛋白1 一氧化氮 RhoA/Rho激酶

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Akt/GSK-3β/eNOS通路在藏红花酸保护离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

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天津医药 2015年第11期43卷 1300-1303页

作者：王亚光王鹏陶贵周黄建华辽宁医学院附属第一医院心内科锦州121001 辽宁医学院附属第一医院院组织工程重点实验室锦州121001

目的研究藏红花酸(CRO)对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK)-3β/一氧化氮合酶(eNOS)信号通路的关系。方法 SD大鼠40只,随机数字表法均分为正常(N)组、缺血再灌注(IR)组及5... 详细信息

目的研究藏红花酸(CRO)对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK)-3β/一氧化氮合酶(eNOS)信号通路的关系。方法 SD大鼠40只,随机数字表法均分为正常(N)组、缺血再灌注(IR)组及5、10、15 mg/L加药(CRO_1、CRO_2、CRO_3)组,比较再灌注30 min时各组心率(HR),冠脉流量(CF),左心室内压测定(LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax)。灌流结束TTC心肌染色评估梗死范围,分光光度法测定肌浆乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK-MB);Western blot检测各组心肌组织内Akt、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化的糖原合成酶激酶(p-GSK)-3β、eNOS、磷酸化的一氧化氮合酶(p-NOS)。结果 IR组再灌注30 min时HR、CF、LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax较N组及加药组降低,心肌梗死面积较加药组增大,LDH、CK-MB表达较N组及加药组增加(均P<0.05),CRO_3组再灌注指标较CRO_1组升高,梗死面积降低,LDH、CK-MB表达减少(P<0.05)。IR组Akt、GSK-3b及eNOS较N组及加药组的表达差异无统计学意义,但p-Akt、p-GSK-3β及p-NOS与N组及加药组降低,且CRO_3组较CRO_1组增加(均P<0.05)。结论藏红花酸能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用机制可能与激活Akt/GSK-3β/eNOS通路并影响其磷酸化水平有关。

关键词：体外循环再灌注损伤蛋白激酶类糖原合成酶激酶-3β 一氧化氮合酶氧化磷酸化

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RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2015年第1期17卷 79-82页

作者：刘洪光屈宝泽陶贵周黄建华辽宁医学院附属第一医院心内科锦州121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室锦州121001

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-... 详细信息

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+最佳干扰序列慢病毒转染)。荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化。结果与对照组比较,ox-LDL组和阴性转染组p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05)。与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05)。结论干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用。

关键词： RNA干扰脂蛋白类 LDL 内皮细胞细胞骨架肌动蛋白类 rho相关激酶类

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组织因子途径抑制物2在胃间质瘤组织中的表达及临床意义

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解放军医学院学报 2013年第3期34卷 269-272页

作者：邓蓓蓓王贵军王玉彬李迪诺李谌辽宁医学院附属第一医院妇科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院普外科辽宁锦州121001 辽宁医学院附属第一医院辽宁省医学组织工程重点实验室辽宁锦州121001

目的探讨组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)在胃间质瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化、RT-PCR、Western blot检测TFPI-2在72例胃间质瘤患者的肿瘤中心处组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达... 详细信息

目的探讨组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)在胃间质瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化、RT-PCR、Western blot检测TFPI-2在72例胃间质瘤患者的肿瘤中心处组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达。结果 TFPI-2在正常组织中的表达水平明显高于肿瘤旁组织,在瘤旁组织中表达水平明显高于瘤中心处组织(P<0.01)。胃间质瘤中心组织TFPI-2的表达水平随着NIH分级升高而下调(P<0.01),TFPI-2的低表达与肿瘤侵袭转移关系密切(P<0.05)。结论正常胃组织中TFPI-2的表达水平明显高于间质瘤组织,TFPI-2的表达下降可能与间质瘤的侵袭与转移有关。

关键词：胃肠道间质瘤组织因子途径抑制物2 侵袭转移

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