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卵巢早衰动物模型造模

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中国实用医药 2011年第19期6卷 229-230页

作者：孙莉莉周郦楠辽宁卫生职业技术学院形态教研室沈阳110101

卵巢早衰(POF)是多种病因所致的卵巢功能衰竭。其病理表现复杂,病因和发病机制至今尚不清楚。而且尚没有有效的预防和治疗方法。由于卵巢早衰的病因多种多样,如自身免疫功能异常、遗传因素、代谢因素、化疗、放疗及感染等。

关键词：卵巢早衰卵巢早衰模型

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补中益气汤含药血清对人肺腺癌A549/DDP细胞耐药作用的影响

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中国病理生理杂志 2014年第2期30卷 233-238页

作者：刘亚莉王莹易佳丽史妍婷刘春英辽宁中医药大学基础医学院病理教研室辽宁沈阳110032 辽宁卫生职业技术学院医学技术系卫生检验教研室辽宁沈阳110101

目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2... 详细信息

目的:观察补中益气汤含药血清对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐药作用的影响并探讨其机制。方法:采用血清药理学方法制备含药血清;用MTT比色法筛选出最佳含药血清;以最佳含药血清和不同浓度梯度的顺铂干预A549和A549/DDP细胞,MTT比色法计算2种细胞的IC50,同时计算A549/DDP耐药指数和逆转指数;将A549/DDP细胞分为对照血清组、最佳含药血清组、LY294002组、LY294002+最佳含药血清组(联合组)和阴性对照组,给予相应的处置因素后,培养48 h,采用免疫细胞化学方法、Western blotting和real-time PCR等方法检测各组中PI3K、Akt蛋白与mRNA的表达情况。结果:10%中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间。最佳含药血清与顺铂联合作用时,A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显增强,最佳含药血清的逆转指数约为2.46。最佳含药血清组和联合组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平均下降,与对照血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组的PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达水平与对照血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补中益气汤通过减少PI3K的表达而降低A549/DDP细胞的耐药指数,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,干预或调整A549/DDP细胞对顺铂的耐药作用。

关键词：补中益气汤含药血清肺腺癌耐药性 PI3K蛋白 Akt蛋白

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Ag85 A-CD226 DNA 疫苗的制备及对小鼠免疫功能的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第3期34卷 235-240页

作者：李岩王大南杨芳莉朱俊丰桑力轩孙逊李胜军吕昌龙中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001 辽宁卫生职业技术学院沈阳110101

目的：构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，制备Ag85A-CD226 DNA疫苗，经灌胃接种并观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法采用PCR方法从CD226-PCR2．1-ToPo质粒扩增CD226基因，与pcDNA3．1-Ag85A质粒连接，构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，经脂质体转染法瞬时转染HEK293细胞株，采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光方法检测Ag85A-CD226基因在该细胞内的表达。进一步提取纯化pcDNA3．1-Ag85 A-CD226重组质粒，用脂质体包裹制成Ag85 A-CD226 DNA疫苗。经灌胃Ag85 A-CD226 DNA疫苗接种于小鼠，乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性，ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子分泌水平，real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平。结果成功构建真核细胞内表达pcDNA3．1-Ag85A-CD226重组质粒，并且转染HEK293细胞株检测到Ag85 A-CD226融合蛋白分子的表达。接种Ag85 A-CD226 DNA疫苗的小鼠较对照组小鼠NK细胞杀伤活性显著升高（ P＜0．01）；脾细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ和IL-2的分泌水平显著增高（P＜0．01），而IL-4分泌水平显著降低（P＜0．01）；肠黏膜组织内TNF-α、IFN-γ和IL-2的表达水平显著升高（P＜0．01），而IL-4表达水平未见有统计学差异（P＞0．05）。结论 Ag85A-CD226 DNA疫苗经灌胃接种可诱导小鼠全身和肠道局部Th1型免疫应答增强，其效果强于单独应用Ag85 A或CD226 DNA疫苗。

关键词： Ag85A CD226 DNA疫苗免疫功能

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脊髓继发性损伤大鼠动物模型的制作

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中国实用医药 2011年第36期6卷 251-252页

作者：孙莉莉周郦楠辽宁卫生职业技术学院形态学教研室 110101

目的观察继发性脊髓损伤大鼠。方法用组织化学和电子显微镜投射方法观察大鼠脊髓前角运动神经原细胞的变化。结果继发性脊髓损伤大鼠脊髓前角运动神经细胞化学组织染色的改变。结论组织化学染色反应物减少及电子显微镜的超微改变证明脊... 详细信息

目的观察继发性脊髓损伤大鼠。方法用组织化学和电子显微镜投射方法观察大鼠脊髓前角运动神经原细胞的变化。结果继发性脊髓损伤大鼠脊髓前角运动神经细胞化学组织染色的改变。结论组织化学染色反应物减少及电子显微镜的超微改变证明脊髓继发损伤动物模型制作成功。

关键词：继发性脊髓损伤化学组织染色大鼠

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预防性回肠蕈状造口在腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除术中应用价值研究

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中国实用外科杂志 2012年第5期32卷 403-405页

作者：张庆彤刘亚莉王永鹏闫晓菲宋纯辽宁省肿瘤医院大肠外科辽宁沈阳110042 辽宁卫生职业技术学院医学技术教研室辽宁沈阳110101

目的探讨应用回肠蕈状双腔造口预防腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除(TME)术后吻合口漏的可行性。方法回顾性分析2006年4月至2010年3月辽宁省肿瘤医院大肠外科应用回肠蕈状双腔造口术预防腹腔镜TME术后吻合口漏的65例(造口组)及同期未行预防... 详细信息

目的探讨应用回肠蕈状双腔造口预防腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除(TME)术后吻合口漏的可行性。方法回顾性分析2006年4月至2010年3月辽宁省肿瘤医院大肠外科应用回肠蕈状双腔造口术预防腹腔镜TME术后吻合口漏的65例(造口组)及同期未行预防性造口的腹腔镜直肠癌TME手术85例(未造口组)病人临床资料。腹腔镜下完成低位或超低位吻合后,造口组于距回盲瓣30～40cm处回肠于右髂前上棘与脐连线外1/3处行双腔造口,回肠沿与纵轴垂直方向切开达1/2周,近端做蕈状乳头高于皮肤0.5cm,远端回肠平坦式缝合于皮肤。骶前放置双腔引流管。术后3～5个月闭瘘。未造口组仅骶前放置双腔引流管。结果造口组病人粪便转流彻底。无造口周围皮肤严重腐蚀与不耐受,无死亡病例,无吻合口漏。未造口组5例出现吻合口漏,3例4～8周后愈合,2例行手术造口治疗后治愈,无死亡病例。结论应用回肠蕈状双腔造口术预防腹腔镜直肠癌TME术后吻合口漏是可行的,造口护理方便,闭瘘创伤小,粪便转流彻底。

关键词：预防性回肠造口:全直肠系膜切除吻合口漏直肠癌腹腔镜

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口服CD226 DNA疫苗对小鼠免疫功能的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第5期27卷 585-590页

作者：李岩王大南杨芳莉桑力轩朱俊丰李胜军孙逊吕昌龙中国医科大学基础医学院免疫教研室辽宁沈阳110001 辽宁卫生职业技术学院免疫教研室辽宁沈阳110101

目的制备口服CD226 DNA疫苗,观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法以质粒CD226-PCR2.1-ToPo为模板,PCR扩增CD226基因,克隆至pcDNA3.1载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD226,利用脂质体LipofectamineTM2000瞬时转染CT-26细胞株,采用RT-PCR法、Western blot法、流式细胞术检测CD226基因在CT-26细胞中的表达。将质粒pcDNA3.1-CD226用脂质体Lipofectamine TM2000包裹制成CD226 DNA疫苗(100μg质粒/100μl脂质体),经灌胃免疫C57BL/6小鼠,实验分CD226疫苗组、pcDNA3.1组和生理盐水组,流式细胞术检测CD226在小鼠脾细胞中的表达;还原酶法检测NO分泌水平;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性;ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子(IL-2、IL-4、IFNγ和TNF-α)分泌水平;Real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平。结果质粒pcDNA3.1-CD226经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pcDNA3.1-CD226转染CT-26细胞的转染率为32.14%,转染的CT-26细胞检测到CD226蛋白表达。CD226疫苗组CD226 CD4+T细胞的绝对数、NK细胞杀伤活性、NO分泌水平、脾细胞培养上清中TNF-α、IFNγ和IL-2分泌水平、肠黏膜组织内TNF-α和IFNγ基因mRNA水平均明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P<0.05);而CD226疫苗组脾细胞培养上清中IL-4分泌水平及肠黏膜组织内IL-2和IL-4基因mRNA水平,与pcDNA3.1组和生理盐水组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CD226DNA疫苗经灌胃免疫,可诱导小鼠全身Th1型免疫应答增强和肠道局部部分Th1型免疫应答增强。

关键词： CD226 DNA疫苗口服免疫应答

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不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响

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解剖学报 2010年第2期41卷 241-246页

作者：徐益荣刘斌杨亚安王旻晨刘珺吴开云盐城卫生职业技术学院护理系外科护理教研室江苏盐城224005 苏州大学医学部解剖学教研室苏州215123

目的探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血... 详细信息

目的探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑmRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达。结果体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高。血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达。结论血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用。β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义。

关键词：细胞骨架细胞增殖表型转化血管平滑肌细胞反转录-聚合酶链反应大鼠

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术中短期低频电刺激对陈旧性周围神经缺损再生能力的影响

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中国修复重建外科杂志 2017年第3期31卷 335-344页

作者：焦海山肖波王晓冬李东印宋悦宁郑辉刘晓梅苏州卫生职业技术学院基础医学教研室江苏苏州215009 南通大学医学院组织学与胚胎学教研室江苏南通226001

目的探讨术中短期低频电刺激(short-term low-frequency electrical stimulation,SLES)对陈旧性周围神经缺损再生能力的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,体质量160~180 g,制备大鼠坐骨神经13 mm长陈旧性缺损模型,随机分为实验组和对照组,... 详细信息

目的探讨术中短期低频电刺激(short-term low-frequency electrical stimulation,SLES)对陈旧性周围神经缺损再生能力的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,体质量160~180 g,制备大鼠坐骨神经13 mm长陈旧性缺损模型,随机分为实验组和对照组,每组15只。实验组切取对侧正常坐骨神经桥接缺损并施以SLES,对照组同法修复神经缺损但不予以电刺激。修复术后1、2、7 d取大鼠脊髓腰膨大段(L_(4、5))以及相应背根神经节,行抗生长相关蛋白43(growth-associated proteins 43,GAP-43)及抗脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)双重免疫荧光染色观察。修复术后3个月行荧光金逆行示踪实验。取再生神经组织中段作横、纵冰冻切片,分别行Meyer神经三色染色和抗鼠神经丝蛋白(neurofilament,NF)及可溶性蛋白100(soluble protein100,S-100)双重免疫荧光染色观察,并取术侧远端神经行透射电镜观察,测量有髓神经纤维、轴突直径及髓鞘厚度,计算有髓神经纤维密度及G比值。取术侧腓肠肌计算相对湿重比,并行Karnovsky-Root运动终板胆碱酯酶组织学染色观察。结果实验组修复术后1、2 d,术侧对应运动神经元和感觉神经元GAP-43和BDNF表达上调快于对照组。荧光金逆行示踪实验示,实验组术侧脊髓前角及相应背根神经节中标记的神经元多于对照组。实验组再生神经Meyer神经三色染色和双重免疫荧光染色均显示再生神经组织发育优于对照组。透射电镜观察示再生神经纤维成簇分布,实验组轴突直径、髓鞘厚度、有髓神经纤维密度及G比值均高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。实验组术侧腓肠肌相对湿重比高于对照组,差异有统计学意义(t=4.633,P=0.000)。腓肠肌Karnovsky-Root运动终板胆碱酯酶组织学染色示,实验组运动终板的形态和数量略优于对照组。结论术中SLES能在一定程度上提高大鼠短期(1个月)长距离陈旧性周围神经缺损的再生能力。

关键词：短期低频电刺激周围神经陈旧性损伤神经缺损修复大鼠

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糖皮质激素对其受体、热休克蛋白90和组蛋白去乙酰化酶6的影响及中药干预研究

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中国医科大学学报 2010年第8期39卷 607-609页

作者：王雪耿龙季永智周鸿波葛露王艳中国习医科大学附属第一医院皮肤科沈阳110001 辽宁省卫生职业技术学院外语教研室沈阳110101 辽宁省卫生职业技术学院卫生管理系沈阳110101

目的检测应用肾上腺糖皮质激素后激素受体(GR)、热休克蛋白90(HSP90)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的变化及应用中药后对其干预情况。方法采用实时定量PCR方法检测正常对照组、地塞米松组及地塞米松加中药组的GR、HSP90和HDAC6的mRNA表达... 详细信息

目的检测应用肾上腺糖皮质激素后激素受体(GR)、热休克蛋白90(HSP90)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的变化及应用中药后对其干预情况。方法采用实时定量PCR方法检测正常对照组、地塞米松组及地塞米松加中药组的GR、HSP90和HDAC6的mRNA表达情况。结果与正常对照组相比,地塞米松组和地塞米松加中药组GR的表达水平均明显降低,差异有统计学意义。地塞米松组HSP90β mRNA表达水平与正常对照组相比明显降低,地塞米松加中药组HSP90β mRNA表达水平比地塞米松组升高,而比正常对照组低。地塞米松加中药组HDAC6 mRNA明显高于正常对照组和地塞米松组,差异有统计学意义。结论应用糖皮质激素后GR减少;应用糖皮质激素后HSP90β减少,右归丸对其略有改善;应用糖皮质激素后再应用右归丸HDAC6升高。

关键词：糖皮质激素受体热休克蛋白90 组蛋白去乙酰化酶6

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系统性硬化病合并血管炎和播散性肺结核感染尸检一例

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中华风湿病学杂志 2013年第9期17卷 645-647页

作者：邬秀娣张岳灿浙江省宁波市第二医院风湿免疫科 315010 宁波卫生职业技术学院人体形态教研室

患者男，45岁，自2008年冬季开始出现双手遇冷发白发紫，一直未重视未诊治，自觉四肢皮肤进行性变硬。2011年冬开始患者出现双手手指末端发黑，在当地医院诊断为“雷诺病”收住院，入院时发现左、右手及左下肢肢端多处皮肤紫黑，部分指... 详细信息

患者男，45岁，自2008年冬季开始出现双手遇冷发白发紫，一直未重视未诊治，自觉四肢皮肤进行性变硬。2011年冬开始患者出现双手手指末端发黑，在当地医院诊断为“雷诺病”收住院，入院时发现左、右手及左下肢肢端多处皮肤紫黑，部分指体缺血坏死，局部压痛。

关键词：系统性硬化病肺结核感染播散性血管炎尸检四肢皮肤手指末端医院诊断

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