目的克隆和分析屋尘螨主要变应原Der p 1,并实现原核表达。方法分离屋尘螨总RNA,根据Gen Bank已公布的Der p 1核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增Der p 1编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET-28a(+),将表达质粒转化至***21(DE3...
详细信息
目的克隆和分析屋尘螨主要变应原Der p 1,并实现原核表达。方法分离屋尘螨总RNA,根据Gen Bank已公布的Der p 1核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增Der p 1编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET-28a(+),将表达质粒转化至***21(DE3)并用IPTG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET-28a(+)-Der f 1,Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的Der p 1编码基因与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸222个。屋尘螨和粉尘螨1类变应原氨基酸序列相似率为60%,而粉尘螨与梅氏嗜霉螨1类变应原相似率为85%,分子进化分析亦提示粉尘螨和梅氏嗜霉螨亲缘关系较近。推测所获rDer p 1二级结构中,α螺旋占33.78%,延伸链占21.62%,随机线圈占44.59%。结论尘螨变应原Der p 1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。序列分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合。
瘦素具有促进脂肪分解、调节体重作用,但许多肥胖者血清瘦素水平增高,说明存在瘦素抵抗。细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3）可由瘦素诱导产生,而SOCS-3又可抑制瘦素信号通路。瘦素作用细胞SOCS-...
详细信息
瘦素具有促进脂肪分解、调节体重作用,但许多肥胖者血清瘦素水平增高,说明存在瘦素抵抗。细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3）可由瘦素诱导产生,而SOCS-3又可抑制瘦素信号通路。瘦素作用细胞SOCS-3活性增强是瘦素抵抗的潜在机制，也是人类肥胖的特性。瘦素可以直接调节脂肪细胞代谢，在脂肪细胞水平的瘦素抵抗可能也有助于肥胖发展，并且与2型糖尿病等疾病相联系。因此，本研究拟通过高脂膳食诱导大鼠发生肥胖，采用瘦素处理成熟脂肪细胞，检测细胞内甘油三酯含量及SOCS-3mRNA表达，为探讨肥胖及其相关疾病发病机制提供依据。
暂无评论