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浙江大学学报（医学版） 2016年第2期45卷 179-186页

作者：郑泽峰乐辉辉陈维善沈炜亮欧阳宏伟浙江大学医学院干细胞与再生医学系浙江大学李达三·叶耀珍干细胞与再生医学研究中心浙江省组织工程与再生医学技术重点实验室浙江杭州310058 浙江大学医学院附属第二医院骨科浙江大学骨科研究所浙江杭州310009

血小板富集血浆（PRP）是血小板浓度高于体内正常浓度且富含各种生长因子的血浆制品，通过全血离心去除红细胞后获得。PRP通过释放丰富的细胞因子，促进肌腱细胞及肌腱干细胞增殖、分化及基质的合成分泌，从而促进组织修复和再生。同时... 详细信息

血小板富集血浆（PRP）是血小板浓度高于体内正常浓度且富含各种生长因子的血浆制品，通过全血离心去除红细胞后获得。PRP通过释放丰富的细胞因子，促进肌腱细胞及肌腱干细胞增殖、分化及基质的合成分泌，从而促进组织修复和再生。同时，通过抑制疼痛相关因子的表达，缓解患者的疼痛症状。目前大量临床研究表明，PRP对于髌腱病、肱骨外上髁炎、足底筋膜炎等肌腱疾病有着较好的修复作用，但也有一些研究显示其效果不确切，主要是由于PRP提取流程不一致、患者病程不同以及注射方案不同等所导致。因其安全，可作为肌腱病保守治疗的选择，尤其是在其他保守治疗无效的情况。相信通过更多严谨的基础研究及临床试验，规范其使用过程，PRP将在肌腱病的治疗上发挥更重要的作用。

关键词：肌腱病血小板综述

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蚕丝相关组织工程支架在肌腱和韧带再生修复中的应用

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浙江大学学报（医学版） 2016年第2期45卷 152-160页

作者：胡叶君乐辉辉金张楚陈晓茵梓沈炜亮欧阳宏伟浙江大学医学院干细胞与再生医学系浙江大学李达三·叶耀珍干细胞与再生医学研究中心浙江省组织工程与再生医学技术重点实验室浙江杭州310058 浙江大学医学院附属第二医院骨科浙江大学骨科研究所浙江杭州310009

肌腱和韧带损伤是临床常见运动系统损伤之一。传统治疗手段因供体来源有限、机体免疫排斥等局限，尚无法达到令人满意的临床疗效，尤其是对那些竞技运动员。目前的组织工程学手段能够突破传统治疗的局限，促进肌腱和韧带损伤的修复再生... 详细信息

肌腱和韧带损伤是临床常见运动系统损伤之一。传统治疗手段因供体来源有限、机体免疫排斥等局限，尚无法达到令人满意的临床疗效，尤其是对那些竞技运动员。目前的组织工程学手段能够突破传统治疗的局限，促进肌腱和韧带损伤的修复再生。蚕丝是一种天然的生物材料，具有生物相容性较好、力学强度跨度大和物理结构可调节等特性，可以作为肌腱和韧带的组织工程支架。以蚕丝支架为核心提供力学支持，复合胶原等其他生物成分能增加支架的三维空间，促进更多细胞黏附，并提升材料的生物相容性。体内研究逐步验证了蚕丝支架在发病率较高的肌腱和韧带（前交叉韧带、内侧副韧带、跟腱、肩袖韧带）修复中的临床应用潜能。生物力学良好，宿主自然整合的组织工程肌腱和韧带需要深入基础微观领域研究和延伸，临床操作领域研究，促进产品走出实验室。开辟临床应用新航路，为肌腱和韧带损伤患者带来新的希望。本文就蚕丝相关组织工程支架的历史演变及其用于肌腱和韧带损伤修复的效果进行综述和展望。

关键词：蚕属腱损伤韧带支架修复外科手术组织工程再生综述

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Tet1蛋白对HEK293T细胞增殖、周期及凋亡的影响

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中国比较医学杂志 2020年第6期30卷 69-75页

作者：莫晶杨红兰刘含金皎范安然张鹏周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室贵州医科大学免疫教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞... 详细信息

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的Tet1CD稳转细胞系293T(Tet1CD)。通过Western blot检测Tet1蛋白的表达;通过DNA dot blot检测细胞基因组中5hmC的含量,通过流式细胞术检测Tet1CD蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测Tet1CD蛋白对细胞增殖的影响。结果成功建立了可诱导Tet1CD过表达的HEK293T细胞系293T(Tet1CD);Western blot结果显示诱导后细胞内Tet1CD蛋白表达上升;DNA dot blot结果显示过表达Tet1CD蛋白细胞内5hmC含量升高;流式细胞术结果显示,Tet1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0. 05)及增加G2时期细胞比例(P<0. 05);细胞计数结果显示,Tet1CD过表达抑制细胞增殖(P<0. 0001)。结论 Tet1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖。

关键词：表观遗传 Tet蛋白细胞周期细胞凋亡细胞增殖

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组织工程骨支架材料及构建方式研究进展

组织工程骨支架材料及构建方式研究进展

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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会

作者：杨春露曾宪立武警辽宁省总队医院沈阳医学院附属中心医院辽宁省手外科组织工程实验室

背景：在骨组织工程研究中，人工骨的构建方式是重要的环节。目的：回顾分析骨组织工程人工骨支架材料、构建方式以及种子细胞基础与应用研究。方法：由第一作者检索1994至2013年pubmed数据以及万方数据库相关组织工程人工骨构建方法...

背景：在骨组织工程研究中，人工骨的构建方式是重要的环节。目的：回顾分析骨组织工程人工骨支架材料、构建方式以及种子细胞基础与应用研究。方法：由第一作者检索1994至2013年pubmed数据以及万方数据库相关组织工程人工骨构建方法研究的文献，并进行系统整理、总结、分析结果：理想的组织工程骨支架材料应该具有合适的可塑性及组织强度和吸收降解速度、良好的组织相容性、安全无毒性、良好的材料-细胞界面等，进而可通过骨传导、骨诱导以及骨再生过程完成骨组织的修复与重建。

关键词：

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脱细胞肌腱片促进兔肩袖损伤腱-骨愈合的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2013年第9期27卷 1070-1075页

作者：潘娟刘国明宁良菊罗静聪黄富国秦廷武四川大学华西医院康复医学科成都610041 四川大学华西医院康复医学四川省重点实验室成都610041 四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西医院再生医学研究中心成都610041

目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组织学观察和细胞相容性评价。取成年雄性新西兰大白兔24只,体重... 详细信息

目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组织学观察和细胞相容性评价。取成年雄性新西兰大白兔24只,体重2.5～3.0 kg,随机选取一侧肩关节自冈下肌腱止点处纵向作宽大于正常肌腱50%、长为8 mm的U形缺损,用犬DTSs修复冈下肌腱缺损并重建腱-骨止点(实验组);对侧肩关节不作任何处理(对照组)。术后4、8、12周取两组标本行组织学观察和生物力学测试。结果体外组织学观察示犬DTSs胶原结构保留完整,无细胞残留;细胞相容性实验示成纤维细胞与DTSs良好黏附。生物力学测试示,随时间延长,实验组最大载荷和刚度均呈增加趋势,12周时显著高于4周及8周(P<0.05);除12周实验组最大载荷与对照组比较差异无统计学意义(t=0.969,P=0.361)外,其余各时间点实验组最大载荷及刚度均显著小于对照组(P<0.05)。组织学观察示,对照组可见腱-骨止点的4层结构。实验组术后4周腱-骨界面由肉芽组织填充,少量类似Sharpey纤维连接于腱-骨间;随时间延长肉芽组织界面消失,成纤维细胞、Sharpey纤维、新生软骨和软骨细胞数量增多,腱-骨界面逐渐成熟,但未见位于矿化纤维软骨与非矿化纤维软骨间的潮线。结论经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备的犬DTSs可促进兔肩袖损伤腱-骨愈合,提高肩袖损伤修复的生物力学性能。

关键词：脱细胞肌腱片肩袖损伤腱-骨愈合犬兔

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组织工程人角膜内皮的体外重建及其形态结构

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国际眼科杂志 2010年第2期10卷 225-228页

作者：樊廷俊赵君王晶丛日山杨秀霞史伟云王宜强中国海洋大学角膜组织工程重点实验室中国山东省青岛市266003 山东省医学科学院山东省眼科研究所中国山东省青岛市266071

目的:组织工程人角膜内皮(tissue-engineered human corneal endothelia,TE-HCE)的体外重建及其形态结构。方法:用有限稀释法从HCE细胞系筛选出单克隆细胞(mcHCE细胞),用常规染色体标本制作和核型分类学方法进行核型分析。用羊膜的胰酶... 详细信息

目的:组织工程人角膜内皮(tissue-engineered human corneal endothelia,TE-HCE)的体外重建及其形态结构。方法:用有限稀释法从HCE细胞系筛选出单克隆细胞(mcHCE细胞),用常规染色体标本制作和核型分类学方法进行核型分析。用羊膜的胰酶倒置消化和细胞外基质蛋白包被方法制备去上皮层修饰羊膜(mdAM)。以核型正常的对数期mcHCE细胞为种子细胞,以平铺于24孔培养板孔底的mdAM为载体支架,用200mL/L胎牛血清-DMEM/F12培养液在37℃,50mL/LCO2培养箱中进行TE-HCE的体外重建。用茜素红染色、冰冻切片HE染色、倒置显微镜和扫描电镜观察种子细胞的形态、细胞连接的形成情况、细胞单层的完整性及其与mdAM结合的紧密程度。用透射电镜方法鉴定种子细胞的超微结构以及细胞连接的形成情况。用免疫荧光技术检测种子细胞对不同细胞连接蛋白的表达模式。结果:从非转染HCE细胞系中筛选出了7个核型正常(2n=46)的单克隆细胞株。在启动重建30h后,mcHCE种子细胞在mdAM上形成了完整的细胞单层,细胞密度高达3413/mm2。HCE细胞呈多角形细胞形态,形成了完整的细胞单层,且在细胞-细胞以及细胞-mdAM间形成了多种细胞连接,种子细胞在超微结构上与在体HCE细胞类似,胞质中含有许多线粒体,并具有紧密连接蛋白-1、钙黏蛋白、间隙连接蛋白-43和整联蛋白αv/β5的阳性表达。结论:体外重建的TE-HCE在结构和功能上与在体HCE相似,有望作为HCE的替代物用于临床角膜内皮移植。

关键词：人角膜内皮细胞去上皮层修饰羊膜组织工程体外重建形态结构

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人耳软骨细胞冻存复苏后的体外成软骨能力及体内转归的研究

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组织工程与重建外科杂志 2019年第3期15卷 137-141页

作者：于瑶殷宗琦李丹周广东曹谊林刘豫潍坊医学院山东省潍坊市261042 组织工程国家工程中心上海市200041 上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的以无支架软骨膜片为模型,研究冻存对人耳软骨细胞的细胞活力、增殖和体外/体内软骨再生能力的影响。方法将小耳畸形患者术中废弃的残耳软骨,以胶原酶消化、分离,得到原代软骨细胞。将软骨细胞扩增至第1代(P1)后,分为实验组及对照组... 详细信息

目的以无支架软骨膜片为模型,研究冻存对人耳软骨细胞的细胞活力、增殖和体外/体内软骨再生能力的影响。方法将小耳畸形患者术中废弃的残耳软骨,以胶原酶消化、分离,得到原代软骨细胞。将软骨细胞扩增至第1代(P1)后,分为实验组及对照组。实验组(Exp)以含有FBS和DMSO的冻存液,经程控降温仪和液氮冻存1个月后复苏,高密度接种,制备软骨膜片及可注射软骨;对照组(Ctrl)不经冻存继续扩增至第3代(P3),高密度接种,制备软骨膜片及可注射软骨。通过光学显微镜、CCK-8、活/死细胞染色、HE和阿利新蓝染色等,检测细胞形态、活力、增殖能力及软骨特异基质(ECM)的表达能力。通过每组体外软骨膜片的湿重、体积及生化成分定量检测,确定软骨细胞的体外成软骨能力。将每组软骨膜片制成新生软骨颗粒(可注射软骨),注射至裸鼠皮下(n=5),8周后取材,行大体观察、HE染色和生化成分定量检测,比较每组软骨细胞的体内成软骨能力。结果两组细胞的形态、活力、增殖能力和软骨特异的糖胺聚糖(GAG)形成能力无明显差异。相比对照组,实验组体外再生软骨的湿重及总胶原表达升高;但体内软骨再生能力两组亦无明显差异。结论细胞冻存复苏对人耳软骨细胞的细胞活力、增殖和体外/体内软骨再生能力无明显影响。

关键词：冻存复苏人残耳软骨细胞无支架软骨膜片可注射软骨

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PAMM不影响人脂肪干细胞的成脂分化能力

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生物化学与生物物理进展 2022年第7期49卷 1305-1317页

作者：张明萌王颖梁杰吴洪福史玉仓吴志远饶敏腊彭健愉蒋智文刘新光孙雪荣广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室衰老研究所东莞523808 青岛市市立医院集团输血医学科青岛266011 广东医科大学第二临床医学院东莞523808 广东医科大学附属医院整形外科湛江524001 广东医科大学干细胞与再生组织工程重点实验室东莞523808 广东医科大学生物化学与分子生物学研究所湛江524023

目的PAMM(peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes)是近年来发现的一种在脂肪组织中高表达的分泌因子,但其生物学功能尚不完全清楚。为了给PAMM功能研究提供新线索,本文探讨了PAMM在白色脂肪生成中的可能作用及P... 详细信息

目的PAMM(peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes)是近年来发现的一种在脂肪组织中高表达的分泌因子,但其生物学功能尚不完全清楚。为了给PAMM功能研究提供新线索,本文探讨了PAMM在白色脂肪生成中的可能作用及PAMM调节的下游基因。方法利用成脂分化液或“成脂分化液+IL-1α”建立人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的成脂分化和成脂抑制模型。用si RNA干扰和过表达质粒转染的方法抑制或上调PAMM表达水平。采用基因芯片、m RNA测序及定量RT-PCR检测基因的m RNA表达水平,采用蛋白质印迹法评价蛋白质表达水平,用油红O染色检测脂滴沉积。结果随着ADSCs向白色脂肪分化,PAMM表达水平明显上升,而随着成脂抑制,PAMM表达明显下降。在ADSCs中沉默或过表达PAMM后,再进行成脂分化。结果发现,上调或下调PAMM对脂滴形成及成脂相关基因的表达均无明显影响。类似地,在高度分化的脂肪细胞中敲低PAMM表达,对细胞形态及脂滴含量亦无明显影响。本文进一步利用si RNA干扰、m RNA测序及q RT-PCR,筛选和验证了一批受PAMM调节的下游基因及功能性基因集,包括SULF1、A2M基因及调节P53稳定性的基因集等。结论PAMM可作为白色成脂分化的标志基因,但其自身对白色脂肪细胞生成无明显影响,本研究筛选出来的PAMM下游基因及基因集,可为进一步研究PAMM的功能提供新线索。

关键词： PAMM 脂肪细胞成脂分化干细胞脂肪因子

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嵌入式3D打印多孔硅胶义眼台及其表面修饰

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南方医科大学学报 2023年第5期43卷 783-792页

作者：赵宏王艺霖汪艳芳宫海环殷俊飞扬崔晓军张剑凯黄文华广东医科大学基础医学院人体解剖学教研室东莞市干细胞与再生组织工程重点实验室广东东莞523808 南方医科大学基础医学院人体解剖学国家重点学科广东省数字医学与生物力学重点实验室广东省医学3D打印应用转化工程技术研究中心广东广州510515 南方医科大学附属广东省人民医院广东省医学科学院广东广州510080

目的制备个性化多孔硅胶义眼台并探讨表面修饰对硅胶义眼台性能的影响。方法检测支撑介质的透明度、流动性及流变学性能,确定硅胶的最适打印参数。扫描电镜分析硅胶表面修饰前后的形貌变化;水接触角评估硅胶表面的亲疏水性;压缩试验测... 详细信息

目的制备个性化多孔硅胶义眼台并探讨表面修饰对硅胶义眼台性能的影响。方法检测支撑介质的透明度、流动性及流变学性能,确定硅胶的最适打印参数。扫描电镜分析硅胶表面修饰前后的形貌变化;水接触角评估硅胶表面的亲疏水性;压缩试验测试多孔硅胶的压缩模量;将猪主动脉内皮细胞(PAOEC)与多孔硅胶支架共培养1、3、5 d后测试多孔硅胶的细胞相容性;大鼠皮下植入试验评估多孔硅胶的体内局部炎症反应。结果确定多孔硅胶义眼台的最适打印参数为:支撑介质4 wt%、打印压力为1.0 bar,打印速度为6 mm/s;扫描电镜显示硅胶表面聚多巴胺、胶原蛋白修饰成功,修饰后的硅胶表面亲水性显著提升(P<0.05),且压缩模量无显著变化(P>0.05);细胞毒性及增殖实验结果显示:修饰后的多孔硅胶无明显细胞毒性且能够促进PAOEC的黏附和增殖(P<0.05);植入大鼠皮下后局部组织未见明显炎症反应。结论嵌入式3D打印技术能够制备孔隙均匀的多孔硅胶义眼台,表面修饰后的硅胶亲水性增加、生物相容性良好,为3D打印个性化义眼台的性能研究与临床应用奠定基础。

关键词：义眼台嵌入式3D打印硅胶聚多巴胺胶原蛋白

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RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2015年第1期17卷 79-82页

作者：刘洪光屈宝泽陶贵周黄建华辽宁医学院附属第一医院心内科锦州121001 辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室锦州121001

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-... 详细信息

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+最佳干扰序列慢病毒转染)。荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化。结果与对照组比较,ox-LDL组和阴性转染组p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05)。与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05)。结论干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用。

关键词： RNA干扰脂蛋白类 LDL 内皮细胞细胞骨架肌动蛋白类 rho相关激酶类

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