目的研究大鼠坐骨神经损伤后近、远侧断端组织中微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)以及磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tension protein homologue,PTEN)的表达情况,及其与周围神经损伤修复的相关性,以期为临床诊治周围神经...
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目的研究大鼠坐骨神经损伤后近、远侧断端组织中微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)以及磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tension protein homologue,PTEN)的表达情况,及其与周围神经损伤修复的相关性,以期为临床诊治周围神经损伤提供新靶点。方法取SPF级雄性SD大鼠96只建立坐骨神经损伤模型,分别于术后0(术后即刻)、1、4、7 d处死24只大鼠,无菌条件下取坐骨神经近、远侧断端组织。实时荧光定量PCR检测miR-221表达,Western blot、免疫荧光染色检测PTEN蛋白表达,采用双荧光素酶报告基因验证miR-221与PTEN的调控关系;同时结合透射电镜观察神经组织超微结构。结果实时荧光定量PCR、Western blot及免疫荧光染色检测示,术后大鼠坐骨神经近、远侧断端组织中miR-221相对表达量均逐渐增加,PTEN蛋白相对表达量均逐渐减少,术后各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。术后1、4、7 d近侧断端miR-221相对表达量均显著高于远侧断端,PTEN蛋白相对表达量均显著低于远侧断端,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因示PTEN为miR-221作用靶点。透射电镜观察示随术后时间延长,雪旺细胞增殖及轴突、髓鞘溃变逐渐增加;术后1 d近、远侧断端无明显差异,4、7 d时近侧断端雪旺细胞增殖较远侧断端增多,轴突、髓鞘溃变程度降低。结论大鼠坐骨神经损伤后,miR-221表达上调,靶向调控PTEN表达降低,进而产生近、远侧断端miR-221及PTEN表达差异,这一现象可能对促进周围神经损伤后修复发挥一定作用。
目的比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异。方法检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2%DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235a表达量的变化。结果连续药物暴露120 h后结果显示,丁酸钠对K562细胞增殖有抑制作用,48~72 h细胞阻滞于G0/G1;96~120 h细胞阻滞于G2/M期,120 h TMB阳性率为(22.02±2.27)%。Hemin对K562细胞的增殖及细胞周期均无影响;120 h TMB阳性率为(90.83±2.69)%。DMSO处理的K562细胞其G0/G1期比例增多,但暴露时间大于72 h时,细胞增殖与对照组差异无统计学意义;120 h TMB阳性率为(1.84±0.48)%,相较于对照组阳性率(2.89±0.18)%差异无统计学意义。丁酸钠和Hemin处理120 h后血型糖蛋白A(CD235a)的表达水平较对照组和DMSO处理组升高,且2组间差异无统计学意义。DMSO处理组CD235a与对照组差异无统计学意义。结论通过综合比较红系分化诱导前后K562细胞增殖、细胞周期、TMB阳性率及CD235a表达量的变化发现,Hemin是较丁酸钠和DMSO体外诱导K562红系分化更有效的化学试剂。
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